液质联用

最近使用液质法进行了一些内源性强极性物质的分析和人体药动学实验，结果与普通的人体内药动学实验完全不同，受人体本身生理节律和本底值的影响非常大，不知道是不是普通的数据处理方法，甚至是研究思路并不适用于这样的实验，希望得到大家的指导！而且由于分析物极性很强，分析时又受到液质联用的限制，不能使用离子对试剂及一些特殊的添加剂，这样的分析有没有权威的文献综述可以指导呢？

          

找了一下文献，手头只有以前的几篇，不过，都不是质谱的，而且也比较偏一点。
以前试验室讨论过或是计划用质谱做内源性物质，如果分析方法没问题的话，最主要的是如何扣除本底了，像：单点空白扣除非，交叉试验空白扣除法，以及多次给药扣除法等等，但没有法规一样的定论，其实最主要的还是存在问题：如体内给药内源性物质后，体内自身调节机制的影响。。。
我后面贴的几篇文献仅供参考：

内源性物质的液质分析也算是个难点，研究的人比较少，又没有权威的指导原则，文献非常难得，谢谢版主的热心帮助！

谢谢！非常好的资料！

内源性物质药代动力学研究, 很有挑战性, 从分析的角度讲, 主要是涉及到方法的专属性(选择性)和灵敏度. 选择性好灵敏度高的分析方法就显得尤为重要!

"对于内源性物质药物（即体内已有和该药物一样的物质）生物等效性试验，如何将药源性与内源性及其它来源（如饮食中的）区分开是试验成败的关键。"
---摘自 审评四部审评七室 陈俊春 康彩练 <<对内源性物质药物生物等效性试验的一些考虑>>

个人认为, 电喷雾质谱+同位素标记+微透析+生物统计, 几门技术联合使用, 可用于内源性物质的代谢分析(代谢组学部分内容).

ps: 对内源性物质药物生物等效性试验的一些考虑    -- 审评四部审评七室  陈俊春 康彩练
评价生物等效性(Bioequivalence，BE) 源于美国FDA 规定的专利过期药物的申请要求，由于仿制药与专利药有相同的活性成分，因而有别于创新药物的申请。对于这类药，不需要作临床试验，只需做体内生物利用度或(和) 生物等效性试验。即在相同的试验条件下，给予相同剂量的两种药学等效制剂，判断它们的药代动力学过程是否有差异。其试验设计与分析基于这样一个假设：若两药的生物利用度相同，它们的治疗效果也应是相同的，即治疗等效性。BE 评价是药代动力学的一项重要应用，目的是保证临床替代用药的安全性和有效性，是证实两制剂治疗等效性最合适的办法。
       BE通过测量药代动力学参数(如血药浓度时间曲线下面积AUC、峰浓度Cmax和达峰时间Tmax )，若两药参数经统计分析达到等效判定的标准，则认为两药生物等效。
   然而对于内源性物质药物（即体内已有和该药物一样的物质）生物等效性试验，如何将药源性与内源性及其它来源（如饮食中的）区分开是试验成败的关键。加上机体的自身稳定机制，使内源性物质通常稳定在一个相对狭窄的范围（或有一定的周期性波动），所以直接测定生物基质中该物质的浓度不能有效地反映内源性物质药物的吸收情况。以上问题决定了内源性物质药物的生物等效性试验设计不同于其它药物而是有其特殊性。
    和其它药物（非内源性物质药物）相比，内源性物质药物生物等效性试验设计既有品种特殊性，同时也具有一定的设计共性。放射性同位素标记药物在技术上为内源性物质药物的测定提供了一条途径，但由于存在伦理等诸多问题而无法推广。我国的技术指导原则目前对此并未作出具体建议，而FDA已有两篇相关的指导原则发布，分别涉及钾和甲状腺素这两种内源性物质药物制剂。
     FDA于2000年发布的关于甲状腺素制剂的指导原则中，针对体内该物质浓度低，半衰期长的特点，对单次给药剂量和清洗期给出了相应建议；数据处理则基于甲状腺素在试验期间内源性浓度的不可预测性，未进行基线校正（减去基础值）；然而雅培实验室建议FDA对数据处理进行基线校正，认为结果更具有说服力，同时提供了相应证据，并最终获得了FDA的认同。
    在FDA2005年发布的关于钾制剂的指导原则中，由于钾不仅是内源性物质，而且食物中所含的钾也会干扰试验结果的正确评价。因此除了一些生物等效性试验的常规要求外，特别强调了特定时期（试验前和周期间）对尿钾水平的监测以稳定基线水平；并对试验期间食物中钾、钠等摄入和饮水做了定量要求，以便最大程度地减少非药物因素的影响；数据处理则要求进行基线校正（个体化并且是周期特异的，即每个周期的数值减去周期前的基线水平值）。
    因此，我们在审评同样是内源性物质药物时，从中可以有所借鉴。以辅酶Q 10为例：辅酶Q10 存在以人为主的许多动植物线粒体的内膜中，作为心血管等疾病的辅助治疗得到广泛应用；辅酶Q10不仅是内源性物质，而且食物中所含的辅酶Q10也会干扰试验结果的正确评价。故申办方在对试验进行设计时，除了一些生物等效性试验的常规要求外，同时应特别关注以下方面：特定时期（试验前和两周期间）对辅酶Q 10血浆浓度水平的监测以稳定基线水平；试验期间食物中辅酶Q 10的摄入量的确定或/和控制（包括不同周期中同一个体进食量和用餐时间的恒定），以便最大程度地减少非药物因素的影响；数据处理也要求进行基线校正，而且是个体化及周期特异的。在报送试验结果时，应详述相关控制措施及相应数据，不应简单一笔带过：如统一给予标准餐等表述。由于如何将药源性与内源性及其它来源（如饮食中的）的目标物质区分开是试验成败的关键，故如果试验中忽视了关键点的设计并作出生物等效的结论，则其结论的可靠性值得商榷。
    总而言之，在进行内源性物质药物生物等效性评价时，应尽可能最大程度地减少非药物因素的影响，如：对该物质浓度的监测并稳定其基线水平（体内或体外），数据处理要求进行基线校正，而且是个体化及周期特异的。诚然，由于体内内源性物质药物的特殊性，如存在基线水平的周期性波动或/和反馈调节等影响，对于这类物质生物等效性的评价具有一定挑战性，需要大家共同探讨以期不断完善。
参考文献
1. Food and Drug Administration (2001). Guidance for Industry: Levothyroxine Sodium Tablets - In Vivo Pharmacokinetic and Bioavailability Studies and In Vitro Dissolution Testing
2. Steven B. J. (2003). The FDA’s decision for the evaluation of levothyroxine sodium tablet bioequivalence Study design
3. Food and Drug Administration (2005). Guidance for Industry: Potassium Chloride Modified-Release Tablets and Capsules: In Vivo Bioequivalence and In Vitro Dissolution Testing

