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标题: [讨论贴]超净台里的酒精灯，有害无益？ [打印本页]

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 16:54 标题: [讨论贴]超净台里的酒精灯，有害无益？

所在的实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？
在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。现将其放到丁香园上供大家参考，希望有经验的同学给个说法，超净台内到底应不应该有酒精灯。

Open flames are not required in the near microbe-free environment of a biological safety cabinet. On an open bench, flaming the neck of a culture vessel will create an upward air current which prevents microorganisms from falling into the tube or flask. An open flame in a BSC, however, creates turbulence which disrupts the pattern of HEPA-filtered air supplied to the work surface. When deemed absolutely necessary, touch-plate microburners equipped with a pilot light to provide a flame on demand may be used. Internal cabinet air disturbance and heat buildup will be minimized. The burner must be turned off when work is completed. Small electric "furnaces" are available for decontaminating bacteriological loops and needles and are preferable to an open flame inside the BSC. Disposable sterile loops can also be used.
摘自：cuturl('http://www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/bsc/BSC2000sec5.htm')

事实上使用酒精灯会造成空气对流，从而带起超净台面上的灰尘，反而增加污染的机会。更何况还增加了火灾的隐患。
摘自：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=6028528&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#6028528')

The flaming of lips of tubes and flasks must ALWAYS be done whenever culture liquid is to be poured from a container (e.g., pouring plates). Flaming should be routinely done when caps are removed from tubes during transfer of cultures. The purpose of flaming is not to sterilize, but to warm the tube and create warm air convection currents up and away from the opening. This "umbrella" of warm, rising air will help to prevent the entrance of dust particles upon which contaminating bacteria reside.
摘自：cuturl('http://structbio.vanderbilt.edu/chazin/wisdom/labpro/sterile.html')

受到加分的鼓励，把CDC这段生物安全柜的文章翻译了。错误之处，万望指正，谢谢。译文如下：
在生物安全柜几乎没有微生物的环境中，明火是不需要的。在开放的操作台上
（BSC之外)，通过灼烧培养瓶口，可以创造一个向上的气流，预防携带微生物的尘埃坠落入试管或培养瓶。而在一个生物安全柜中，明火产生扰动气流，破坏了供向操作台面的洁净空气的流向。如果真的确实需要明火，可以使用装备控制火焰大小的微型灯具。这样，柜内空气扰动和加热效应会减少到最低。需要火焰的操作结束后，必须关闭灯具。另外，相对于在生物安全柜内使用明火，更好的选择是使用电气化的“熔炉”来消毒接种环和接种针。一次性的无菌环也是一个选择。

作者: nn255 时间: 2012-3-23 16:54

1、快速过火是不可能杀灭细菌的，过火的目的是为了固定住细菌防止扩散，火焰的温度能够使气流形成负压，在酒精灯周围10cm处形成一个无菌区，操作在此范围内进行为好。
2、一些器械，包括镊子，剪刀，接种环，滴管尖端都可以采取火焰灼烤的灭菌方法。但是要烧烤足够长的时间，并且接触组织时要充分冷却。
3、在正常情况下，快速操作比在酒精灯附近磨蹭无菌效率更高~~~

作者: greenbee 时间: 2012-3-23 16:55

我认为超净工作台内应该放酒精灯。首先，超净台内的净化空气是从上面往下吹，它的热量可以形成对流，可以在局部形成无菌区预防微生物感染。其次，酒精灯的消毒作用也是不能忽视的：做实验时将培养瓶内的培养液或其它液体倒掉时，瓶口难免会有一些细胞，可以在酒精灯外焰上过几下，产生的高温可以消灭细胞，避免细胞交叉污染；装培养液和各种液体的瓶子口受污染的几率也是很大的，在火焰上消一下毒也能预防污染啊；超净台内的用过的吸管进行消毒也是必要的，因为紫外线不能100%的消灭微生物。再一个，我们老师在加拿大读博士后一直都是这样做的，应该没问题吧！
这只是我的个人想法，不一定对！也请高手发表一下意见，大家讨论一下吗！

作者: 33号 时间: 2012-3-23 16:55

1、快速过火是不可能杀灭细菌的，过火的目的是为了固定住细菌防止扩散，火焰的温度能够使气流形成负压，在酒精灯周围10cm处形成一个无菌区，操作在此范围内进行为好。
2、一些器械，包括镊子，剪刀，接种环，滴管尖端都可以采取火焰灼烤的灭菌方法。但是要烧烤足够长的时间，并且接触组织时要充分冷却。
3、在正常情况下，快速操作比在酒精灯附近磨蹭无菌效率更高~~~

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同意此观点！

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 16:56

1、快速过火是不可能杀灭细菌的，过火的目的是为了固定住细菌防止扩散.....

请问如何“固定住细菌”呢？在不固定的情况下，细菌是如何扩散的呢？

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-3-23 16:57

一般来说这种固定可能通过这样两种途径：
1、气流封闭，火焰产生热负压，使外界气流无法进入冷的容器内。
2、火焰的瞬时高温能使灰尘（上面附着细菌）粘附在瓶口处，而不会进入容器内，这有点类似作细菌染色时的烤片。一般瓶口处很容易积留灰尘，在打开盖子的瞬间会导致灰尘飞出。

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 16:57

超净台内的洁净气流是单向流动的，以此来保护操作对象不被超净台外面的空气污染。而酒精灯产生的火焰却干扰了正常的气流，有可能使含有灰尘颗粒的空气掺入超净台内。

作者: am10 时间: 2012-3-23 16:57

我们试验室采用美国势管理，在美国CELL CULTURE是看不到酒精灯的，我们实验室也禁止使用，被发现使用是永远不许进来做试验的。他们这样管理是有他们道理的，实验室到现在为止没有一例细胞培养有污染的。各位也谈论了很多酒精灯的利弊，但归根揭底弊是要远远大于利的，所以应该禁止酒精灯的使用！我相信随着我们国家的实验室条件的增强，酒精灯会绝迹的。转而更强调无菌操作，这才是细胞培养的根本。

