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标题:[求助]HUVEC细胞形态改变,请高手指点

kewanqi2011[使用道具]
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[求助]HUVEC细胞形态改变,请高手指点



最近在养脐静脉内皮细胞HUVEC,用的hyclone的DMEM培养基和四季青的胎牛血清,血清浓度10%,加双抗。细胞长的很快,基本1天半消化换液,用索莱宝的胰酶1ml消化1分钟左右,1瓶传3瓶。每次传代时看细胞基本上都长满了瓶底甚至感觉长的堆起来了···但是感觉传代几次之后细胞形态跟原来有点改变,多了一些圆形的细胞。

图1是我从别人刚拿来细胞时候的样子,看上去还不错。
图2是传了3、4代之后的样子,就有些圆形的细胞了。有人说是消化过度,也有人说是细胞长老了皱缩起来,我也拿不准是那种情况。
图3是放大图,想问下细胞里面的那种小白点点是什么?是细胞碎片还是污染呢?


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小鱼鱼[使用道具]
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圆形细胞应该是死细胞。
你的细胞长得太密了,传代时可以少留些细胞。
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yes4[使用道具]
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传代的时候我都舍不得丢细胞···觉得1传3应该是可以了的。那下次我再丢掉部分细胞看看。

另外还要问细胞的那些小白点是什么呢?我另外一种细胞也有这种小白点,能快速运动向细胞靠近,别人说是支原体污染···保险起见把细胞仍了。这瓶里面也有,但是我观察了很久小白点都没有运动迹象,所以拿不准是不是污染?不过细胞还是长的很快的····
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小鱼鱼[使用道具]
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如果小白点不会动而且不会增多的话就应该不是污染。
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one[使用道具]
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5
 

我也看到过这种情况,应该不是污染,可能是本身细胞的高折光性的东西吧,你看你第1张图也有啊
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vvmmoy[使用道具]
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不能完全排除污染情况,往往出现污染必须在显微镜下仔细观察才能断定
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7
 
看小白点是否增多,如有增多,很有可能就是污染了
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nn255[使用道具]
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8
 
LZ 是HUVEC的细胞株吧,我们也有遇到这种情况,原代好像没有。
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qhyu[使用道具]
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9
 
细胞碎片比较多,但是应该还是好的,建议在传代前,吸弃旧培养后,用温的PBS冲洗下细胞之后,在搁酶消化,离心后再种植,细胞密度有点密!
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woshituzhu[使用道具]
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我们用的是ECM+5%FBS+1%ECGS培养基,貌似DMEM不给力的,你的细胞的确长得太密了
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