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标题:[求助]请教细胞缺氧问题！

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发表于 2012-3-7 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请教细胞缺氧问题！




我在养肿瘤细胞，需要造成细胞缺氧状态。我查了一下文献，多是用通氮气法，但是我们实验室没有三腔培养箱，而且我要对其缺氧程度进行定量分析；另外，还有用一些重金属的，但是会抑制肿瘤生长，对实验结果产生一定程度的影响。不知有哪位高手能赐教一下，不甚感激！
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发表于 2012-3-7 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用CoCl2来诱导细胞缺氧，我们就是用这个方法来研究肿瘤治疗的，目前从对照组的情况看，尚未发现有肿瘤抑制作用。至于有好的培养箱那是最好了，这样可以控制氧的浓度，达到准确的定量。文献上两中方法都有人使用。
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发表于 2012-3-7 14:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用CoCl2来诱导细胞缺氧，我们就是用这个方法来研究肿瘤治疗的，目前从对照组的情况看，尚未发现有肿瘤抑制作用。至于有好的培养箱那是最好了，这样可以控制氧的浓度，达到准确的定量。文献上两中方法都有人使用。

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可否具体讲一下CoCl2来诱导细胞缺氧的原理和方法！！

谢谢！
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发表于 2012-3-7 14:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我向别的实验室学了一个方法：自制一个密闭容器（干燥器做成），容器上有橡胶塞，通两根皮管。利用空气和氮气分子量的差别，使出气管口低，排出空气，同时用测氧仪测氧浓度。
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发表于 2012-3-7 14:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我向别的实验室学了一个方法：自制一个密闭容器（干燥器做成），容器上有橡胶塞，通两根皮管。利用空气和氮气分子量的差别，使出气管口低，排出空气，同时用测氧仪测氧浓度。

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能否再具体介绍一下。两根皮管是否分别接氧气和二氧化痰？如何保持37度的温度？
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发表于 2012-3-7 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我向别的实验室学了一个方法：自制一个密闭容器（干燥器做成），容器上有橡胶塞，通两根皮管。利用空气和氮气分子量的差别，使出气管口低，排出空气，同时用测氧仪测氧浓度。

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能否再具体介绍一下。两根皮管是否分别接氧气和二氧化痰？如何保持37度的温度？
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发表于 2012-3-7 14:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上述的方法在三军大有这方面的资料，可具体在文献上也阐述不清，本人也要做缺氧方面的课题，查了很多文献，国外有专门的可控制的培养箱（英国的一个公司有买的，但是价格很贵的），所以我想也是通过自制的方法来控制氧浓度。
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发表于 2012-3-7 14:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我自己做了一个缺氧的装置，用的是密封罐，超市有卖，然后装两个气门芯，一个通氮气，一个出气，要保持密闭性好，因为通一定时间后要放如附箱的。
很多文献上都有介绍的
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发表于 2012-3-7 14:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可否具体讲一下CoCl2来诱导细胞缺氧的原理和方法！！

谢谢！！

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在常氧条件下，细胞内的虽然也有HIF持续性表达，但是同时PHD会利用O2做底物，将HIF降解。而缺氧条件下，O2浓度不足，就抑制了PHD对HIF的羟化使得HIF不被降解。cocl2在常氧条件下模拟缺氧，由于二价钴离子可通过置换PHD 辅助因子二价铁离子阻止HIF- 1a被羟基化，同时能影响 pVHL 结合 HIF-1aODD，因此二氯化钴可稳定细胞内HIF- 1a的表达,已达到和缺氧条件下类似的结果。

方法在文献中有，我看了一些，可以结合细胞毒性实验，一般的cocl2浓度好像是200uM左右，作用时间6小时以上，可以自己试时间梯度和浓度梯度。
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发表于 2012-3-7 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我这里有篇讲co离子模拟缺氧原理的文章，有兴趣的看看吧。

看完之后回答一个问题。

co离子诱导的细胞缺氧是否影响外界环境中的PO2,PCO2,pH呢？？

有实验证据的请贴出来……
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