作者: whitesheep 时间: 2012-3-23 16:58

我们试验室采用美国势管理，在美国CELL CULTURE是看不到酒精灯的，我们实验室也禁止使用，被发现使用是永远不许进来做试验的。他们这样管理是有他们道理的，实验室到现在为止没有一例细胞培养有污染的。各位也谈论了很多酒精灯的利弊，但归根揭底弊是要远远大于利的，所以应该禁止酒精灯的使用！我相信随着我们国家的实验室条件的增强，酒精灯会绝迹的。转而更强调无菌操作，这才是细胞培养的根本。

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我觉得不能单纯的看国外用不用酒精灯，就机械的去学习。因为国外细胞室是很干净的，洁净度很高，尘粒很少，净化台质量又好，有独立的通风系统而且细胞室内是正压，空气是只能从细胞室往外跑，而外面的空气进不来，他们污染的几率很低，用不着使用酒精灯，而国内，我们自问真正符合标准的细胞室有几个，我们的空气里的灰尘也比国外多得多，同意楼上的观点，酒精灯还是有很多好处的，总之，还是不要去掉酒精灯得好。

作者: gogo 时间: 2012-3-23 16:58

用或不用酒精灯？我们学校2种科研平台都有，一边是美式标准的实验室，禁止使用酒精灯，不用穿隔离衣‘不用带口罩帽子；一边是“正统”的无菌室，酒精灯必备还有进入前穿好隔离衣并戴好口罩帽子，强烈的反差，呵呵不过两边的细胞都养得好好得，所以个人觉得没有必要去争论这个东西，看个人习惯和具体地方情况了，反正都能养好细胞～

作者: pengke1983 时间: 2012-3-23 17:00

我们公司在美国总部的实验室都是用酒精灯的。所以，所谓的美国式实验室不用酒精灯显然是片面的。关于超净台要不要用酒精灯应该具体问题具体分析。比如说，培养的时候需要炙烤，那显然需要酒精灯。如果不需要炙烤，那点酒精灯显然就是多余了。

作者: jrwyyplt 时间: 2012-3-23 17:00

看了大家的讨论，想再说几句：

1、美国的细胞培养实验室一般都设在普通的屋子里，我在美国差不多呆过5、6个实验室，也见过不少其他的实验室，还没有见过细胞培养室单独特殊建造的。相反我发现国内的不少细胞培养室单独按照无尘车间的要求建造。究其原因，可能是因为国内的空气中粉尘比较多，污染的可能大些，所以对培养室的建造上反而下工夫。另外可能是因为国内无尘车间的施工便宜。在无尘车间中培养细胞，毫无疑问会减少污染的机会。但其施工成本，以及维护成本（无尘车间的过滤系统是要定时清洗和更换的，我担心不少的实验室以为造好车间就万事大吉了），还有进出的不便利，是不是值得，有待探讨。

2、就我在国外细胞培养实验室和我们公司的细胞培养实验室工作的经验，细胞培养室不需要一个异常洁净的环境。一般来说，地板如果是光滑容易清洗的（地坪漆、大理石、瓷砖均可），墙面使用不会剥落粉尘的油漆，窗户一般不要打开。这样的房间，只要定期（1-2天）拖地，就足够达到需要的洁净度了，因为真正的洁净环境是在超净台内。

3、回到要不要使用酒精灯的问题。首先在超净台内使用酒精灯的目的显然不应该是产生一个无菌的气相，因为超净台内的气相本来就是无菌的，所以使用酒精灯的目的，就是把有可能在瓶口的细菌杀死。那么只要在瓶口有合适的保护，就不需要了。我们实验室一般使用的培养液瓶在灭菌的时候，都会在盖上包上锡泊纸，使用过程中拿下，用完后又包上。所以我们是不使用酒精灯的。

在我看来，使用酒精仍然是从以前超净台技术比较差，或者是从普通场合中的无菌操作（比如普通实验室中一些分子克隆的操作）延袭而来的。在细胞培养的超净台内并不需要。有人提到美国的实验室中也有人使用酒精灯的，我的观察是在美国实验室中使用酒精灯的人往往是年纪比较大的人，或者一些照搬他们技术的人。

作者: milkdog 时间: 2012-3-23 17:01

放置酒精灯是常规，还用讨论吗？

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:01

问题的关键在于火焰消毒的方法和原理。细菌培养中使用的接种环或接种针需要使用火焰以加热到很高的温度，在这个温度下金属的接种环/针会变红，估计在1000摄氏度左右。多数实验室是使用本生灯来完成这种火焰消毒的。然而鉴于火焰消毒的不利因素，如干扰层流设备（laminar flow hood，即超净台）中的气流，并可能引起火灾，人们设计了无需火焰的电加热设备，开关在地面通过脚踏控制，消毒完后即可关闭。而在哺乳动物细胞培养中，显然没有像接种环/针那样需要加热到很高温度的情况。多数常规的操作只是将培养瓶口或镊子在火焰上晃动一两下，难以想象这样的消毒能达到足够高的温度以杀灭微生物。并且这种“任何东西都要烧一烧"的简单思想容易造成一些塑料制品的损害，比如一次性培养瓶/皿、移液器等。

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:03

推荐搜索google，关键词如下
"laminar flow cabinet"
"laminar flow hood"
"flame sterilization"
以及google图片搜索，”cell culture"。
请保留双引号以获得精确结果。

作者: kewanqi2011 时间: 2012-3-23 17:03

最近集中在做细胞转染的试验，养了多种细胞，污染也时有发生，在追究其原因的过程中有幸拜读了此topic，受益非浅，小弟的意见是：
1. 在开启培养瓶、皿等lids时用酒精灯烧一下主要目的肯定不是消毒灭菌，因为一时间不够长，二温度不够高，小弟认为烧一下的目的主要还是使容器口的particls黏附在局部，不至于在细胞操作过程中误入容器内；
2. 国外实验室大多不用酒精灯，个人认为国外实验室的整体enviroment要比国内好的多，比如空气中尘粒少，人员走动少，入细胞培养室有固定的工作服，hood的档次和质量也很高，所以基本上可以不用酒精灯；
国情不同，做事的方式也应该有所差异，个人意见在国内做试验还是保留酒精灯比较妥当！

作者: c86v 时间: 2012-3-23 17:05

why would the flame create negative pressure, and how does the negative pressure prevent contamination?

