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标题:[求助]杂交瘤细胞的培养

summerxx[使用道具]
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[求助]杂交瘤细胞的培养



请教各位,偶现在培养一批杂交瘤细胞,奇怪的是细胞取来是圆润,饱满,用自己实验室条件(1640+20%JRH血清+双抗和谷胺),细胞增值,但细胞贴壁多,悬浮少,且无论悬浮的还是贴壁的,细胞边缘不是很圆润,有些毛糙,局部有点突出或缺损,但是活的细胞。这是什么原因呢?还有细胞很多黏附成团,我是不是应该换液时把细胞团吹打开呢?杂交瘤细胞是不是象骨髓瘤细胞一样,密度依赖性的,密度要维持多少适宜呢?
偶第一次养这种细胞,问题多多,谢谢各位
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jrwyyplt[使用道具]
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我现在也在养杂交瘤细胞,不过现在状态还不错,他们现在还在96孔里,还没有转移到24孔里。在96孔里他们聚集成团状,我今天看了一下,密度太小了,还不适合转移到24孔里。
希望今后能和多多交流。
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glass[使用道具]
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细胞密度达到多少才可以转到24孔板阿。谢谢指点。
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xevin[使用道具]
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细胞成团是不是培养液的Ca、Mg离子浓度高了哦,或者血清的浓度高了点,我养的杂交瘤都用很低浓度的血清。
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我们是当杂交瘤细胞长到96孔板的四分之一时做ELISA检测,阳性的就转入24孔板培养.先是一个孔转一个孔.状态好了再扩大培养.
  Zoe所说的可能有四种情况,一可能是你的血清不适合你的杂交瘤细胞,你是从融合时就用的这个血清还是从别人那取来的杂交瘤细胞重新用的血清.杂交瘤细胞对血清的要求较高.
 第二你可能是没有加入HT,如果你是从别人那取来的杂交瘤细胞,你要问清楚他的HT的浓度是多少.可以剃度稀释漫漫的减少.
 第三,可能就是你说的密度问题,杂交瘤细胞是有一定的密度依赖性的.如果你一个视野看不到几个细胞,状态也不好,你可以考虑一下加入适量的饰养细胞.饰养细胞会分泌一些杂交瘤细胞生长所需的生长因子.另外成团的你没有必要吹开,没什么影响.
 第四,你说的细胞边毛毛的,我想也有可能是你的细胞有点长过了,我不知道你是用什么养的,如果密度很大,应该传一下代.
 我做杂交瘤细胞半年了,希望能和大家长交流.
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TNT[使用道具]
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希望同行交流一下杂交瘤细胞与293细胞培养的经验.最近在养293,状态时好时坏.
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moonlight45[使用道具]
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如果是克隆的话,细胞长到在96孔板肉眼可见就可以转孔了
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moonlight45[使用道具]
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8
 
你说的细胞边毛毛的,我想也有可能是你的细胞有点长过了
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杂交瘤这种情况很正常
你要用高倍镜看看,细胞内的小黑点是否在边缘的较多,大小如何?
一般老细胞都是边缘有很多大的黑点,先前这些黑点都是在细胞中央,而且较少
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moonlight45[使用道具]
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你养的杂交瘤两个亲本细胞株是?
有些细胞株本生就是悬浮的,或是半悬浮的。在生长很快的时候细胞往往是悬浮成团的
不过这要看细胞株了,我养的兔骨髓瘤细胞和兔脾细胞的杂交瘤,有时候筛选的细胞株就是你说的那种情况,你用的培养基怎么配制的?
要是细胞长得挺快,估计不会是培养基的问题
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moonlight45[使用道具]
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你的杂交瘤细胞的亲本细胞株是哪两个?
像骨髓瘤细胞株杂交的应该是悬浮的,或是半悬浮的(吹一下就下来)
杂交瘤不稳定的话有时是会分化成那种贴壁细胞的
你说原来是圆润,饱满的,是不是在24孔或是6孔板里养的?
杂交瘤细胞往往是在扩大到dish中或是T150中会发生形态上的改变的
还有一种可能是培养液跟原来不一样了
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