[ 本帖最后由 aa_tang 于 2008-1-11 18:56 编辑 ]

内源性物质的临床药动学----曾衍霖
许多药物通过影响机体内源性物质的血浓度而起作用。口服抗凝药抑制了凝血因子的合成而降低其血浓度；尿酸促排药通过增加肾清除率而降低尿酸的血浓度。有些内源性物质的代谢，可以反映机体某些器官的功能状态，如肌酐检定肾功能，胆红素评估肝功能等。有些内源性物质本身即具有药理活性，正常机体需要维持一定的血药水平，如金属离子铁、锌等，又如生物因子促红细胞生成素等。

　　药物一般多属体外的化学异物，服药前体内浓度等于零，服药吸收后体内浓度逐渐升高；因吸收和消除过程同时存在，故体内浓度升至最高峰后便逐步下降，最后又回到零。然而，内源性物质的代谢特点则完全不同，体内存在有它们的“代谢库”，因而在一定时间内体内的量保持相对恒定，但并不静止。库容量因合成或摄入得到补充，并经代谢而不断消除，入库和出库速率基本相近，从而保持库容量的相对恒定，而又具有转换与运动的特点。

　　经典药动学中的房室模型，自上个世纪70年代引入我国后，现已被广泛应用于药物研究，特别是在新药开发中发挥了重要作用。然而，对于内源性物质的临床药动学分析，原则上不宜利用房室模型。因为体内存在内源性物质的代谢库，初始浓度并不等于零。虽然有些申报材料通过减去“本底”的办法，套用单房室模型分析，但这也只是“近似分析”的权宜之计。因此，必须要以“本底值”的恒定作为前提。而“本底值”的恒定，在具体实验工作中较难获得证明，虽说“恒定”，而实际上可能存在起伏波动。

　　表述内源性物质的代谢特征，有以下几个参数：库容量（Ass）、转换速率（Rt）、转换速率分数kt），它们的相互关系为：kt＝Rt／Ass。另外，使初始库容量加倍所需的时间称为转换时间（tt）。符合单室模型的分析条件时，也可定义为使血药浓度升高达稳态值一倍所需的时间。tt与kt互为倒数关系。以人体内水的代谢为例。一般成人的Ass为42升，每天通过进食和饮水的摄入约为23升，通过排尿、出汗、呼吸而丧失的水分也约为23升，摄入和丧失的量相近。Rt为2.5升／天，根据关系可知kt为0.06天，因此tt为17天。若进入沙漠之后，因气候炎热干燥，经出汗与呼吸而丧失的水分大幅增加。

　　尽管处在如此情况下，如果机体功能正常，则可通过反馈调节使Rt上升为21升／天，kt升为0.5／天，因此tt则缩短为2天，从而仍使Ass保持在恒定值42升左右。这些参数值的改变，定量地反映了代谢库功能
状态的改变情况。

　　因生活条件改变，从而引发内源性物质代谢状况改变的有关例子在临床药物治疗中是举不胜举的，比如苯巴比妥诱导细胞色素P450异构酶，低盐饮食时尿中排出的钠量下降等。

　　对内源性物质的临床药动学分析，虽仍处在发展阶段，但已形成多种方法，比如利用阻断剂求转换时间、从建立新稳态推算转换时间及库容量等。

来源: cuturl('http://www.bioon.com/drug/pharmocology/57842.shtml')