小中大[求助]求助流式分析 FITC/PI双染 检测凋亡
各位同仁好，我最近在做FITC/PI双染检测凋亡，但是结果一直不理想，图也很难看。现在老板等着结果，比较急，希望懂得朋友帮忙分析下！非常感谢！！！
我用的是BD的试剂，下面是protocol：
1. Wash cells twice with cold PBS and then resuspend cells in 1X Binding Buffer at a concentration of 1 x 10^6 cells/ml.
2. Transfer 100 ?l of the solution (1 x 10^5 cells) to a 5 ml culture tube.
3. Add 5 ?l of FITC Annexin V and 5 ?l PI.
4. Gently vortex the cells and incubate for 15 min at RT (25°C) in the dark.
5. Add 400 ?l of 1X Binding Buffer to each tube. Analyze by flow cytometry within 1 hr.
注：离心是1000rpm，5min。消化用的是0.25%胰酶（不含EDTA），消化时间控制还算好。操作比较轻柔。
细胞株为胰岛细胞（属贴壁细胞），4是con，5 ，6为药物处理组，浓度递增。根据文献报道，浓度越高凋亡越多，但是现在结果是相反的，而且con的凋亡一直无法控制在5%以下（光镜下观察细胞状态佳）。根据光镜下观察，5 和6组的细胞形态有明显改变，细胞体积变小，但是流式结果却反应不出来。流式结果为早期凋亡是逐渐下降，晚期凋亡和坏死是逐渐上升的。本来是怀疑处理时间过长，导致进入晚期了，现在已经缩到40min了。
以下是最近刚做的一次流式结果，处理时间40min，
