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标题:[求助]急求:RPMI1640培养液的配制步骤

hulu呼噜[使用道具]
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[求助]急求:RPMI1640培养液的配制步骤



本是新手,哪位战友给详细介绍一下RPMI1640培养液的配制步骤?谢谢!我已经买了粉末。
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is2011[使用道具]
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以下是2000ml的配方:
1640粉两袋-三蒸水稀溶(烧杯中)-加谷氨酰胺1g(0.3-0.6g)-加碳酸氢钠4g使溶液颜色由黄变红-调PH,使PH在7.2-7.4之间(酸+碳酸氢钠;碱+盐酸)-定容-滤器过滤,分装于瓶内,-20摄氏度冻存
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最好加上双抗吧!防止微生物污染。
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newway[使用道具]
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1640价格还是很便宜的
为什么不直接买配制好的呢?4摄氏度下也可以保存较长时间的。
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misswu61[使用道具]
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GIBCO的RPMI1640上就有说明怎么配的:
1.Measure out 5% less distilled water than desired total volume of medium, using a mixing container that is as close to the final volume as possible.
2.Add powdered medium to 15 to 30 ℃ (room temperature) water with gentle stirring.(do not heat water)
3.Rinse out inside of package to remove all traces of powder.
4.Add 2.0g of NaHCO3 per liter of medium.
5.Dilute to a desired volume with water. stir until dissolved.(do not over-mix)
6.Adjust PH of medium to 0.2-0.3 below desired final working PH*: use of 1N HCl or 1N NaOH is recommended.(Add slowly with stirring). After PH has been adjusted, keep container closed until medium is filtered.
7.sterilize immediately by membrane filtration (positive pressure recommend).
* PH units will usually rise 0.1-0.3 upon filtration.

以上是我从冰箱里拿出GIBCO的1640的盒子对着打的,我实际操作中在调PH的时候是充入CO2的,然后再过滤灭菌。一般放4度保存即可,等要使用时,再加入血清及双抗等添加剂。
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hulu呼噜[使用道具]
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这样配行吗?加1000ml双蒸水,再用磁力搅拌器搅拌4小时,,滤器过滤,分装于瓶内,-20摄氏度冻存, 用的时候再碳酸氢钠加调PH值,
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hulu呼噜[使用道具]
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我原来买的直接配好的1640,放在4度储存,分装后,用上两三天,就变碱了。
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zhezhe[使用道具]
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这样配行吗?加1000ml双蒸水,再用磁力搅拌器搅拌4小时,,滤器过滤,分装于瓶内,-20摄氏度冻存, 用的时候再碳酸氢钠加调PH值,

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这是我们实验室配制的步骤,供参考:(我们一般是配制5L)
1、将要配液的烧杯刷洗干净,烘干待用;
2、用量筒量取2L纯水,把5袋1640粉末溶解,放在搅拌器上搅拌;
3、在搅拌的期间,再接取2L纯水,加至烧杯里;
4、准确称取10g碳酸氢钠加至烧杯,再加最后1L的纯水搅拌(这里还是应该过滤前加的,以保证无菌);
5、将烧杯移至超净台旁边,连接自动抽虑泵,过滤除菌;
6、超净台对面一同学相助,将瓶子标号后,逐一取1ml左右到EP管,放至孵箱中,培养3天以上;
7、若EP管内培养液干净、清澈,则可以放心使用了;
8、4°保存即可!!

一般说来,没有什么特殊的,我觉得要注意一下几点就ok了:先要保证烧杯确切的洗干净,这样会尽可能的避免一些隐患(自己感觉的呵呵);总的来说1640还不是很难溶解的;我们分次加水溶解的目的就是使其溶解充分、不浪费呵呵;碳酸氢钠是一定要加的,需要的量是配制1L的1640加2g(我们配制完不用调ph的,一般来说没什么问题,不放心可以调下);取样培养也是蛮重要的,这关系到你以后做实验的方方面面哦;再者我们都是4°保存的,从来没有-20°保存过呵呵,很好狠方便!!
仅供交流学习!
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小鱼鱼[使用道具]
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这样配行吗?加1000ml双蒸水,再用磁力搅拌器搅拌4小时,,滤器过滤,分装于瓶内,-20摄氏度冻存, 用的时候再碳酸氢钠加调PH值,

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4小时太久,没必要的,一袋(10.4g)放锥形瓶里加700~800ml的纯水,用手摇就可以了,直到溶解。你因为放在-20,即使是加了CO2也会因为CO2的溶解度变化而跑掉,故而你解冻的时候容易变碱了。你配的时候,粉末溶解后通入CO2,等颜色稍变橙色时再加入NaHCO3,溶解后看PH值,一般就差不多了,最后定容至1000ml,滤菌后放4度保存就好,即使分装,也跑不了多少气的。“用的时候再碳酸氢钠加调PH值”——你到用的时候都已经是无菌了,还怎么调PH值呢。
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小鱼鱼[使用道具]
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我原来买的直接配好的1640,放在4度储存,分装后,用上两三天,就变碱了。

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那是因为封口不严吧,我的自己配的放上一个星期也不会变色,而且分装管还只有50ml的。最好加个封口膜吧,液体不漏,气体可能也会跑的。
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