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标题:[求助]用Lipofectamine™ 2000 转染细胞时...

caihong[使用道具]
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[求助]用Lipofectamine™ 2000 转染细胞时...




请问大家,用Lipofectamine™ 2000 转染细胞时,除了质粒和Lipofectamine™ 2000 用无血清培养液稀释外,细胞培养液是不是也必须无血清,请做过转染的战友给点建议,加不加有什么差别吗?再有6小时可以换液了吧(10%DMEM),换不换有差别吗,此时可以加双抗了吗。谢谢大家。
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ha111[使用道具]
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稀释时一定不要加血清和双抗,培养液里可以加血清,加与不加没什么大的区别。至于换液根据复合物对细胞的毒性而定,有的转染后对细胞产生毒刑,所以最好要换液,换液可以从转染后0.5-24小时。如果以后要用抗性(如G418)筛选那么,最好不要加双抗了。
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04906[使用道具]
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如果以后要用抗性(如G418)筛选那么,最好不要加双抗了。

这个是什么原因啊!?
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one[使用道具]
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稀释时一定不要加血清和双抗,培养液里也不加血清,并且转染时用PBS清洗细胞两遍,已消除血清对转染的抑制效果,6小时后补加血清,我是这么做的,效果不错.
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请问补加血清时是不是滴几滴就可以,你换液了吗
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jujuba[使用道具]
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转染的时候不加血清。但是转染过后最好换液,换成完全培养基吧。反正换液跟补加血清相比也麻烦不了多少,而且脂质体对细胞还是有一定的毒性的,换掉它比较好。
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junhun[使用道具]
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我转染时用OPTI-MEM无血清培养基 一般4-5小时后换为完全培养基(血清浓度5%) 48小时后在进行筛选 效果不错
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toy[使用道具]
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同问,为何用G148筛选不要加双抗啊?
难道双抗对细胞状态有影响?
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skytree[使用道具]
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大家怎么理解这句话:Lipofectamine™ 2000说明书上的:
4)incubate the cells at 37°C in a CO2 incubator for 24-48 hours until they are ready to assay for transgene expression. It is not necessary to remove the complexes or change the medium; however, growth medium may be replaced after 4-6 hours without loss of transfection activity.
是不是可以在24-48小时中换培养液?
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vera+[使用道具]
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我也曾就此问题请教过一个公司,他们的技术支持这样告诉我:
在稀释LIPOFECTINE和质粒DNA时,一定要用无血清和无抗生素的培养基,而且培养基的成分越简单越好,因为这个过程只是为了让LIPFECTINE 包裹DNA,血清影响LIPOFECTINE 对DNA包裹。只要包裹好了,有血清应该对转染的过程不是很大。
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