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标题:[求助]悬浮细胞的趋化实验

社会主义好[使用道具]
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[求助]悬浮细胞的趋化实验




向各位请教了!我准备用boyden小室做趋化实验,细胞是悬浮的。请问,趋化以后的细胞如果不贴在膜上怎么办?是不是也象其他趋化方法一样进行细胞计数?
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趋化试验后,用血细胞计数板计数下层小室内的悬浮细胞数,具体可参见相关外文文献
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社会主义好[使用道具]
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不好意思。我因为没有相关的参考文献才到这里来的。谢谢指点。不过,膜反面会不会有细胞,有的话是不是就不要了还是要弄下来一起计数?
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Boyden小室法又称滤膜小室法,通常用48孔的趋化小室进行实验,该小室分为两层采用特殊的小盒装置,盒中以一片3~5μm孔径的微孔滤膜将盒分为上下两小室,根据趋化细胞的种类不同,采用不同孔径的聚炭膜和趋化时间。一般嗜中性粒细胞选用3um孔径膜,趋化反应进行30分钟;单核细胞和淋巴细胞选用5um孔径膜,趋化90分钟。上室加受检的细胞悬液(如白细胞);下室加细菌菌体或其产物、酵母菌活化的血清等趋化因子。置37℃温育数小时。上室中的细胞因受下室内趋化因子的招引,使细胞由滤膜微孔进入滤膜内,最后取滤膜,经固定、干燥、着染、脱色等步骤,然后显微镜下观察,计数膜上或下层孔中的细胞数,通常在高倍镜下每孔随机选5个视野,计数,取平均值。趋化活性通常以趋化指数表示(chemotatic index, CI),趋化指数是指实验组细胞数与对照组细胞数的比值,一般比值在2以上有意义。
趋化因子最基本的功能是引起特定细胞的趋化运动,但高剂量和低剂量趋化因子都没有促迁移作用,只有一定剂量范围的趋化因子才有趋化作用。也就是说:一般的细胞在趋化后的结果不会受细胞是否悬浮的影响。选用适宜孔径的聚炭膜和趋化时间,经过固定、干燥、着染、脱色及镜检就可以得到满意的结果
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greenbee[使用道具]
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你用pubmed搜一下人单核细胞系THP-1的趋化试验的相关文献,这个细胞是悬浮培养的,应该有参考价值。
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xingyi08[使用道具]
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请问哪里能买到聚炭膜?价格多少?谢谢
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Boyden小室法又称滤膜小室法,通常用48孔的趋化小室进行实验,该小室分为两层采用特殊的小盒装置,盒中以一片3~5μm孔径的微孔滤膜将盒分为上下两小室,根据趋化细胞的种类不同,采用不同孔径的聚炭膜和趋化时间。一般嗜中性粒细胞选用3um孔径膜,趋化反应进行30分钟;单核细胞和淋巴细胞选用5um孔径膜,趋化90分钟。上室加受检的细胞悬液(如白细胞);下室加细菌菌体或其产物、酵母菌活化的血清等趋化因子。置37℃温育数小时。上室中的细胞因受下室内趋化因子的招引,使细胞由滤膜微孔进入滤膜内,最后取滤膜,经固定、干燥、着染、脱色等步骤,然后显微镜下观察,计数膜上或下层孔中的细胞数,通常在高倍镜下每孔随机选5个视野,计数,取平均值。趋化活性通常以趋化指数表示(chemotatic index, CI),趋化指数是指实验组细胞数与对照组细胞数的比值,一般比值在2以上有意义。
趋化因子最基本的功能是引起特定细胞的趋化运动,但高剂量和低剂量趋化因子都没有促迁移作用,只有一定剂量范围的趋化因子才有趋化作用。也就是说:一般的细胞在趋化后的结果不会受细胞是否悬浮的影响。选用适宜孔径的聚炭膜和趋化时间,经过固定、干燥、着染、脱色及镜检就可以得到满意的结果

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请问你在下室的孔中所加的液体有没有接触到滤膜?如果液体没有接触到滤膜,趋化因子还能发挥作用么?
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orangecake[使用道具]
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当然接触了
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回复 #8 orangecake 的帖子

我准备作内皮细胞的迁移试验,我的一位师姐曾经做过,他的方案是0.45um的纤维滤膜(孔径这么小),下室加25ul的液体(根本碰不到膜),抚育24小时(这么长时间),看过丁香圆里诸位前辈的帖子,我觉得她的方案好像有点问题?那位大侠能出来给我这个菜鸟指点一下啊。还有,滤膜分不分正反面啊?
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idea2011[使用道具]
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滤膜分正反面,一面光面,一面磨面。进行实验操作时,光面朝上,磨面朝下,趋化结束后挂掉光面的细胞,对磨面的细胞进行固定染色脱色等处理……
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