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标题:[求助]lipofectamine2000的转染率

gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]lipofectamine2000的转染率




我第一次用lipofectamine2000，请问一下转染率大概是多少？我了解转染率与质粒 与质脂体的比例，细胞融合的百分数，转染时间有关系。但是我筛选的细胞株比较小，如果让细胞汇合到80％，细胞的个数要比说明书上的参考个数多一倍多，我想问转染时加入的质粒的量与细胞的个数有关系吗？ 如果有，我是不是应该比说明书中的参考量多加一些呢？在转染的五六个小时中，大家说细胞有增殖吗？ 我怎么感觉经过五个小时的转染后，细胞反而少了呢？谢谢
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一些常用的细胞，用推荐的用量，2k效率还是很高的，像293T,cos等细胞我转GFP做对照一般48h后80%的细胞都有表达，当然如果你的细胞比较少见，为了达到最佳效率，应该做个条件优化
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是这样的话，你还是等到细胞有80%的汇合的时候再转好些。因为我感觉做的时候从来没有像楼上的那种转染的效率，也就是40%～50%，可能楼上的技术高超。一般来说，脂质体对细胞都有毒性，所以细胞不会有太多的精力去长，你的细胞变少我想也有这个原因，一些细胞可能漂了起来。
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ending[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

嗯，80％的话还比较保守，因为我在用293T转GFP融合的片断，几乎所有的细胞都有荧光，但有些细胞就不行，大约50%左右
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
发两张转染前后的293对比。不同的细胞转染效率差很多，有些就很低，比如HepG2.
转染前：


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2012-3-15 13:16
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

转染后：


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2012-3-15 13:16
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发表于 2012-3-15 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

293T细胞啊，我想要，我们实验室没有，各位前辈能不能告诉俺怎么能弄这个细胞！
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发表于 2012-3-15 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 abc816 于 2012-3-15 13:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

转染后：  

挺高的效率了
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发表于 2012-3-15 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我看过相关文章最多转染HELA细胞才百分20，HELA够常见吧？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们做lipo感染293T一般效率都在百分之九十以上。不知道yinhaipeng战友要转什么细胞。你最好根据你的细胞情况，也就是在转染前，一定要把你的靶细胞习性摸清楚。细胞状态一定要好，细胞密度可以做个梯度实验看哪个密度适宜，说明书上写的只能参考。转染时质粒用量和 lipo比例根据说明书上的推荐比例和你手头质粒量适当调整，应该问题不大。转染后换液时要注意动作轻柔。还有不要让细胞在外面放太久。呵呵，做转染的人都喜欢在显微镜下欣赏自己的荧光。祝你好运！
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