液相色谱

反相C18柱分离多巴胺，柱子用一段时间后柱压很大，怎么解决

分离多巴胺，使用安捷伦C18柱，流动相是水相：有机相=7:3，水相为NaH2PO4  50mmol/L, EDTA  250mg/L, 十二烷基硫酸钠 500mg/L; 有机相为乙腈 200ml/L, 甲醇 100ml/L. 磷酸调pH2.9, 流速1.0ml/min. 刚开始每次用完用100%甲醇冲洗柱子。柱子使用过一段时间后，柱压变高，已经超过机子最大压力限制，用甲醇冲仍不减小，没有办法使用。现在改用不含SDS的同组分流动相冲洗20倍柱体积，水：甲醇+乙腈=7:3冲20倍柱体积，100%甲醇冲20倍柱体积，但压力仍不减小，怎么办？在网上查过，说用小流速反冲，但是商品柱能反冲吗，有没有影响，冲完还能不能用？求高人指点。

刚开始每次用完用100%甲醇冲洗柱子?你的盐已经析出阻塞色谱柱了！

你这种情况，只能死马当活马医，小流速反冲了，用30%乙腈/水 0.1ml/min反冲2小时，然后把柱子正接，还用0%乙腈/水 0.1ml/min冲2小时，然后逐渐增加流速到日常水平。
以后做完样品应该用同比例无盐流动相冲洗半个小时，然后再用100%有机相冲洗封柱。

你用完直接用100%甲醇冲，肯定很多盐析出来了，堵住柱子了，应该做完样用小流速甲醇：水=1:9冲过夜，出去盐。

可以反冲的，但是时间不能太长，对柱效有一定的影响。不过，我觉得就是反冲也不一定能冲出来了，还是考虑换柱子吧，肯定是以前的缓冲盐没有冲洗干净，越积越多，这些缓冲盐如果当时没有冲干净，以后费再大的力气都难冲下来了。

那现在用小流速甲醇：水=1:9冲过夜，还能把盐冲出来吗？这个柱子还有没有救呀？

现在如果用甲醇+水冲过夜，缓冲盐能冲掉么，这跟柱子是不是就报废了呀？

每次用完用100%甲醇冲洗柱子——操作有问题，应该先用大比例的水冲洗，以免缓冲盐析出。现在也只能先用90%左右的水冲洗，把盐洗出来了。

你的流动相有盐类的缓冲，所以每次用完先用水冲洗柱子，才行。应该先用大比例的水冲洗，以免缓冲盐析出。现在也只能先用 水冲洗，把盐洗出来了。

我觉得你的柱子和系统都应该好好冲冲，柱子反冲以后就要反着用了，用水和甲醇（水多甲醇少）一起冲冲吧。

建议用高水相小流速下先冲下，我现在用的一根岛津的C18的柱子，有时候正接超压反接就正常有时候又反接超压正接正常，所以我正接反接都用过，所以我倒是正接反接经常换着用，分离情况没受什么影响，不过不同的柱子可能不一样