[求助]人乳腺癌MDA-MB-231细胞形态

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标题:[求助]人乳腺癌MDA-MB-231细胞形态

eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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2012-3-20 11:36

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ha111[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

很多人做细胞实验加胰酶后吸掉，不离心的。倒掉好像不合理吧，培养瓶里残留太多。
但我几次比较发现，不离心的细胞状态要差一些，我用的胰酶是含EDTA的。所以现在基本上是离心的，不过我有师兄一直不离心，细胞一样养的很好的。

woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

MDA-MB-231我养过，这个细胞株不太容易适应新的环境。但从你的照片看，问题不大；这个细胞贴壁，过几天换个液就ok了；同时，可以适当增加血清浓度，等长起来了，就很强悍的了，呵呵

eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

MDA-MB-231我养过，这个细胞株不太容易适应新的环境。但从你的照片看，问题不大；这个细胞贴壁，过几天换个液就ok了；同时，可以适当增加血清浓度，等长起来了，就很强悍的了，呵呵

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这种细胞真的这么敏感么？我用的胰酶也和公司的不一样（桃红色/无色），后来有离心换液，但还不行，公司说是培养箱的问题,得用进口的（我们实验室是国产的），公司说细胞库来源是保密的，只说是国内的，现在得重新买一瓶来养，我现有的材料和仪器能让细胞好好活着么？它们就不能慢慢适应么？

园丁##[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞传代无需离心，直接吸掉大部分，留下少部分加入培养基就可以了。
孵箱只要能够保持稳定的温度和CO2供应，进口的还是国产的不会有很大区别。
看你图片上的细胞状态还是可以的。
如果细胞长的慢，可以在传代时增加留下的细胞数，培养基中的胎牛血清的比例也可以适当增加，等其达到正常的指数生长期时再恢复到常规培养条件。
另外，建议用培养板养，多传几个孔，分开来传代和培养，这样可以选择状态好的细胞用于后续传代和实验。

greenbee[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养了一周人乳腺癌MDA-MB-231细胞，从细胞公司买了配套的DMEM培养基，传代后部分用四季青的血清，部分用细胞公司给的进口血清，胰酶消化后没有离心直接倒掉的。现状态不好，致电公司说是没有离心的缘故。请教各位是否是这回事？另请问南京哪里有做荧光光度计分析？我用的是近红外染料Cy5.5，激发波长694nm。谢谢！附细胞照片

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这图片也太奇怪了。跟ATCC的很不一样，跟我的也不一样。我是从上海细胞所买的，开始用DMEM养，杭州四季青的血清，没传几次代就变圆了，后来就买了L-15，还可以。不知道你是在哪个公司买的？差别太大了。

DDD[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这细胞状态不对，正常的231细胞不会这么纤细，由于你后续更换了国产血清，现在很难判断时细胞源有问题还是血清导致的。胰酶消化一般不需要离心，但你要确定胰酶消化没有过度。这个细胞很好消化，加了胰酶后，让其均匀覆盖，然后马上吸掉，然后37度消化2min不到就应该可以了。

如果刚复苏没更换国产血清前也是如此形态，而且培养基用的是好的培养基，可以确定是细胞来源就不好。

eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

从原公司又买了一株，培养基一致，慢慢换成四季青胎牛血清，消化没有过度，状态又不一样了，增殖倒还算快。师兄说有的细胞需要特殊的氨基酸，这细胞需要么?附两照片，前者为刚买来时的，后者为现在的。

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2012-3-20 11:47

49279739.snap.jpg (29.24 KB)

eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

现在的细胞状态

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2012-3-20 11:48

30965027.snap.jpg (26.94 KB)

eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-20 11:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

明显的营养不良啊，请各位大虾指教

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