[讨论帖]自己对大鼠皮质星型胶质细胞原代培养的纯化....

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标题:[讨论帖]自己对大鼠皮质星型胶质细胞原代培养的纯化....

TAT[使用道具]
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发表于 2012-3-20 13:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大鼠的星型胶质细胞我已经做了一段时间了，纯化的方法和主流的基本一样，但也有些区别。第一，我没有用差速法分离成纤维细胞。因为我的细胞基本上种完后15分钟就几乎全贴壁了（10%FCS，DMEM hight，），后来做荧光鉴定，也没有发现有成纤维污染。也许是侥幸吧。第二个区别是当细胞长到4-5天后，我根据细胞状态调一下培养基里血清浓度。因为星型胶质细胞比少突皮实，饿两天也没事，但少突就不行了。等到了7-10天，视星型胶质细胞的融合情况，再在摇床上一过夜，少突差不多就掉的差不多了。要是不满意，就把换液间隔的时间延长些，那时候，少突的状态已经不太好了，不过星型胶质细胞一样精神抖擞，再摇一边，就差不多了。一般文献上说通过传代，利用星型胶质细胞比少突长得快的特点，提高星型胶质细胞纯度，但是一般我要用3代以内的星型胶质细胞做实验，就把这个方法放弃了。这是我的一点点经验，希望大家交流，指正，谢谢！
下边两个图就是摇床处理前后的照片

附件

2012-3-20 13:44

83548276.snap.jpg (34.46 KB)

TAT[使用道具]
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发表于 2012-3-20 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

摇过的15-18小时，250rpm,37°C

附件

2012-3-20 13:45

25526970.snap.jpg (29.5 KB)

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-3-20 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前后非常明显阿

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发表于 2012-3-20 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 baidukk 于 2012-3-20 13:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

前后非常明显阿

对啊，第一张上的少突状态已经不太好了

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发表于 2012-3-20 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，我也在养胶质细胞原代。你调整血清浓度是怎么调的？还有一个关于摇床过夜的问题，摇床的速度怎么设定？摇的时候不用放到孵箱呢么？

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发表于 2012-3-20 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，我也在养胶质细胞原代。你调整血清浓度是怎么调的？还有一个关于摇床过夜的问题，摇床的速度怎么设定？摇的时候不用放到孵箱呢么？

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视Ac的生长状态，从5%-20%区间调整。比如种植后第三天，假如细胞状态不错，就在新培基里加10%，第五天时，融合了50%左右了，就把血清再下调点，如果第三天细胞不太好，就调到20%，效果很明显的。关于摇床，我用的是恒温气浴摇床，不在细胞间。摇的时候，换上新的培基，25CM的培养瓶加2ml，再把培养瓶用封口膜封好，就OK了。

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发表于 2012-3-20 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，我也在养胶质细胞原代。你调整血清浓度是怎么调的？还有一个关于摇床过夜的问题，摇床的速度怎么设定？摇的时候不用放到孵箱呢么？

+++++++++++++++

摇速是250RPM

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发表于 2012-3-20 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

感谢楼主分享！我最近也在做星胶，但是养出的细胞不知道如何与成纤维细胞区别（我做过差速贴壁40分钟），所以想请楼主发几张典型的星胶图片，我也把我的图片发给楼主请你帮我看看，感激不尽！

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发表于 2012-3-20 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

感谢楼主分享！我最近也在做星胶，但是养出的细胞不知道如何与成纤维细胞区别（我做过差速贴壁40分钟），所以想请楼主发几张典型的星胶图片，我也把我的图片发给楼主请你帮我看看，感激不尽！

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你要相差的，还是ICC的

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发表于 2012-3-20 13:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主你好，可否给我一份你养星胶的详细protocal和星胶的照片？
养星胶有三个月了，最头疼的就是成纤维细胞污染。
谢谢啦 ~~~

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