作者: eric930 时间: 2012-3-23 17:05

国情不同，做事的方式也应该有所差异，个人意见在国内做试验还是保留酒精灯比较妥当！
完全同意楼上的!!

作者: zsxan1990 时间: 2012-3-23 17:06

我觉得还是快速操作比较好

作者: toy 时间: 2012-3-23 17:06

我们点不点灯都无所谓了，实验楼外墙搞装修，天天台面上跟刚刮过沙尘暴似的，一层土，晕.......
细胞室的无菌环境才是关键，其次是操作要熟练迅速，做好防护（口罩，手套）。

作者: tieshazhang 时间: 2012-3-23 17:06

呆过两个实验室，我们还是在用酒精灯的。从一开始接触的时候就被传授要利用酒精灯制造的小范围无菌环境进行细胞培养操作。
一个实验室进细胞室很严格！而另一个就没有那么严！但细胞培养过程中的污染情况没有什么大的差别！感觉细胞没有我们想象中的那么脆弱，嘻嘻

今天又拿到经验了，升级中......

作者: tieshazhang 时间: 2012-3-23 17:08

现在的生物安全柜是不需要点灯的，因为经过过滤的空气本身就是洁净的，并且柜内是正压。

作者: 黄花菜 时间: 2012-3-23 17:08

过滤的空气是洁净的没错，但我们毕竟还要从超净工作台外向里面搬好多东西，尤其是原代培养，我不知道楼上有没有人做过原代，实验材料动物，实验器具，瓶瓶罐管的，和做饭差不多，如果试验地点环境不好，季节不好，再考虑试验动物本身这样那样的意想不到的毛病（我做海洋生物，相信各位对其脆弱易招病早有耳闻），所以，使不使用酒精灯，这根本就是因人因地因时而宜的事，如果条件够好，细胞没污染，当然可以不用。但如果条件不好，就得应用。真正的标准只有一条：细胞不污染。酒精灯只是过程和手段，不是标准。

作者: ritou1985 时间: 2012-3-23 17:09

酒精灯只是过程和手段，不是标准。
这句话很赞同．上面有人说不能杀死细菌，我想请教：细菌大约要多少度持续多久才能杀死呢？

作者: ffooll 时间: 2012-3-23 17:09

高温对细菌具有明显的致死作用，因此最常用于消毒和灭菌。大多数无芽孢细菌经过55～60度30～60min的作用才死亡，含芽孢的细菌，对高热有极强的抵抗力，如炭疽杆菌芽孢，可耐受5～15min煮沸，肉毒梭菌芽孢则需煮沸3～5hours。干热的杀菌作用主要为脱水干燥和使大分子变性，普通细菌80～100度1hour，芽孢需160～170度2h。至少本人在临床做真菌培育试验时，上级医生总是告诫我在做完一个临床标本以后，一定要把接种针烧红才能再次接种下一个标本，以防污染！我想我们在做细胞时，仅仅将瓶口在酒精灯上晃两下，难道就可以确切达到消灭所有细菌的目的？？？
老外强调在做细胞时，拿入hood里的所有物品一定要经过75％的ethanol擦洗，（国内真正有几个实验室真正做到此点），至少本人采用此方法以后污染明显降低，做原代也是这样，如果不强调无菌操作的观念，那么细菌污不污染岂不成了撞大运的事了！

作者: 131415 时间: 2012-3-23 17:09

我认为不应该用酒精灯,用消毒液消毒瓶口、器械就行了

作者: pengke1983 时间: 2012-3-23 17:10

超净台内使用酒精灯，是常规的方法。但如果无菌操作规范的话，即使不用酒精灯也不会污染细胞。需要注意的是，在超净台中由于存在对流的空气，酒精灯使用时酒精灯本身受热不均匀，使用时间稍长较易破裂。
但是，如果在生物安全柜中操作，请不要使用酒精灯，因为酒精灯火焰引起的上升气流会扰乱安全柜的循环气流，引起有害空气的溢出，对超作者产生不良的影响。

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:10

这个房间很普通，不是无尘车间

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=11360

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:11

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:11

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:12

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:12

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:12

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:13

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:13

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:13

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:14

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:14

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:14

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:15

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:15

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:15

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:16

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:16

cell culture

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作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:17

cell culture

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=11377

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:18

不少了，还有很多，在google里搜图片，“cell culture”。好像亚洲人不少呢，肯定大陆的有几个。

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:18

基本上没有戴帽子和口罩的，在我们实验室，专门的无尘车间，还要风淋，戴帽子口罩，又热又闷。

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-3-23 17:19

我觉得不能单纯的看国外用不用酒精灯，就机械的去学习。因为国外细胞室是很干净的，洁净度很高，尘粒很少，净化台质量又好，有独立的通风系统而且细胞室内是正压，空气是只能从细胞室往外跑，而外面的空气进不来，他们污染的几率很低，用不着使用酒精灯，而国内，我们自问真正符合标准的细胞室有几个，我们的空气里的灰尘也比国外多得多，同意ryochan 的观点，酒精灯还是有很多好处的，总之，还是不要去掉酒精灯得好。

我做了两年的单抗了，一直用酒精灯的做的很好的。如果不用可能也不会污染，但由于用惯了不用心里不踏实哈哈。这是我个人意见，还请高手指点。

作者: hyuu 时间: 2012-3-23 17:19

国外的细胞室洁净度高，有优质的净化台，有独立的通风系统且细胞室内是正压等优点，可以不用酒精灯，而我们达不到这些要求，当然要用了。我们实验室也有两种要求，一种是细胞室配有固定的工作服，鞋子，禁止将外面的东西带入，不用酒精灯。另一种是可以穿自己的工作服自由进入，可以将外面的东西带入，用酒精灯。不过，培养的细胞都很好，主要是个人操作，注意防护，我们就没有带口罩，拿进去的东西要用酒精消毒的。
也同意楼上的观点。

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:20

看了这么多帖子，学到不少新东西。有几个问题：
1. 酒精灯火焰消毒有没有效果？
2. 如果有效，什么样的物品是可以用火焰消毒的，什么样的又不可以。
3. 酒精灯火焰消毒有没有大家都接受的操作规程，比如火焰温度的要求，灼烧时间的长短，要求烧到的温度及持续时间。
4. 如何检测酒精灯消毒的效果？

