[求助]CO2培养箱有话说

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标题:[求助]CO2培养箱有话说

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发表于 2012-3-15 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

文章范例：CO2培养箱中的水盘污染控制问题

　　细胞培养时，使用的CO2培养箱内通常采用两种方式控制箱体内湿度。一是采用被动控湿法，即通常的CO2培养箱内均放置一个3L的水盘，内盛3L无菌纯水，依靠水的自然蒸发，使箱体内湿度达到95%。二是一些高级的CO2培养箱，采用主动加湿系统（蒸汽发生器，加热水盘，喷雾器等），可以控制箱体内的湿度。

　　然而在这种高湿度条件下，放置在箱体内部的水盘中的纯净水，很容易造成微生物的滋生，产生污染，导致细胞培养完全失败。

目前，控制水盘内污染的方法有如下几种：

1、定期(至少每两周一次)，更换水盘内的无菌蒸馏水或无菌去离子水。
2、在水盘内添加适量硫酸铜，配制方法：20g无水硫酸铜＋5ml浓硫酸＋1L灭菌纯水。
3、夏季气温高时，水盘里加0.02％的叠氮钠可以有效的预防真菌污染。
4、水盘内添加适量抗生素。
5、定期为培养箱（含水盘）进行一次高温灭菌。
6、使用专用的水盘污染控制试剂，如市面上有些CO2培养箱厂家提供水盘污染控制专用的银离子消毒盒，说明书上描述能有效杀灭600中微生物，能持续使用6个月，但此类专用污染控制试剂较常规方法，存在价格较昂贵缺点。

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发表于 2012-3-15 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问在水盘内添加了适量硫酸铜后还可以加叠氮钠吗？

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发表于 2012-3-15 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

个人认为就如硫酸铜不好，最好过一周更换灭菌水以免水盘腐蚀。单独加入叠氮钠不好易挥发有害物质造成细胞培养不良。
在水盘内添加了适量硫酸铜后不可以加叠氮钠，叠氮钠易与重金属及其盐类形成十分敏感的化合物。

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发表于 2012-3-15 13:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

个人认为就如硫酸铜不好，最好过一周更换灭菌水以免水盘腐蚀。单独加入叠氮钠不好易挥发有害物质造成细胞培养不良。
在水盘内添加了适量硫酸铜后不可以加叠氮钠，叠氮钠易与重金属及其盐类形成十分敏感的化合物。

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照你说的那样的话水盘里什么都不用加咯？

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #4 is2011 的帖子

就是水盘加入灭菌后的纯化水。

yes4[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

刚刚学习了培养箱的清洁和消毒，就看到了这个帖子，跟一个！

【整理总结】细胞培养箱的清洁和消毒
以“培养箱”为关键字搜索

1. 培养箱消毒：先用纯水擦洗，再用95的酒精擦洗，再照紫外就可以拉！注意周围环境的清洁就不会那么容易污染的拉！

2. 我的经验是在补充水时最好把水加热一下，达到培养箱的温度。

3. 这么早就养细胞了，我们这里一般是用70％的乙醇擦洗，然后再用0.1％的新洁尔灭擦洗，不放心的话再用高锰酸钾加甲醛1：1比例熏一遍。注意要是熏的话千万注意混合之后马上离开，然后密闭细胞培养室，味道很刺激的。最好在养细胞前消毒，否则，确实没地方放细胞。

4. 我们的方法比较简单，先用75%酒精擦拭内壁，通风10分钟，紫外线照射30分钟即可。

5. 我们的通常处理是先用75%的酒精擦拭内壁，然后用甲醛+高锰酸钾熏蒸一个晚上，然后通风一整天（同时打开紫外线照射）。

6. 我们是把培养箱里的板层拿出来高压一下，箱壁用75％酒精擦一遍，换用诗乐氏擦一遍，再紫外照一夜，效果很好，其他的请高手指教。

7. 熏蒸后吹一天是绝对不够的，最起码要一个星期才可以让甲醛散尽，要不细胞长不好的

8. 有的培养箱能加热内壁到90度，也有的带有紫外线功能。常规应该每周用酒精擦洗内部一次。具体的操作请参考培养箱的手册，或着咨询培养箱技术支持。使用消毒剂应小心，培养箱内有检测温度、湿度和二氧化碳浓度的传感器，腐蚀性消毒剂或有机溶剂有可能损坏某些器件，请慎用。另外，挥发性的甲醛有毒，易燃、易爆。如果在培养箱内残留甲醛的话，细胞会死光光哦（我实验室的真实故事）。总之，先看培养箱手册，再联系技术支持，方可万无一失啊。

