小中大感觉比较悬。
如果你计划封闭培养的话建议使用HEPES作为缓冲。如果是用NaHCO3需要有CO2的进入来纠正pH值，否则起不了什么作用，培养液更不会变黄。
Hepes（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）是一种非离子两性缓冲液,它在pH 7.2～7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。该缓冲液使用的终浓度为10～50mmol/L，一般培养液内含20mmol/L Hepes便可达到缓冲能力。
Hepes的使用方法有以下两种：
(1)Hepes可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，溶解后用lN NaOH 调pH至7.2，过滤除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。
(2)配成100x贮存液（l mol/L），使用前取 99mL培养液加入 lmL贮存液，最终应用浓度仍为10 mmol/L。l mol/L（100x）Hepes贮存液配制方法：取23.8g Hepes溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5～8.0，然后用水定容至100mL，过滤除菌，分装小瓶（2mL/瓶），4℃或-20℃保存。