作者: tangxin_80 时间: 2012-3-23 17:20

我觉得也是啊，我们实验室用酒精灯，也没有看到什么污染啊，国内的实验室怎么敢和国外的比嘛。洁净程度达不到可以使用一些经济节约的办法。比如说小量使用载玻片时就可以在75％酒精里浸泡后在火焰上烤干。简单实用。有些物品上沾上了液体也可以用火烤干。我们的超净台里经常堆一堆东西而且还两个人合用，还不是好好的。实践出真知。其实我觉得酒精灯在我们这个阶段完全实用。等到有一天我们的条件和国外一样了，就可以不用了啊。要用什么也要看我们的国情嘛。比如说买不起分装液体的瓶子可以自己从科里找输液瓶消毒了来用。好用的很，还不用掏钱。可以重复使用。不能像人家外国人一样买一次性的来用啊。

作者: langlang 时间: 2012-3-23 17:20

生物安全柜和超净台不是同一事物。超净台出现教早，是为了保护样品免受操作过程污染。其中的气体未经处理直接派出，不能保护工作人员的安全，而生物安全柜是设计用以保护操作者、实验室环境及实验材料避免接触在操作原始培养物、菌毒株及诊断标本等具有传染性的实验材料时可能产生的传染性气溶胶和溅出物。可分三级。是根据一种层流理论和HEPA过滤器的应用整合起来建成的。这一理论是指：达到某一恒定流速的沿一平行线单向流动的空气（如层流）有助于捕捉和排除空气传播污染物。但酒精灯的火焰能形成湍流，从而破坏这种保护性的空气模式。所以不能使用明火，可以用电子“炉”或微燃烧器代替。

作者: 66小飞侠 时间: 2012-3-23 17:21

大多数实验室还是用的吧，要不瓶口污染的问题怎么解决呢？

作者: glass 时间: 2012-3-23 17:21

生物安全柜里面建议不要使用酒精灯，因为酒精灯的火焰能形成湍流而破坏生物安全柜的垂直气流。细胞培养时，为避免污染需要注意的环节甚多，既或在生物安全柜里面操作也是这样，比如其HEPA膜并非一劳永逸，需要定期检测其除菌过滤效果，必要时用环氧乙烷或甲醛熏蒸或更换。建议在超净工作台和层流间内的台面上操作时最好还是使用酒精灯。

作者: glass 时间: 2012-3-23 17:22

我所在的实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？
在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。现将其放到丁香园上供大家参考，希望有经验的同学给个说法，超净台内到底应不应该有酒精灯。

Open flames are not required in the near microbe-free environment of a biological safety cabinet. On an open bench, flaming the neck of a culture vessel will create an upward air current which prevents microorganisms from falling into the tube or flask. An open flame in a BSC, however, creates turbulence which disrupts the pattern of HEPA-filtered air supplied to the work surface. When deemed absolutely necessary, touch-plate microburners equipped with a pilot light to provide a flame on demand may be used. Internal cabinet air disturbance and heat buildup will be minimized. The burner must be turned off when work is completed. Small electric "furnaces" are available for decontaminating bacteriological loops and needles and are preferable to an open flame inside the BSC. Disposable sterile loops can also be used.
摘自：cuturl('http://www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/bsc/BSC2000sec5.htm')

事实上使用酒精灯会造成空气对流，从而带起超净台面上的灰尘，反而增加污染的机会。更何况还增加了火灾的隐患。
摘自：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/6028528')

The flaming of lips of tubes and flasks must ALWAYS be done whenever culture liquid is to be poured from a container (e.g., pouring plates). Flaming should be routinely done when caps are removed from tubes during transfer of cultures. The purpose of flaming is not to sterilize, but to warm the tube and create warm air convection currents up and away from the opening. This "umbrella" of warm, rising air will help to prevent the entrance of dust particles upon which contaminating bacteria reside.
摘自：cuturl('http://structbio.vanderbilt.edu/chazin/wisdom/labpro/sterile.html')

受到加分的鼓励，把CDC这段生物安全柜的文章翻译了。错误之处，万望指正，谢谢。译文如下：
在生物安全柜几乎没有微生物的环境中，明火是不需要的。在开放的操作台上
（BSC之外)，通过灼烧培养瓶口，可以创造一个向上的气流，预防携带微生物的尘埃坠落入试管或培养瓶。而在一个生物安全柜中，明火产生扰动气流，破坏了供向操作台面的洁净空气的流向。如果真的确实需要明火，可以使用装备控制火焰大小的微型灯具。这样，柜内空气扰动和加热效应会减少到最低。需要火焰的操作结束后，必须关闭灯具。另外，相对于在生物安全柜内使用明火，更好的选择是使用电气化的“熔炉”来消毒接种环和接种针。一次性的无菌环也是一个选择。

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个人觉得：生物安全柜和超净台是两个不同的概念。
国内使用的超净台是不能和生物安全柜比的，这么简单的超净台根本做不到无菌的环境（可以说是个开放的空间），所以超净台内用酒精灯还是有必要的。
我们实验室在生物安全柜内，没需要不用酒精灯的，在普通的超净台内一定要用酒精灯的，不用的话细胞肯定死翘翘了。
大家都是明白人，都不希望用酒精灯，多麻烦呀。可我们又买不起生物安全柜，所以只能将就使用国货（超净台）了，国货＋酒精灯，绝配，符合国情，^_^。

作者: kulee 时间: 2012-3-23 17:22

我也来说两句。
我现在是养es 细胞的，我们这里用的是超净台，都用酒精灯，基本上没有发生过污染。其实曾经有一次因为没酒精了，所以没有点酒精灯就开始做，也没有污染，但是得声明操作时间比较短。
以前我还不知道原来还有cell culture是不用酒精灯的呢呵呵。
我觉得楼上讲的对，生物安全柜的滤菌能力比超净台强，所以不需要。我们用超净台做的还是配个酒精灯比较安心些。

作者: leifengta 时间: 2012-3-23 17:23

我的观点是:首先要规范操作;其次不要拖的时间太长;第三酒精灯在多长时间内不会影响台内气流需要考证,究竟需要台内空气外排吗?也许在适当时间内尽量减少空气强行流动会更好。

