[求助]Annexin V-FITC/PI染色上流式出现一整团细胞横跨2个象限

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标题:[求助]Annexin V-FITC/PI染色上流式出现一整团细胞横跨2个象限

am10[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教各位做过用Annexin V-FITC/PI双染, 再上流式检测细胞凋亡的老师: 用Annexin V-FITC/PI染色经过缺氧处理一段时间的贴壁细胞, 上流式出现怪图: 即一整团细胞横跨左下象限和右下象限, 不知这是何原因? 正常情况下, 左下象限的正常细胞单独成团, 右下象限的凋亡细胞也单独成团. 所以特请教是什么原因或错误操作使一整团细胞横跨左下象限和右下象限? 怎么解决? 由于没有扫描仪, 所以图未扫描进来, 不知道我是否说清楚了. 恳请解答! 如需看图, 我就去扫描. 谢谢!
(注: 所用试剂盒为晶美公司的Annexin V-FITC/PI双染试剂盒)

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

象限是人为划分的,是否是人为因素所致?

am10[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

感谢回帖帮助.但象限的划分是先用不染色的细胞作空白来确定的, 仍有一定客观性.

toy[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这种情况其实比较正常，这样理解：
细胞从viable到early apo，是一个过程，不是瞬间从左下跳到右下。AV的图形实际上是从左下viable到右下early apo再到右上necrosis的一个逆时针过程。

如果您检测时，细胞正好处于这样的过程之中，那么会出现中间无明显分界点的现象。也许如果检测时间再晚一点，也许中间的移行区间就消失了。也许您的染料相对不足也会这样，有的凋亡细胞表明如果本来有10000个ps翻转，但只有5000个被染上；有的都被染色；有的甚至只有3000个被染上，您说会不会这样？

还有很多情况也可以导致这样的现象。其实慢慢分析染色原理和试验本质，可以找出很多这样的原因出来，这本来就是学习和加深理解的一个过程。

好运！

join[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得还要考虑一个原因就是非特异吸咐：以未染色细胞来画M的作法本就不合理，人个认为在没有同型对照的情况下结合AV和PI单染画M的作法更科学！

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-3-18 10:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做流式，每次都要设对照，经分析，然后设定象限。

am10[使用道具]
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