小中大
从培养瓶往板子上种细胞有时的确是需要一些经验和技巧的,因为不同的细胞在瓶子里长的数量是不一样的,我种的是平滑肌细胞,铺的很开,个头又大,这样下来一瓶的细胞量就比较少了。我一般是一个25cm2的培养瓶种四个孔,种好之后放两天后再接着处理,其实我觉得在六孔板接种细胞方面还是可以有据可依的。不怕麻烦可依把细胞拿来计数,然后每个孔接种不同数量的细胞,然后观察细胞的生长情况,这样就可以得到自己的细胞比较准确的资料了。
不过在接种板子的时候细胞生长容易出现一个现象,就是中间的长的密,周围的长的疏,出现这个问题以我在园子上看到的帖子和自己的经历来看,主要是把细胞接种到板子上后再加培养基进行稀释的结果,无论你怎么在板子里面混匀效果都不是很好。到目前我找到的最好的办法就是先在瓶子里稀释好以后直接接种到板子上。
我觉得在细胞接种六孔板这个问题上最重要和最难把握是细胞的接种密度和对细胞生长程度的把握,即如何判断细胞长到什么程度拿去实验效果最好,希望有经验的战友多谈谈这方面的经验。最好能有自己的个案,比如说做流式等这些实验的时候对细胞接种是如何把握的。