作者: leifengta 时间: 2012-3-23 17:23

看了大家的讨论，想再说几句：

1、美国的细胞培养实验室一般都设在普通的屋子里，我在美国差不多呆过5、6个实验室，也见过不少其他的实验室，还没有见过细胞培养室单独特殊建造的。相反我发现国内的不少细胞培养室单独按照无尘车间的要求建造。究其原因，可能是因为国内的空气中粉尘比较多，污染的可能大些，所以对培养室的建造上反而下工夫。另外可能是因为国内无尘车间的施工便宜。在无尘车间中培养细胞，毫无疑问会减少污染的机会。但其施工成本，以及维护成本（无尘车间的过滤系统是要定时清洗和更换的，我担心不少的实验室以为造好车间就万事大吉了），还有进出的不便利，是不是值得，有待探讨。

2、就我在国外细胞培养实验室和我们公司的细胞培养实验室工作的经验，细胞培养室不需要一个异常洁净的环境。一般来说，地板如果是光滑容易清洗的（地坪漆、大理石、瓷砖均可），墙面使用不会剥落粉尘的油漆，窗户一般不要打开。这样的房间，只要定期（1-2天）拖地，就足够达到需要的洁净度了，因为真正的洁净环境是在超净台内。

3、回到要不要使用酒精灯的问题。首先在超净台内使用酒精灯的目的显然不应该是产生一个无菌的气相，因为超净台内的气相本来就是无菌的，所以使用酒精灯的目的，就是把有可能在瓶口的细菌杀死。那么只要在瓶口有合适的保护，就不需要了。我们实验室一般使用的培养液瓶在灭菌的时候，都会在盖上包上锡泊纸，使用过程中拿下，用完后又包上。所以我们是不使用酒精灯的。

在我看来，使用酒精仍然是从以前超净台技术比较差，或者是从普通场合中的无菌操作（比如普通实验室中一些分子克隆的操作）延袭而来的。在细胞培养的超净台内并不需要。有人提到美国的实验室中也有人使用酒精灯的，我的观察是在美国实验室中使用酒精灯的人往往是年纪比较大的人，或者一些照搬他们技术的人。

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非常赞同,实验过程中要明确我们的目的,能够满足实验需求就行了,看情况决定用与不用!

作者: yueban-1147 时间: 2012-3-23 17:24

除了很多朋友着重强调的国外空气环境好之外，还有一点就是国外超净台的维护和质控有保证。很多大学或科研机构都有专门的技术人员定期（我当时所在大学好像是每三个月一次）检测各个超净台的运转情况，主要指标之一就是用仪器检测单位时间内从超净台内的上方飞落的粒子数，并且上面的滤网定期更换。大家可以看一下自己的超净台，什么时候做过这样的维护？特别是在国内这种空气条件下，滤网没准儿早就堵得查不多了。

作者: 00无名指00 时间: 2012-3-23 17:24

用酒精灯在国内已经是根深蒂固的传统了，我们实验室用的是生物安全柜，但是柜子外面的条件就差劲了，之前就已经讨论过要不要用酒精灯的问题，所以有一天我特地没有点想试下，结果被师姐看见一顿训斥，怎么不点酒精灯。：（～～

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:24

最近几个帖子的作者都认为中国的超净台不够好，并且跟生物安全柜的原理也不一样，所以里面不够干净，因此需要使用酒精灯的火焰来加热物品，预防污染。（不知总结的到位不）但是，酒精灯的火焰是不是可以用来预防污染，甚至是消毒呢？有效么？

有两种可能：
1. 有效。因为使用了酒精灯的火焰，我们中国的细胞培养才没有大面积的污染。那么酒精灯火焰需要把物品烧到多少度，多少时间，才能消毒呢？有没有大家都接受并且易于检验的标准呢？
2. 无效。类似于安慰剂，只是心理作用。有没有副作用呢？不知道。

作者: 3648755 时间: 2012-3-23 17:25

超净台内用酒精灯在国内企业中应是常规了，主要还是起一个消毒灭菌作用。于我们的环境质量、设备性能均有关。

作者: 3648755 时间: 2012-3-23 17:25

细胞培养的过程有时候有些"运气"的成分（如果用科学的术语就是概率），绝对不污染是做不到的，所以我们所作的一切都在于降低污染的概率，不要因为几次操作没有污染就否定某些措施的必要性，我认为酒精灯是否必要的问题我们也可以从这个角度来思考！
如果大家还记得我们大学的微生物实验都是在酒精灯的伴随下进行的，为什么呢？酒精灯是最简单有效的消毒措施，酒精灯火焰周围是天然的无菌区，所以在没有无菌室、超净台的时候我们用酒精灯，那么有了无菌室、超净台呢？我们还记得各自实验室的无菌等级吗？10万级？万级？超净台一般100级，这是什么意思？就那100级为例，100级是指1立方米空气中的5微米以上的尘埃数不超过100，也不是完全无菌是吧？前面已经有人指出了快速操作的必要性，原因就在于此。那么酒精灯呢，那种认为酒精灯会干扰气流的说法是没有依据的，超净台的气流是很强，大家在超净台里点酒精灯都会发现火焰是向外飘的，说明气流并没有所干扰，而且火焰也不会把外面的空气吸进去，所以这种担心是没有必要的！而事实上，酒精灯还是有帮助消毒的效果的，表现在：
1。经过酒精灯加热的器皿口会有上升气流，这样从瓶口掉落微生物进入瓶内的概率下降了，有人担心上升气流引起周围空气向瓶口流动带来更多微生物，其实不会如此，这是因为周围的气流不会流经瓶口（瓶口气流上升），所以其中微生物是不会进入瓶内的。开瓶之前先把口烧热，开瓶后污染就少得多
2。固定或杀死细菌/细胞，有人可能不太理解固定的意思，其实在实验室细菌自己是不会跑的（跑得太慢了），所以细菌的移动不是随着气流，就随着液流，我们适当灼烧瓶口等有液流的地方，使其干燥，就减少了细菌或细胞随液流扩散的可能性，这就是有用的。
3。必要的消毒措施，细胞培养室往往是多功能的，有时要做原代，动物或其内脏要进来，有些手术器械，适当灼烧可以避免污染。有些实验室条件不好，就更是必要了，吸管之类东西如果不是一次性，对高压灭菌又不是很有信心，那么烧一烧是少不了的。
那么为什么国外有些实验室不用呢？楼主发的照片其实就能回答了，大家回头浏览一下，他们超净台是不是都有很多东西？当东西太多的时候，酒精灯就是一个危险因素了，容易伤人，失火的可能性也很高。而且具我所知，国外很多实验室实际上也有类似的东西一般是煤气喷灯或者电热灼烧器，可以在方便的时候灼烧。
另外，顺便回答一下什么东西可以烧，什么不可以，烧多久合适等问题：
1。易燃易爆的不要烧（大家有些多余提醒是吧？可我就见过有人把装了酒精的瓶子去烧的）如果有大量的酒精、乙醚、苯等在超净台，就不要点酒精灯了，呵呵，不然习惯~~~~~~~
2。已经接触过溶液的吸管，玻棒，塞子等，不要长时间烧，可以过一下火
3。烧不要走过场，也不要时间太长，一般以烫手为度（胶塞例外），烧过吸管不要直接吸液体，在瓶口稍微冷却一下就好，不要反复烧。
4。酒精灯灼烧最大的问题在于可能因为高温带来化学污染（产生有毒物质），所以不要对含有机物质的物品长时间灼烧，在尽快完成操作和长时间灼烧之间选择前者。