9. 常规最好什么也不放！硫酸铜的作用是抑制细菌生长（但多数用在处理污染的孔板）。因为现在的孵箱都有抑菌功能。

10. 我们实验室的做法:把平皿高压灭菌后,在无菌操作台内加入适量的灭菌双蒸水或者生理盐水.再加少量新洁尔灭,浓度没关系.细胞养的都可以.

yes4[使用道具]
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发表于 2012-3-15 13:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

11. 我建议
1 最好先把培养箱彻底消毒.具体方法也是用75%的酒精好好清洗培养箱.
2,操作时严格按照无菌操作的原则
3 我认为双抗的更换问题倒是不大,除非你正在使用的是污染的抗生素.
4 尽量减少观看细胞的次数及时间.

12. 我们实验室清洁培养箱的方法：用洗衣粉或洗洁精洗一遍——清水冲净——84消毒液洗——清水冲净——75％酒精擦洗一遍

13. 这是我们实验室常规的培养箱消毒方法（一般一个月一次），希望对你会有用

14. 首先把培养箱里的东西全部取出，放尽培养箱里的三蒸水；反复用三蒸水冲洗培养箱，然后用75%酒精擦3遍，之后再用三蒸水擦3遍；培养箱里的架子先用自来水反复冲洗，然后用蒸馏水、三蒸水、75%酒精各擦3次，于紫外下照射消毒1 h左右；最后将三蒸水（里面应加少许染料）加入培养箱，将消毒好的架子放入即

15. 培养箱应放置无菌室,水中应加适量的叠氮钠(防腐)或者硫酸铜,注意空气消毒.

16. 消毒培养箱的常用方法有两种：
把细胞移出，记住拧紧瓶盖，通常放在超净台内，室温一两个小时，问题不大。如培养室有空调，也可将空调打开。然后先用75%酒精棉球擦拭培养箱内壁，注意不要漏掉任何一个角落。擦拭两遍后用一蒸水或二蒸水清洗内壁，可多清洗几遍。最后用消过毒的棉球或75%酒精棉球把内壁再擦拭一遍即可。整个操作没有必要在无菌条件下。最后可在培养箱的水里加上亚甲基蓝，混匀即可。亚甲基蓝溶液可起到一定的抑菌杀菌作用。待培养箱内酒精几乎挥发完时，将细胞放入培养箱中。
还有一种办法就是直接用蒸馏水清洗完，然后再用紫外灯照(最好是那种培养箱里就带有紫外灯的，就方便多了。)
通常培养箱是需要定期清洗的，我们室是1-2月清洗一次，当然这要根据细胞养的多少和培养箱使用的频繁程度来决定的。

17. 我们实验室液发生过类似事件，我把我们处理过程告诉你，希望对你有帮助：
首先消毒培养箱，如果你们有两个或以上培养箱就好办了，如果只有一个且还有很多其他细胞就麻烦点。只能暂时的放在超净台上。具体如下，中午将空调温度打到最高（也只有31度），超净台开紫外。下午早点来关紫外，将细胞培养瓶盖盖紧，转到超净台内，用75％酒精擦洗培养箱，再用无臭氧型可移动的紫外等照射半小时，然后将细胞放回，松开盖口即可（切记CO2瓶子阀门要关紧啊，不然气全跑光了）。

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发表于 2012-3-15 13:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般实验室长了霉菌的话，肯定要全部消毒。
再消毒实验室，先把室内空调和消毒柜过滤网都拆下清洗，在锥形瓶内加点高锰酸钾，放在实验室地上，然后倒入甲醛，立马关门走人就可以了。
2天后再开门装好东西，和往常一样开始工作了。由于2天不能做事，个人细胞要先计划好，大家都可以休息两天。

