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标题:[求助]请教树突状细胞的培养经验

mickeylin[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请教树突状细胞的培养经验




我是个新手,想请教树突状细胞的培养经验,顺便问问AIM-V与RPMI-1640的区别
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过原代的脾的树突状细胞分离，请问你是否做原代培养。
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 zhenxin 的帖子

RPMI-1640加20%FCS效果不错
最好用磁珠分选前体细胞
这样可以得到比较纯的DC
祝你成功
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好,我也要做原代的脾的树突状细胞分离,但我有很多细节问题不清楚,这方面的资料又不多,把我急死了你能把分离的步骤给我说一下吗?
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我正在做提取DC细胞，经历很多曲折，我发现从骨髓中培养较简单。先提取出骨髓细胞，用红细胞裂解液破红后，用完培调整2*10E6/ml加到6孔板中2ml,再加20ng/ml的IL-4、GM-CSF各1ml。隔天半量换液即可。7-9天可得到。
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
直接从脾中分离DC较少，纯度不高，需要加细胞因子。
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fqswdzd[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我已经通过我说的方法得到大量DC，经鉴定有81%的阳性率DEC205标记
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的经验：
可取外周血，MACS或贴壁2小时，获得monocytes，加入GM-CSF IL-4 各50NG／ML，第三天倍半换液体，7天后诱导成功，可看我的结果图片。
如图：


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2012-3-18 12:05
45690122.snap.jpg (25.42 KB)
 
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
you can attach the picture by clicking the "New Reply" button.
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-3-18 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #9 moonlight45 的帖子

ok.i know.thank you.
另外对于DC细胞，由于没有特异的表型鉴定，因此鉴定的手段主要是从三个方面：
细胞形态 细胞表型 及其功能。因此在前两种手段确定DC后，最重要的还是功能
方面的表现，所以在脉冲上肽或者整体抗原后，必须照光终止，与反应性的细胞系
作用，混合淋巴细胞反应检测细胞系的增值，从而确定你所得到的细胞一定是DC。
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