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标题:[求助]HepG2细胞难以消化

eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]HepG2细胞难以消化



各位大侠：
我养的HepG2细胞难以消化，用的0.25%胰酶（Gibco），放入培养箱温育近1小时，不知道是什么原因？
奇怪的是，我的一位师兄养的是同样的细胞，用同样的方法同样的胰酶，只需10分钟温育时间，不知道各位有何高见。
谢谢！
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remenb[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

0.25%+0.02%EDTA应该很快消化。
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join[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们以前消化HepG2细胞时在培养箱中放2min后有细胞间隙，3~4min后间隙变大细胞开始变圆。HepG2细胞是比其他细胞是稍微难消化一些，用玻璃培养瓶培养的话会比塑料培养瓶好消化一些，不过貌似生长状态要差些
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我前几天养的胰腺癌细胞也不好消化,不知道是什么原因,别的细胞都比较好消化,就它不好消化.碰到的情况跟你差不多,你注意别让它长的太挤了,另外在胰酶中加点EDTA效果也会很不错
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
消化前将细胞用PBS多洗几次，彻底去掉血清，消化会好很多。

————————————————————

同意......
其中一次的PBS在孵箱多放一会儿......
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qhyu[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近也在养HepG2细胞，也是用的0.25%的胰酶，倒去旧的培养基以后用D-Hanks液洗3遍，然后加入1ml胰酶（50ml培养瓶），但是我不放在培养箱中，直接镜下观察，约2min后，可见细胞间隙增大，细胞稍微变圆。此时倒去胰酶，加含血清培养基，吹打即可。
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的酶是不是配制了放很长时间啊？时间长了酶的效果会差一些！
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-3-12 13:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上的观点，如果胰酶存放时间很长的话最好冻起来，另外在配的时候加1，2滴1M NaOH。顺便说一句，如果酶没问题，一个小时还没消化下来，细胞也该扔了。
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发表于 2012-3-12 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胰酶调PH了吗
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发表于 2012-3-12 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也遇到同样的问题了，每次都是胰酶5分钟，消化两次才行。。
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