18. 我们实验室是将细胞全部取出，酒精擦洗培养相，然后用紫外线照射4小时以上，污染细胞全部丢掉。还有就是培养室也采用紫外线消毒

19. 我也碰过这个情况，是自己的基础培养基污染了，光镜下面可以看见瓶底有细细的黑色小颗粒，但具体原因不详。处理方法：
1、被污染的细胞全部照过紫外线2小时以上后扔掉；
2、同一批的培养基、使用的细胞清洗液等等全部重新滤过消毒（有点舍不得全部扔掉，就尝试了一下，结果证明是可以的）；
3、打开培养箱，用75%酒精擦洗，然后用新洁尔灭擦洗（此步骤我们重复了2次，隔天），用紫外照射4小时以上；
4、清扫培养室，紫外照4小时以上，重复一次；
后来就没有啦。：）如果污染严重的话，那就要重复重复再重复了。

20. 偶也在年前遇到两次大爆发，先是真菌后是细菌。搞得我对细胞培养都快失去信心了，我养细胞都一年半了，平时细胞没什么，感觉养细胞是很简单的事，可是当污染大爆发时真的有招架不住的感觉。记得当时丢掉了几乎所有的细胞，近一百瓶，就只剩下保种的三两瓶，寒！！！至于处理方法，也就是乳酸熏蒸（记得把培养箱及超净台打开）之后一周关门关窗，不再进培养室，一周后75%酒精做彻底灭菌，也就是用酒精搽培养箱及培养室里的所有平面，甚至包括地面。到现在有四个月了，偶的细胞一直很好。建议不要惊慌，所谓兵来将挡，水来土掩。呵呵呵，一切会好起来的。

21. 看来你要大动干戈了。首先考虑培养基的问题。可以单独放置一瓶培养基到其他的培养箱里培养24小时看看是不是培养基污染。不过建议还是全部扔掉重新配置比较好。其次考虑培养箱和培养室的问题。基本上应该每一个月将培养箱彻底消毒一次的。首先用75％酒精擦洗，一般的培养箱都是可以拆卸的，将能拆卸的部分拆开擦洗后放到烤箱里烘烤（180度5个小时）。剩下的培养箱里用戊二醛擦洗后用紫外灯反复照射。然后在要用培养箱培养室之前再用紫外灯照射消毒2小时。你的照片里显示的应该是细菌污染，咳比较好对付。

22. 设置5％，却显示5.1％（当然这点差距实在不算太大，至于显示HIGH CO2，那是可以自己设定的，你可以自己设定二氧化碳浓度达到多少时报警（也即显示HIGH CO2，同时可能发出警鸣音，如果你没有按MUTE按钮或同等设置），同样地，你可以设置下限，还有温度的上下限），培养箱温度升高时CO2浓度会增加，反之亦然。检查一下你的CO2减压阀上面显示的压力指示是否超过0.08MPa，长期过高的CO2压力容易损坏培养箱内CO2压力调节模块，那样需要很多银子修理的。如果情况进一步恶化，建议联系售后服务。

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小中大

23. 手提式紫外灯

24. 1）一个大原则是：细菌和细胞体系是完全不同的，绝不可以放在一起，一般实验室均设置细菌间、细胞间，严格的分开是成功培养细胞的保证。
2）关于CO2培养箱的清洁工作，应该说不难。由于为不锈钢材，你用0.1%新洁尔灭擦洗干净后，在用2%的CuSO4清洗（清霉菌，在CO2条件下霉菌很易生/），最好用70%乙醇喷雾消毒箱内空气。再凉干后，再底部再加2%CuSO4（水稍出现兰色即可）的灭菌水进行稳定培养箱，待培养箱温度和湿度稳定后，再用一瓶细胞预实验一下，培养2-3天，没有问题再进行培养。

25. 有的培养箱可以直接高温干烤灭菌的，或者有的金属架可以干烤

26. 底部水盘加入蒸馏水后见到一片一片的东西，很可能是细菌群落的生长！个人经验是，必须清洗，而且是彻底清洗干净！拆开支架和每层的托盘，包括水盘（注意拆卸最好先向技术员了解内部结构，以防误拆损坏），用碘伏棉球将培养箱里里外外和拆出来的部件拭擦2次，然后再用酒精将残留碘伏拭去。下一步是，打开培养箱的门，开紫外照射过夜，这样就可放心了。我刚回来就是如此弄的，培养的细胞并没有感染迹象，活力甚佳，供参考！祝你好运！

