小中大
对这个细胞,首先是贴壁性不强,用弯头吸管可以轻松的将细胞吹下来。
细胞的培养,培养基使用1640就可以了,不过要添加葡萄糖,丙酮酸钠可加也可不加,b-巯基乙醇也是可选项。PH要调得略低点7.0,用HEPES进行调节。当然要无菌过滤。生长迅速,2-3可以传代,1:3传代是没有问题的。杂交瘤比较脆弱,生长的能力,速度等不及单身的SP2/0,两者之间,在同一个孔内,存在生存空间的竞争。往往是单身的厉害。从复苏到融合,这仅仅是实验的开头,以后的实验还比较长,融合后7-10天可以检测细胞的上清,发现阳性要及时克隆,有限稀释法。但这一步走容易丢失阳性克隆,有一点运气。不过比彩票的中浆要高的多。随后要2-4次克隆,最后的ELISA检测结果应是100%阳性,OD值相同,才算是一株。否则应当继续克隆下去。这个过程会延续3个月左右,期间如果发生细菌、支原体、真菌污染,则一切都是0。必须从头来。饲养层的制备是比较重要的。对96孔扳的观察是融合后每天必须的,请准备好盐药水,长时间的看10块或以上的培养板,眼睛有时后会看不清东西。还有就是再融合后,养小鼠,冻存细胞,换液,测3快以上的96孔ELISA版,是常规,是对身体和心理的巨大考验,最好是2人合作。