作者: toy 时间: 2012-3-23 17:26

赞同楼上的

主要是人的因素，不是烧的因素

作者: whitesheep 时间: 2012-3-23 17:26

这个问题还是得看情况，不同的实验条件，与不同的实验要求不一样？

另外小弟想提出个问题：

不知道各位在考虑细菌在什么温度死亡的时候有没有想过一个问题：在“明火”条件下，细菌的生存能力是不是要重新考虑。

作者: zzzz 时间: 2012-3-23 17:26

本不想说什么，但觉得有些人对美国的看法有些片面。我在纽约，哥伦比亚大学，老板也挺牛，JCI的副主编。可是实验室真的不像你们想象的那么先进。超净台依然用火。美中之间有差距，但绝不像有些人想的那么大。好多地方被人为地夸大了。来看看吧。

作者: owanaka 时间: 2012-3-23 17:27

这个问题还是得看情况，不同的实验条件，与不同的实验要求不一样？

另外小弟想提出个问题：

不知道各位在考虑细菌在什么温度死亡的时候有没有想过一个问题：在“明火”条件下，细菌的生存能力是不是要重新考虑。

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"明火"杀菌当然也是要时间的，我们自己的手从火焰上过一下都不会烧伤,何况是比我们手"顽固"得多的细菌。但火焰上方的空气是经过燃烧的空气（经历温度在800C以上），在一定距离内是完全无菌的

作者: kulee 时间: 2012-3-23 17:27

本不想说什么，但觉得有些人对美国的看法有些片面。我在纽约，哥伦比亚大学，老板也挺牛，JCI的副主编。可是实验室真的不像你们想象的那么先进。超净台依然用火。美中之间有差距，但绝不像有些人想的那么大。好多地方被人为地夸大了。来看看吧。

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有道理. 牛人牛的是头脑，思路，想法和用于探索的精神，并非牛在设备上.

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:28

The flaming of lips of tubes and flasks must ALWAYS be done whenever culture liquid is to be poured from a container (e.g., pouring plates). Flaming should be routinely done when caps are removed from tubes during transfer of cultures. The purpose of flaming is not to sterilize, but to warm the tube and create warm air convection currents up and away from the opening. This "umbrella" of warm, rising air will help to prevent the entrance of dust particles upon which contaminating bacteria reside.
摘自：cuturl('http://structbio.vanderbilt.edu/chazin/wisdom/labpro/sterile.html')

每次从试管或者培养瓶中倾倒培养液的时候，都要使用火焰灼烧瓶或者管的盖子。当转移培养物时，也应该常规性的灼烧。灼烧的目的不是消毒，是为了加热试管以产生自瓶口处上升的热对流空气。这种热的空气“保护伞”能够防止携带有污染性质细菌的尘埃落入试管。

上面摘自一篇关于细菌培养中的无菌操作的文章，也是大家很熟悉的东西了，大肠杆菌扩增就是这么搞的。作者说在转移液体或者培养物之前要先用火焰灼烧瓶口，再打开盖子。这样瓶口就会比周围的空气温度高，空气受热形成密度较低的热气流，向上流动，也就是作者说的 “"umbrella" of warm, rising air”。向上的热气流的好处就是，能够预防空气中的尘埃飘落入试管或培养瓶，而细菌是依附在尘埃上面的。空气中微生物大多附着在灰尘粒子上，以微生物气溶胶（Microbiological aerosol）的形式存在于空气中。
很显然，原文中的细菌操作并不是在一个洁净空气环境下进行的，而且与超净台内需要垂直、匀速、向下气流截然不同的是，原文需要近乎静止的空气环境，以免干扰微弱的热对流空气。
虽然超净台内与原文中的环境相差很大，但是使用火焰的操作是相同的。问题在于，两者的目的差别明显，超净台内是为了杀死细菌，消毒；原文是为了产生热气流，防止尘埃落入培养体系。
假设原文值得相信（我感觉是有些道理的），那么相同的火焰操作，在两个截然不同的环境下，何以会有截然不同的目的

作者: @STAR@ 时间: 2012-3-23 17:28

我在生物安全柜里操作结核分枝杆菌也不用酒精灯的：）
在超净台里更加不用酒精灯，操作达到规范，是不会有污染的！

作者: 小鱼鱼 时间: 2012-3-23 17:28

我们单位对于生物安全柜内的操作是这样的:塑料制品不用酒精灯,玻璃制品开盖关盖都用酒精灯烧口.也没有发生细胞污染现象,我觉得挺科学的,供大家参考.