27. 我使用的方法是：
1 取下培养箱内的隔板及挂钩，用清水清洗干净后，75%酒精彻底擦洗消毒，然后120度烤箱，考1小时。
2，培养箱用清水擦洗干净后用75%酒精彻底擦洗消毒
3，带无菌手套，安装好培养箱内的隔板及挂钩
4，打开培养箱紫外灯照射30分钟
5，高压蒸馏水后加入
我们一直就是这样做的，效果很好，可以试试看啊。

28. 补充一个水盘消毒的法子∶清水清洗干净，75%酒精彻底擦洗消毒后，多弄些酒精上去，点火烧一下．效果杠杠的！！

29. 把平皿高压灭菌后,在无菌操作台内加入适量的灭菌双蒸水或者生理盐水.再加少量新洁尔灭,浓度没关系

30. 水套式，气套式二氧化碳培养箱。

31. 细胞生长的环境要求有一定湿度，必须加水！我的小经验是： 1、双蒸水装在5L瓶中，2、高温灭菌，3、移进细胞培养实验室，在紫外照射下冷却，4、6小时后，在加入培养箱中使用。
如果发现托盘中的说有白色漂浮物存在是，尽量吸干！（此物考虑是霉菌污染）;
还有如果有条件，就是定期75％酒精大清洁！我一般2个月清洁一次！（包括细胞培养实验室）
这样在无菌操作下，基本保证你免除污染！！

32. 培养箱内不加水是不正规的，因为细胞生长的环境要求有一定湿度。
我们培养细胞不仅经常保持有水，而且培养液中不加任何抗生素。只要无菌操作过关，不会发生细菌污染。

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小中大

33. 我们实验室平常培养箱的消毒方法：（清洁前最好开紫外30分钟）
1、隔板的清洁：先将隔板卸下，用干净纱布沾新洁而灭擦两遍；
2、箱内壁用新洁而灭擦拭后再喷75％酒精，关门熏蒸15分钟；
3、盛蒸馏水的盘子：把盘里的水倒掉，用新洁而灭擦拭，干后倒入三蒸水；
4、装好板后，再喷75％酒精关门熏蒸30分钟。
5、培养室开紫外照30分钟以上。

34. 我们实验室是将全部隔板卸下，新洁而灭擦拭，放在超净工作台内紫外杀菌，CO2孵箱内用紫外灯照射12h以上。

35. 推荐方法：拆卸隔板，新洁儿灭搽3次，然后酒精搽3次，紫外下面照2小时，然后装上隔板，箱壁同样处理，打开箱子，用小紫外灯或房间紫外灯照2小时。注意要搽顶部的螺旋桨。装好后，喷酒精即可。另外，还是用用硫酸铜比较好，饱和溶液放置在箱子底部。屡试屡爽，大约可以管3-4个月没有问题。如有效，请斑竹加分，谢谢！

36. 加硫酸铜的目的是为了防止真菌的生长,但硫酸铜容易改变孵箱pH值,所以建议不加硫酸铜,直接加蒸馏水即可,保持孵箱湿度.

37. 前一段时间培养箱里老是有散在的细胞霉菌污染。培养箱高温消毒后，现在打开，发现里面那扇玻璃门和垫圈会有大量水汽，培养瓶外壁也有。请问是怎么回事？细胞还能养吗？是因为培养箱门的加热故障或设置错误，导致门的温度与箱内温度不一样，所以引起玻璃门结水汽。对细胞培养没多大的影响，因为箱内的温度是正常的。

38. 这种情况很常见，可以用以下方法解决：往水盘里的水加入适量的硫酸铜，搅拌均匀即可，因为硫酸铜是重金属盐，可以达到杀菌效果；另外也可以加10％的新吉尔灭等无刺激性的消毒物质。注意，千万不能直接往水盘里加自来水，因为自来水里有很多潜在的霉菌等，一旦条件温和它们就会迅速繁殖，最好是用煮开的蒸馏水。注意了这些细节，问题就迎刃而解了

39. 新洁尔灭是阳离子表面活性剂,清洗时起泡很正常

40. 下一步我要啃啃我们的细胞培养箱的说明书？
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