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标题:[求助]胰酶的配制

爱老虎游tt[使用道具]
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发表于 2012-3-12 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]胰酶的配制




请问各位战友：书上讲胰酶的配制是头一天配好，放在冰箱过夜，并不时搅拌，第二天再过滤，是不是胰酶的溶解很困难？但是我用D-hank's配制胰酶（0.25克溶于100ml），怎么一下子就溶解掉了？
还有就是，冰冻在－20度的胰酶可以存放多久呢？
拜托指教！
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-3-12 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胰蛋白酶是一种黄白色粉末，易潮解，应放置冷暗干燥处保存。胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散。胰酶对细胞的分离作用与细胞的种类和细胞的特性有密切关系。一般来讲，胰酶浓度大、作用温度高、作用时间长，对细胞分离能力也大，但超过一定的限度会损伤细胞。胰酶溶液在pH8.0，温度为37℃时，作用能力最强。
注意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力。因此，胰酶溶液常用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks’ 平衡盐溶液配制成0.25%溶液。消化细胞时，加入一些血清或含血清的培养液，或胰蛋白酶抑制剂能终止胰蛋白酶对细胞的消化作用。

胰蛋白酶溶液配制：
（1）称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许D-Hanks 平衡盐溶液（pH7.2 左右）调成糊状，然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀，置室温4 小时或冰箱过夜，并不断搅拌振荡；
（2）次日，先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌，分装入瓶中，低温冰箱保存备用，常用浓度为0.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右。
保存条件：配制好的胰蛋白酶溶液必须保存在-20℃冰箱中，以免分解失效。


求助前请试着用屏幕上方的“search”找找有没有答案！也许您会满意地发现：原来细胞版有这么多好东西！

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发表于 2012-3-12 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

与我同做试验的某位用国产的胰酶时，也很好溶解，很好滤。我的GIBCO的就有许多不溶，开始我还以为坏掉了呢。
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-3-12 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问各位战友：书上讲胰酶的配制是头一天配好，放在冰箱过夜，并不时搅拌，第二天再过滤，是不是胰酶的溶解很困难？但是我用D-hank's配制胰酶（0.25克溶于100ml），怎么一下子就溶解掉了？
还有就是，冰冻在－20度的胰酶可以存放多久呢？
拜托指教！

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请教一下，你的D-Hanks是在哪里买的，多少钱？
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发表于 2012-3-12 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

D-Hanks很好配的，都是一些常用试剂，为什么要买呢
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-3-12 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是自己配制的D－hank's.
还有，我后来问了一位战友，他说国产的胰酶是不好溶解，我用的是进口的，哈哈，可能是这个原因吧！我还真以为我的胰酶是坏掉了呢！
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-3-12 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我门实验室是用PBS配的胰酶,也很好用啊,我觉得只要不含钙离子、镁离子的平衡盐溶液就可以了啊,我查过书,PBS和D-Hanks液的配方差别不是很大啊,最主要就是没有分红,配好后,放置过夜或至少4小时,然后过滤前调节ph值7.2就可以了吧,过滤好后分装到小瓶里-20度保存,用一瓶化一瓶,胰酶不能反复冻融的,所以要分装.
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发表于 2012-3-12 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有时候你可以按照自己的经验做事,比如配胰酶不过夜一样好用,买的GIBICO的胰酶放在4度3个月了,效果一样很好
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发表于 2012-3-12 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
0.25%胰酶: 用电子天平准确称取粉剂0.25g溶入小烧杯中的双蒸水100ml（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。搅拌混匀，置于4℃内过夜。用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。 胰蛋白酶溶液偏酸，过滤前可调用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右。
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DDD[使用道具]
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发表于 2012-3-12 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问大家，胰酶必须放在冷冻里面保存吗？我们实验室用的胰酶都是放在4度冰箱内冷藏保存的啊，那是不是时间越长效果越不好啊？
哦，我发现遇上不好消化的细胞时，把胰酶加入培养瓶中，然后放入37度CO2培养箱中，1分钟左右就能消化下来，效果很好，大家可以试一下啊！
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