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标题:[求助]小鼠原代肝细胞贴壁不牢、不成多边形

qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]小鼠原代肝细胞贴壁不牢、不成多边形



本人分离的小鼠原代肝细胞数量足够，18million/liver。但是贴壁不牢，而且不像其他原代肝细胞那样具有典型的多边形形态。请各位赐教！
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也想问下小鼠原代肝细胞有什么简单有效的分离培养方法？两步法灌流太贵太麻烦了
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也提肝细胞，也是不容易贴壁，也不像文献上说的具有典型的肝细胞形态，但是经鉴定是肝细胞，所以就打算悬浮养，或者作铺板，
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xevin[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

贴壁的肝细胞本来就不是多边形的,是圆形或椭圆形的.贴壁是不好,如果用塑料培养皿要好一点,加点地米和胰岛素会好一点.
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，地塞米松和胰岛素你都怎么加呢？直接加在培养液？加多少？
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加在培养液中,剂量得根据你的实验目的来看,给你一篇文献.你也可以自己查一下.
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想知道地塞米松，胰岛素摩尔浓度怎么换算？因为临床应用的地塞米松好象都是以毫克/毫升为单位？
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位提供的宝贵经验！我的培养基中含有hydrocortisone和Insulin，使用的是Collagen I 包被的塑料平板，但是小鼠肝细胞生长不好。细胞呈圆形或椭圆形，昨天第13天只剩下约30%细胞贴壁，苔盼兰染色全部是死细胞。遗憾的是之前没有染色，不知道什么时候开始细胞已经死亡。我培养小鼠原代肝细胞的目的是做转染，目前看来培养还有问题，希望诸位继续赐教！
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发表于 2012-3-7 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想你是没经过纯化吧，不要离心那么多次，会伤了细胞，我用的是30%的PERCOLL，效果还好，你为什么要养那么多天呢，我大概养3-7天就用作实验了，我作了台盼兰染色还好，95%的成活率，你可以试一下
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有我想请问你的怎么铺板的，从哪买的胶原酶多少钱，铺板麻烦吗，具体你用的步骤是什么可以交流下吗，
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