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标题:[求助]我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞...

junhun[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞...



我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子？？
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸,如是25mg,就需要250ml三蒸水,用移液管将 少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中,然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中,(已置烧杯中).最后加三蒸水达250ml,过滤除菌分装与小瓶中即可.保存于-20度,近期用的话可放于4度冰箱内保存. 注意每一小瓶的量不要太满,若20ml的瓶子,只装15ml可,若太满,放于-2度有可能会将瓶子弄 碎,因冻后体积增加.(我就有这个教训) 另外烧杯,小瓶 移液管都要灭菌处理的,泡酸高压什么的.我们用的是一种用注射器过滤的过滤器,一次性的.一个能最多有效 过滤200ml.
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
铺板的操作
首先要在 消毒实验室 包,括超净台,紫外消度20-30分钟 .消毒后30分钟进入实验室

事先准备100ml三蒸水,经高压灭菌处理.具体细节就不多说了.

首先打开板子,用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中,大概每孔3-4滴吧. 将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟.

取出板子,用吸管将多聚赖氨酸吸出.

换吸管,加入三蒸水,冲洗三次,即将每孔内加入三蒸水,没过底,多点也行.再将水吸出来.反复三次.注意换吸管,要无菌操作的.

最后将铺好的板子放于培养箱待用.

如果你做免疫组化,需要放小的玻片到孔内,就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可.

说得太多,希望有帮助!
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们养神经细胞,用的是分子量3万到7万的pll
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911[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。使用时，用高纯度的蒸馏水稀释成0.11mg/ml的使用浓度，过滤除菌，以50微升每平方厘米的量均匀涂于培养底物的表面，室温下静置5min，吸除多余液体，股风吹干即可。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

羟基磷灰石涂层 的培养瓶 有没有？
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的A549，用的0.1%的多聚赖氨酸细胞粘不住，做免疫组化吊的相当严重，后来换成了4%的浓度，问题解决了
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