[求助]关于眙盼蓝、MTT、H3测定细胞增殖程度的问题！

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标题:[求助]关于眙盼蓝、MTT、H3测定细胞增殖程度的问题！

00无名指00[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

近期看文献发现国外一些文献仅采用眙盼蓝计数法测定细胞增殖程度，多本书上明确说明这是一种很不准确的方法，可是文章照样能发在BLOOD等杂志上，对此本人有些想不通。本实验室也有人据此而仅采用眙盼蓝计数法测定细胞增殖程度，做药物对细胞株生长的影响时，我想细胞增殖程度应该是比较重要的指标，怎可马虎行事。请高手指点迷津！

toy[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 00无名指00 于 2012-3-7 10:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

近期看文献发现国外一些文献仅采用眙盼蓝计数法测定细胞增殖程度，多本书上明确说明这是一种很不准确的方法，可是文章照样能发在BLOOD等杂志上，对此本人有些想不通。本实验室也有人据此而仅采用眙盼蓝计数法测定细胞增 ...

用普通血球计数板计数增殖细胞的数量，只要检测的细胞样本数量不是非常大，只要能够数得过来，而且一般来讲，都是熟练者计数的话，应该是比MTT法要准确的多。

据了解，国外许多档次不低的杂志都是认可这种经典或传统计数细胞的方法的。

HP007[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是的，只要idea巧妙有创意，而用于证明他们的方法都是次要的！

windy+++[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

眙盼蓝、MTT确实不是一个好的方法，国外的许多杂志已不太使用，国内还认可的。关键是整篇文章的思路和结构，好的idea是很重要的。我的一个师姐的文章就被提出眙盼蓝、MTT的问题，但最后编委认为整篇文章的思路很好，也就不计较眙盼蓝、MTT的问题了。实属兴运。杂志Cancer Research Therapy

dog002[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

国内由于实验条件的问题，应用H3的还是不多，而以MTT为主，以我的经验眙盼蓝计数法误差确实很大，所以不知道bengbu_bli的观点源自何处，另外如果有一个好的idea，如果不能用好的方法去证实，实在是一种遗憾，当然发不发还是要看编辑了。今天听说乳酸脱氢酶法检测细胞增殖能力，我没见过这方面的文章，有没有人有相关资料？

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

虽然眙盼蓝不是很精确的计数,但它也可以反映到细胞的增殖情况,而且使用这种计数方法时不可将细胞稀释太厉害,要保证4个大方格的总细胞数在二三百左右,所以计数前要对细胞密度有一个初步的估计,再选择一个合适的稀释度.

misswu61[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

个人的体会:H3测定需要特殊的条件,可不是个个学校各个实验室都有.可以在基本条件都摸好了后, 测定一两次,做为一个重要的参考.
而传统计数方法也有局限, 特别是如果不用台盼蓝分辨细胞的情况,在后期细胞死亡增多的情况下, 传统计数法得到的增殖曲线会与实际情况产生较大的偏离.
我在做MTT测定中,觉得最容易引起误差的一个问题, 是96孔板里溶液在培养过程中容易挥发, 特别是靠近边缘的两轮,在测定时间超过24小时的情况下, 存在明显的挥发现象, 测定数据与中心孔有较大的出入. 所以做的时候要求培养箱里的湿度条件控制的比较好, 要不就需要弃取周围两轮孔的数据.
另外,有些时候在需要加入不溶性颗粒状药物的情况下测定细胞的增殖情况, MTT法就比传统计数法或台盼蓝法效果好, 测定速度快, 不容易引起误计.
总的来说, 我认为在基本固定培养条件的情况下, 可以考虑一次性的多选择几种方法来确定细胞增殖的特征曲线(特别是刚买回的细胞的第一次测定), 得到相互修正的关系,而以后在应用中可以根据具体情况采用一种比较方便的方法来做,特别是一些摸索性的实验,都用H3做, 那除非你自己就是核医学部的,天天去求人也挺烦.

chuntian1983[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

就我的感觉和自己的实验过程中的得失来看，眙盼蓝记数，重复性和稳定性相差比较大，同一样本在重复记数时差别比较大，主要是稀释度的问题，细胞过多（一个大格超过100）或太少（低于20－30），其记数的可信度就比较差。MTT的方法不够敏感，而且如果不是贴壁细胞的话，在离心后去除培养基是容易丢失细胞，造成孔间平行度比较差。3H-TdR的敏感度非常好，但是重复性不是特别好，孔间差距比较大，而且不同时间的重复试验时CPM值可以相差比较大。可以通过寻找比较好的细胞浓度，确定掺入时机（细胞处于对数生长期）和掺入时间来弥补。
至于在比较高档次的杂志发表文章可能与作者的 ideal和实验室的背景，boss的知名度和有关系，同时审稿者的态度很有关系，我们实验室投稿的稿件在回复的意见中就有完全相反的说法，此外可以拒绝日本人审稿，日本人对来自中国的作者特别不友好，其次澳洲的审稿人有部分也不十分友好！！老外也有关系学的。

rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以考虑使用ATP生物荧光技术，其敏感性，检测线性范围以及特异性均较以上三种方法为优。其线性范围为50~100000个细胞/well。

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-3-7 10:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

。。。。今天听说乳酸脱氢酶法检测细胞增殖能力，我没见过这方面的文章，有没有人有相关资料？。。。

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我看到的乳酸脱氢酶法（LDH）是测定细胞活性的指标；

乳酸脱氢酶是细胞能量代谢（糖酵解）中的一个重要的酶，可以催化乳酸生成丙酮酸，同时产生ATP。如果细胞死亡，破裂胞膜那么LDH也就从胞浆中释放出来，因此LDH是质膜完整性的标志，也是检测细胞活性的指标，LDH升得越高就说明细胞损伤得越严重。
这是我们也就不难理解在急性心肌梗塞或肝炎时为什么要检测LDH了吧！

乳酸脱氢酶法（LDH）有专门得试剂盒，应该是检测细胞活性的一个较好而且方便的指标。

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