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标题:[求助]大鼠树突状细胞的分离和培养方法

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发表于 2012-3-7 08:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]大鼠树突状细胞的分离和培养方法



求助SOS！！！大鼠树突状细胞的分离和培养方法
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-3-7 08:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=2&id=187418&sty=2&age=0&tpg=1&ppg=1#187418')

希望有帮助
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发表于 2012-3-7 08:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
与其小鼠培养方法一样，可用小鼠的骨髓去红细胞后加细胞因子：IL-4、GM-CSF隔天换液，7-9天可以收获DC，再在光镜及电镜下观察，用大鼠的特异性标记物及DC的标记物进行鉴定。我已经成功培养出来了。
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moonlight45[使用道具]
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 小中大

不知你想从哪里分离，简单的从血和骨髓中分离，还可从脾、淋巴、肝脏等处分离，关键是在梯度离心后，想办法去除吞噬细胞和淋巴细胞。
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发表于 2012-3-7 08:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 moonlight45 于 2012-3-7 08:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

不知你想从哪里分离，简单的从血和骨髓中分离，还可从脾、淋巴、肝脏等处分离，关键是在梯度离心后，想办法去除吞噬细胞和淋巴细胞。

我想从肝脏中分离,不知各位前辈有何高见.
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发表于 2012-3-7 08:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是从骨髓中分离的，可以象血液一样分离出单个核细胞PBMC，也可直接破坏红细胞后加细胞因子IL-4、GM-CSF隔天换液7-9天即可得到DC。经淋巴细胞分离液分离的PBMC在培养箱中培养3小时后祛除非贴壁细胞即可除去淋巴细胞，加细胞因子IL-4的目的是诱导PBMC向DC方向转化，IL-4阻止向巨噬细胞转化，也就达到祛除巨噬细胞的目的。
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发表于 2012-3-7 08:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 cocacola 的帖子

非常感谢你雪中送炭！我还想请问你：1 如果我用大鼠脾细胞分DC并且需要DC具有抗原递呈功能，需要用细胞因子刺激吗？2 怎么在光镜下观察DC,怎么判断DC长得好不好，活性怎样？
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cocacola[使用道具]
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发表于 2012-3-7 08:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用大鼠脾细胞分DC并且需要DC具有抗原递呈功能，不需要用细胞因子刺激，因为DC本身具有递呈抗原的能力，只需把抗原与DC按一定比例共同培养一定时间即可；在光镜下观察DC,在高倍镜下，可看到树突壮结构；判断DC长得好不好，要看DC在细胞中的比例；活性要用流式细胞仪检测表面标记物及做淋巴细胞增殖实验。
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-3-7 08:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是我找到的最经济的培养方法

Histochemistry and Cell Biology
© Springer-Verlag 2002
DOI 10.1007/s00418-002-0384-4

Analysis of maturation states of rat bone marrow-derived dendritic cells using an improved culture technique
Oliver Grauer1, 3, , Gisela Wohlleben1, Silvia Seubert1, Andreas Weishaupt1, Eckhart Kämpgen2 and Ralf Gold1
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