作者: 911 时间: 2012-3-23 17:29

大家有没有把酒精灯用炸的经历。我们实验室是垂直的超净台，不知是风力太强还是什么别的原因，经常要换酒精灯，真是郁闷！

作者: 小鱼鱼 时间: 2012-3-23 17:29

超净台要不要都行，但是有些生物安全柜规定不能用明火。

作者: bananapeople 时间: 2012-3-23 17:29

深有同感
酒精灯使用容易坏
我想应该能起到消毒的效果吧
但不知是不是有其他损害

作者: hold住 时间: 2012-3-23 17:30

看来还是争论不休啊，基本上还是用的比较多，看来习惯注意以后不要污染就好了·~

作者: hold住 时间: 2012-3-23 17:30

我现在美国排名第一的肿瘤中心的实验室，这里用于培养细胞的超净台里，从来不放酒精灯的，可能国情不同，可能大环境不同。

作者: 兔唇 时间: 2012-3-23 17:30

我自己的经历，法国和加拿大都是不放酒精灯的。但是如上有战友说的，任何物品进入超净生物工作台之前都喷洒75%酒精消毒。
也没有专门的细胞培养室，只是在普通的实验室里的一个工作台，不需要特别的防护。

作者: bamboo16 时间: 2012-3-23 17:31

我认为不能一概说国外特别是美国大多数实验室部用酒精灯，我们国内的实验室就要废除，因情况而定

至少我在细胞培养的时候用酒精灯还没怎么污染过

作者: 吴才子 时间: 2012-3-23 17:31

我们现在用的是生物安全柜，用的酒精灯火苗老是朝下走，都炸了好几个了，据他们的工程师讲，安全柜里只能用酒精喷灯，这种灯的火苗是朝上的，一般不会炸裂，比较安全。就是开盖、盖盖用酒精灯烧一下，一直没有污染过。

作者: 04906 时间: 2012-3-23 17:31

酒精灯最好不要用玻璃的，在安全柜里气流还是很大的，玻璃的易碎易暴．
我们实验室用的酒精灯是不锈钢的．挺好使的．好象也用不到酒精喷灯．

作者: dog002 时间: 2012-3-23 17:32

我个人认为还是放酒精灯比较好，按照传统的做法，我们在开培养瓶和关培养瓶的时候都会过一下酒精灯，这种做法也是安全起见，因为我们在打开培养瓶之后，瓶口是湿润的，如果超净台空气中有悬浮的细菌，它首先接触的就是瓶口，还有，我们在倾去培养液的时候（我一般是直接倒掉，有的同学谨慎点会用移液管吸掉），也有可能会有贱起的液体粘到培养瓶上，过一下酒精灯会一定程度上防止这些情况的污染，在加上高温在瓶口产生的瞬时负压，会阻止空气进入培养瓶，也对防止污染有好处。所以，我认为还是放酒精灯比较好点。

作者: dog002 时间: 2012-3-23 17:32

以前从来没有考虑过这个问题。我们实验室是常规用酒精灯的。不过细胞的抵抗力还是蛮强的。我养的是淋巴瘤细胞，一直没有污染。有一次想看看细胞污染后是什么样子，于是在超净台外面将细胞培养瓶瓶口拧开，抖了几下，让空气对流。结果过了好几天细胞都没有污染。于是我又对着瓶口吹了几口气。结果第二天就污染了。所以我的结论是戴口罩是很有必要的，呵呵。

作者: remenb 时间: 2012-3-23 17:33

因条件不同而定！

作者: hold住 时间: 2012-3-23 17:33

嘻嘻，说来惭愧，我是新手，在正统的无菌室里干活，是有酒精灯的，本来是要求穿白大褂戴口罩换鞋子的，但我都没有；而且有时无菌室里的超净台被人占了，我就把细胞拿到细菌房里的超净台换液——细胞一直都活得好好的。有一次不小心把细胞用紫外线照了半小时，结果就是不死。

作者: tuuu2 时间: 2012-3-23 17:33

还是看各国国情不同
以上几张PP都是生物安全柜是吗
那么和国内的超净台的洁净级别都是不同的
而且据我们海外回来的人员说，国外空气比国内的确干净
脏有脏的做法，在国内超净台条件下，保守点没错吧

作者: fox_79 时间: 2012-3-23 17:34

即使国内的空气很脏，即使超净台不如生物安全柜干净，使用酒精灯也不会有任何作用。酒精灯的火焰在短暂的作用于物体表面时，是不可能杀灭细菌的。大家使用酒精灯只是在浪费时间，增加起火机会而已。

作者: join 时间: 2012-3-23 17:34

同意以上观点，我们新买了生物安全柜，现在不打算点酒精灯，进入安全柜的东西用75%的酒精喷一下。

作者: 大白菜 时间: 2012-3-23 17:34

生物安全柜和超净台的风向是不同的，前者不需用酒精灯，后者用。

作者: bongte 时间: 2012-3-23 17:34

我们这边有用的有不用的，个人习惯吧。动作快的不用灯的也没污染，用灯的也有污染的

作者: vivian4123 时间: 2012-3-23 17:35

养细胞从没用过酒精灯的细胞也好好的呵呵

作者: vivian4123 时间: 2012-3-23 17:35

嘿嘿。

不知道大家有没有做过动态条件下的“超净工作台”、“生物安全柜”的微生物、尘埃粒子的监控？

从我们以前的数据来开，其实是怎么搞都可以达到100级的。还可以了。

作者: vivian4123 时间: 2012-3-23 17:36

这里的数据是这样的：

作微生物试验的时候用生物安全柜，用酒精灯，结果同步检测4小时，培养皿里面什么都没有长，可以认为没有什么的吧？

无菌培养的时候，用超净工作台，用酒精灯，同步检测4小时，结果，培养基里面什么都没有长，也可以说没有什么的吧。

也许您要问了，为什么我一定要用酒精灯呢？的确已经养成这样的习惯了，每次打开东东的时候，都用火焰烧烧容器口

从个人理解来看，如果大家作培养的，只要用到的东西都是有保证的，应该用不用酒精灯都是可以的吧。

作者: 中国特色 时间: 2012-3-23 17:36

超净台里的酒精灯，还是要放的。只是应用时需要注意安全就可以了。
放酒精灯，为无菌环境提供支持。

作者: ero11 时间: 2012-3-23 17:36

也想过类似的问题,但操作时难免会碰到一些有菌的东西,所以有酒精灯还是好一些,双保险吧!

