小中大Boyden小室法又称滤膜小室法,通常用48孔的趋化小室进行实验,该小室分为两层采用特殊的小盒装置,盒中以一片3~5μm孔径的微孔滤膜将盒分为上下两小室,根据趋化细胞的种类不同,采用不同孔径的聚炭膜和趋化时间。一般嗜中性粒细胞选用3um孔径膜,趋化反应进行30分钟;单核细胞和淋巴细胞选用5um孔径膜,趋化90分钟。上室加受检的细胞悬液(如白细胞);下室加细菌菌体或其产物、酵母菌活化的血清等趋化因子。置37℃温育数小时。上室中的细胞因受下室内趋化因子的招引,使细胞由滤膜微孔进入滤膜内,最后取滤膜,经固定、干燥、着染、脱色等步骤,然后显微镜下观察,计数膜上或下层孔中的细胞数,通常在高倍镜下每孔随机选5个视野,计数,取平均值。趋化活性通常以趋化指数表示(chemotatic index, CI),趋化指数是指实验组细胞数与对照组细胞数的比值,一般比值在2以上有意义。
趋化因子最基本的功能是引起特定细胞的趋化运动,但高剂量和低剂量趋化因子都没有促迁移作用,只有一定剂量范围的趋化因子才有趋化作用。也就是说:一般的细胞在趋化后的结果不会受细胞是否悬浮的影响。选用适宜孔径的聚炭膜和趋化时间,经过固定、干燥、着染、脱色及镜检就可以得到满意的结果
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请问你在下室的孔中所加的液体有没有接触到滤膜?如果液体没有接触到滤膜,趋化因子还能发挥作用么?