细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [分享帖]肝星状细胞实验步骤

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 43  1/5 12345››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[分享帖]肝星状细胞实验步骤

乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
1

发表于 2012-3-20 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[分享帖]肝星状细胞实验步骤



实验步骤如下
小鼠3%戊巴比妥钠腹腔麻醉。
以“U”型切口打开腹腔。将肠管推向腹腔左侧，暴露门静脉及下腔静脉


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:10
62312702.snap.jpg (74.52 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
2

发表于 2012-3-20 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

剪一小口，将充满灌流液的针头经小口插入门静脉，止血夹夹住


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:10
44719705.snap.jpg (72.51 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
3

发表于 2012-3-20 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

打开恒流泵的开关开始灌流，并迅速剪断下腔静脉。肝脏在灌注开始几秒内变成黄白色（灌注结束的时候，肝脏上可见白色纹理）。


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:11
54162499.snap.jpg (77.28 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
4

发表于 2012-3-20 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

灌流结束，将肝脏移至培养皿中，加入少量（5ml左右）solutionII，显微镜下尽量去除胆管和血管，剪碎肝组织


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:14
66142958.snap.jpg (20.84 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
5

发表于 2012-3-20 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
将搅碎的肝组织倒入50 ml的离心管，加入solutionII至30ml，加入胶原酶，pronase和DNase，37度水浴消化12 min。（如果前面的灌注不好的话，可以适当延长消化时间）


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:14
36866855.snap.jpg (80.32 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
6

发表于 2012-3-20 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化结束的时候能够看到部分未消化完的肝组织。（不知道其他战友们消化的时候是否也是如此）


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:14
80705520.snap.jpg (25.32 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
7

发表于 2012-3-20 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加入15ml血清终止反应。70μm过滤网过滤。
20G，4min离心，去除肝细胞（因为肝细胞重，所以会低速离心也能够沉下去）
收集悬浮液，450G，7min使悬浮液中的细胞都沉下去。吸掉悬浮液，加入15%optiprep，充分吹打，在其上轻轻加入5ml11.5%optiprep和5mlGBSS


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:15
75912434.snap.jpg (32.6 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
8

发表于 2012-3-20 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1400G，17min 离心。
GBSS和11.5%optiprep间能够看到浅白色的条带


查看积分策略说明
附件
2012-3-20 12:15
50399311.snap.jpg (29.3 KB)
 
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
9

发表于 2012-3-20 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

轻轻收集中间GBSS和11.5%optiprep间层5ml，加入5mlGBSS 450G，8min离心。吸掉悬浮液，加入适当的DMEM培养液，计数，培养

由于是拿手机拍得照片，可能不够清晰，请谅解。
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
10

发表于 2012-3-20 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

高手，小鼠也能插管，我的大鼠每次插管都容易脱管，惨啊，谢谢你的图片，很有参考价值
顶部
 43  1/5 12345››