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标题:[求助]原代细胞污染原因求助！

flower-201[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]原代细胞污染原因求助！



猪原代BMSC培养，小猪皮肤新洁尔灭擦拭三次后用消毒穿刺针抽取骨髓血进行原代培养，5天后用PBSX3冲洗，镜下观察细胞状态如下：
求助高手赐教这种细胞是否污染，如果是的话是什么污染呢？
急
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2012-3-18 10:03
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小糖块[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得应该是细菌污染，你看那么多小黑点，建议所有的培养液，PBS都倒掉重新配。
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发表于 2012-3-18 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细菌污染的话在10倍下应该看得到，可是这一个看不到。黑点正是我的不明白的地方，但是是细菌污染嘛？
ps:这个原代培养所用的PBS为高温消毒新鲜使用。
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发表于 2012-3-18 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不一定吧
带血细胞的样品都是有可能出现这样的情况
一般是血细胞破裂的碎片
但是你可以添加双抗
这样就没有问题了，特别是新手
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yes4[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的培养液中添加了公司买来的三抗，而且在最新刚刚提取到的血液中也看到了这样的黑点，也就是说小猪里刚刚取来的细胞就是这样。
这到底是什么东西呢？
本人培养细胞的时间不算很久很久，但是也有一年半了，所以算不上是新手，添加抗生素是常规，严重同意，也严格添加。
请高手们再次商戳！
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也有这方面的问题。我分的是成年小鼠的心肌成纤维细胞，用胰酶和胶原酶消化。细胞瓶里又很多碎屑样的东西，仔细看还能动。


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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是细菌污染。有可能是骨髓里的杂质或者红细胞，其他细胞碎片什么的。也有可能是黑胶虫，不知道影响生长不？原代一般生长慢。传几代就可能长的好了
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milkdog[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不属于污染，有可能是离心时选择的离心力过大，或离心时间过长产生的细胞碎片。我分的脐血MSC里和外周血MNC中都曾经发现过这样的物质。对细胞生长应该没有影响。还有，你的血清是用的哪种？最好是用进口的血清。不晓得你的标本在分离前是用什么稀释的，个人感觉用不加血清的培养液稀释标本效果要好于PBS或D-Hank's液。
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发表于 2012-3-18 10:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
该不是细菌污染，否则，养五天后早就看不到目的细胞了
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

黒焦虫污染了
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