液相色谱

准备用液相色谱进样测产率，但是不知道反应物怎么处理，怎么过滤才不会污染到柱子，还有外标法怎么弄？

柱子用的是5u的就用0.45um的滤膜过滤，如果是3u的，就用0.22um的滤膜过滤。
稀释用的溶剂最好用甲醇或乙腈或水，即流动相相关的成分。反应液中如果有与水反应的东西应该先淬灭一下，高价金属离子如铁、铝等要先除去，其他也就没什么了。

稀释用的溶剂最好还是流动相，其次是甲醇或乙腈！水好像用的少，毕竟反应是用有机溶剂体系的！

外标就是拿标准品配制不同浓度的，进样去测，根据峰面积个浓度来做标线

1.  先说外标法，外标法就是先用标准品做一条标准曲线（一般浓度为横坐标，峰面积为纵坐标），如果你用的标准品就是你要测定的物质或二者紫外吸收差不多，那么就不用加校正因子了，如果你用的标准品和你要测定的物质紫外吸收相差太大，那么还需要加一个校正因子，以保证你的标准曲线和你要测定物质的浓度一致。外标法一般5个点，并且一般最高点和最低点相差不超过10倍，呈等差排列，如1，2，3，4，5g/ml，并且使你测定浓度处于标准曲线的中间位置。将你测定物质的峰面积带入标准曲线，即可求得其浓度。

2.  过滤问题。首先不同色谱柱对溶解样品的溶剂是有要求的，一般C18柱就不适合用极性过小的溶剂，如正己烷等。其次，过滤一般用针头滤膜，滤膜选择见3楼，注意的就是如果你的溶剂里有有机相，千万不要用水膜过滤，反之，有水相却可以用有机膜过滤。

估计待测样品的浓度，确定称样量，用流动相溶解，稀释到一定浓度，用0.45um滤膜过滤，溶解样品的溶剂还有机溶剂，一定要用用有机膜过滤。称取一定量的标样，配成和样品相近的浓度，按要求进样，根据标样和样品的峰面积计算待测样品的质量分数，然后再计算产率。

处理，反应物（如果为反应液，应尽量浓缩），用流动相溶解（流动相溶解减少溶剂效应），并稀释至一定浓度，滤膜过滤（见5楼）
外标法，取样品对照品一定量，流动相溶解稀释配置成一定浓度的溶液（最好能和样品浓度一样，方便外标法计算含量），滤膜过滤进样。

进样前，需先确定液相方法（验证）

样品流动相能溶解就行了，做个标曲即可

一般常用的c18的PH值在2-8，只要在这个范围就好，还有就是最好是用流动相溶解样品，一般和液相色谱仪相配套的有有机系的一个过滤膜，在进样前用那个有机系的过滤膜过滤一下，不要用水系那个啊

先看药典有没有类似的方法！尝试不同的色谱条件！流动相用0.45um滤膜过滤，样品用注射器加0.45um滤膜过滤！