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标题:[求助]min6细胞培养特性

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发表于 2012-3-7 10:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]min6细胞培养特性



本人刚开始培养MIN6细胞,不知道这种细胞的消化与别的细胞有何不同?看到有的帖子说这种细胞得养6天才能消化传代,亦有帖子说培养第三天就必须传代,不知该如何处理(我的细胞刚复苏的)?
此外关于这个细胞的特性了解甚少,请教各位哪里有比较详细的这种细胞的培养特性等相关信息?
盼诸位高手多多指教,在下不胜感激!
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养过一段时间的min6细胞，这种细胞的形态为近方形的瓦块状，它喜欢聚堆生长，有一定的密度依赖性，你种的越稀，它就越难长起来，种的密的话长的比较快，我一般1：3传代，6天后传代，传代时汇合度70－80％（举例： 接种 8x10^5 细胞到60mm的皿中, 细胞需要1.5-2天铺展，3天后汇合度达30-40%），培养时一定注意血清要好（本人有惨痛教训），还要加2－ME，如果是用来作糖刺激下胰岛素分泌实验，注意用低糖培养基培养。
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发表于 2012-3-7 10:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 hot_hot_hot 的帖子

我的细胞刚复苏，长的很慢。我后期也是要做胰岛素分泌试验，想请教一下你是从哪一步开始换低糖培养基进行试验？
我现在的细胞每天都能长点，只是发现刚换液的培养瓶里总有贴壁的黑点，低倍镜下像针眼，培养两天后黑点逐渐减少，似乎不怎么影响细胞生长，但我目前怀疑是不是血清的问题，不知道高手的惨痛教训是否跟我现在的状况一样？？？？？担心中。。。
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
复苏细胞状态稳定后，先冻存一批，然后的实验就可换用低血清培养基。
GIBCO的血清应该还好，贴壁的黑点应该是细胞碎片，由于细胞状态不佳造成的，需进一步观察。
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发表于 2012-3-7 10:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
诚挚的感谢
我现在 已冻存了一批，目前细胞生长较快，2，3天传一次代，观察培养瓶底壁见细胞大部分单层聚堆生长，还是有一些则是成团生长，请问这是正常的吗？
此外对于胰岛素释放试验要求用成团的 细胞来做还是要用单层细胞来做？现在发现细胞长满后逐渐会聚成团状，但是并不能仅存在成团细胞，往往是成团的 和单层的混合在一起，这样做胰岛素释放试验是不是有影响呢？
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发表于 2012-3-7 10:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有影响，MIN6是这样的，成团聚集生长。你可以在消化的时候吹打的充分一些，同时在不影响检测的条件下接种密度适度降低。
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发表于 2012-3-7 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常谢谢HONWAG！！！！！！！！
我的细胞刚复苏，长的很慢。我后期也是要做胰岛素分泌试验，想请教一下你是从哪一步开始换低糖培养基进行试验？
我现在的细胞每天都能长点，只是发现刚换液的培养瓶里总有贴壁的黑点，低倍镜下像针眼，培养两天后黑点逐渐减少，似乎不怎么影响细胞生长，但我目前怀疑是不是血清的问题，不知道高手的惨痛教训是否跟我现在的状况一样？？？？？担心中。。。

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请教如果要做胰岛素分泌试验选用MIN6细胞还是INS1细胞比较合适呢？谢谢
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教如果要做胰岛素分泌试验选用MIN6细胞还是INS1细胞比较合适呢？谢谢

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MIN6是分泌功能最强的，INS1的分泌功能要差一些，也可以
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的各位，大家好！
我是新手，正准备养MIN6细胞，但还没有该细胞，不知道楼上的各位是否愿意友情赞助提供，付费也可以，本人是重庆医科大学的，如能提供，将不胜感激！
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发表于 2012-3-7 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你们用过小鼠胰岛素(Insulin)ELISA试剂盒做MIN6细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌实验吗？效果怎么样？我做的结果很不理想，所以现在都不知道是细胞不分泌胰岛素的问题，还是试剂盒的问题，请大家帮忙给点意见好吗？
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