作者: 831226 时间: 2012-3-23 17:37

高温对细菌具有明显的致死作用，因此最常用于消毒和灭菌。大多数无芽孢细菌经过55～60度30～60min的作用才死亡，含芽孢的细菌，对高热有极强的抵抗力，如炭疽杆菌芽孢，可耐受5～15min煮沸，肉毒梭菌芽孢则需煮沸3～5hours。干热的杀菌作用主要为脱水干燥和使大分子变性，普通细菌80～100度1hour，芽孢需160～170度2h。至少本人在临床做真菌培育试验时，上级医生总是告诫我在做完一个临床标本以后，一定要把接种针烧红才能再次接种下一个标本，以防污染！我想我们在做细胞时，仅仅将瓶口在酒精灯上晃两下，难道就可以确切达到消灭所有细菌的目的？？？
老外强调在做细胞时，拿入hood里的所有物品一定要经过75％的ethanol擦洗，（国内真正有几个实验室真正做到此点），至少本人采用此方法以后污染明显降低，做原代也是这样，如果不强调无菌操作的观念，那么细菌污不污染岂不成了撞大运的事了！
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我觉得楼上的说得不完全对.你所说的干热和湿热只是针对的不是明火,湿热我们最多是125度,干热也最多200度.但明火就不同了,酒精灯的外焰的温度大家应该是明白的大概有1000度左右吧.你们说这个效果一样吗?

作者: minran_1980 时间: 2012-3-23 17:37

我也认为超净台内可以不用酒精灯，特别是工业酒精，粉尘特别多反而影响超净台内的洁净程度。还有一个问题就是很容易爆炸，我本人做细胞工作3年左右碰到过两次。
楼上有人说进出超净台物品可能会有污染，我目前都是将进出超净台的物品能用过氧乙酸擦洗的就用过氧乙酸，不能用的就提前放入超净台用紫外先照射30min。。

作者: milkdog 时间: 2012-3-23 17:37

习惯问题和环境的洁净度，其实最重要的是操作规范！

作者: duoduo 时间: 2012-3-23 17:38

超净台和生物安全柜是两种不同的设备！超净台要酒精灯,生物安全柜不需要。

作者: any333 时间: 2012-3-23 17:38

在超净台内做了一次心肌细胞原代培养，从早上10点到下午5点，全程没有用酒精灯，所有液体里没有加双抗，取心脏是在超净台外，方法是75酒精浸泡5-6秒后取出，没有用大头针钉，（我知道还有更厉害的，直接用手抓住老鼠取心，是复旦的。也没有污染，）24小时后观察细胞，90%同步搏动。

所以我认为酒精灯可有可无，有的话只是一个心理作用，浪费一点酒精，别无它用。

作者: 小野花 时间: 2012-3-23 17:38

自己控制好可以不要，

酒精灯就是烧瓶口用，自己配培养基，用盐水瓶装，不烧就必须每次用完压酒精棉球在胶塞上然后包扎。

作者: any333 时间: 2012-3-23 17:39

不烧就必须每次用完压酒精棉球在胶塞上然后包扎。

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我没有压酒精棉球，只是封口膜封了一下。没有污染。吼吼

作者: DDD 时间: 2012-3-23 17:39

净化台内不应使用酒精灯，对气流组织有影响，从而影响到洁净度。

作者: is2011 时间: 2012-3-23 17:40

我们不放酒精灯的话才会被骂，像我们国内好多学校的培养室条件的当然不能跟国外比，能防微生物，但怎么清洁液不可能没有粉尘啊，我们头发上都有，所以用酒精灯可以锁住这些的扩散，我还记得大学做微生物试验接种的时候还要过火呢，我看在学校的学生，特别是新手，不用酒精灯比较悬，污染机会大

作者: redbutterfly 时间: 2012-3-23 17:40

我们实验室都用酒精灯，大家都习惯这样了，能过火的东西打开后都在火上过一下，下次试试不用酒精灯，看看会不会污染。

作者: redbutterfly 时间: 2012-3-23 17:40

同意此观点！

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超净台不就是让空气对流吗？

作者: nn255 时间: 2012-3-23 17:41

问题的关键在于火焰消毒的方法和原理。细菌培养中使用的接种环或接种针需要使用火焰以加热到很高的温度，在这个温度下金属的接种环/针会变红，估计在1000摄氏度左右。多数实验室是使用本生灯来完成这种火焰消毒的。然而鉴于火焰消毒的不利因素，如干扰层流设备（laminar flow hood，即超净台）中的气流，并可能引起火灾，人们设计了无需火焰的电加热设备，开关在地面通过脚踏控制，消毒完后即可关闭。而在哺乳动物细胞培养中，显然没有像接种环/针那样需要加热到很高温度的情况。多数常规的操作只是将培养瓶口或镊子在火焰上晃动一两下，难以想象这样的消毒能达到足够高的温度以杀灭微生物。并且这种“任何东西都要烧一烧"的简单思想容易造成一些塑料制品的损害，比如一次性培养瓶/皿、移液器等。

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非常赞同，我们实验室的细胞培养人员经常把试管口烧变形，导致密封不严，显然增大了污染的概率。而且有的超净台火焰被吹向内部，热空气根本不能达到操作区。我不使用酒精灯，甚至连风都不开，细胞好好的。提前UV照照台子就行了，照完了以后2小时内不要有可见光照射。自己把手洗干净，换上干净的实验服。环境干净，什么都好说。

作者: zhezhe 时间: 2012-3-23 17:41

个人认为生物安全柜是绝对不需要酒精灯，要不会影响本来的循环系统。但是超净台是否需要因人而异的，如果所处的环境达到一定等级，操作也比较严格可以不需要

作者: windy+++ 时间: 2012-3-23 17:42

楼上基本正确，感觉很多战友把安全柜和超净台的概念搞错了。

生物安全柜（biosafty cabinet，BSC)内禁止使用酒精灯，因为BSC内一般操作一定危险级别的生物物品，如感染性病原微生物等，因此需要安全柜本身设定的气流循环来形成安全封闭。加入酒精灯的明火，只会增加不必要的气流扰动，从而增加实验人员被感染的危险（注，是实验人员被感染，而非实验细胞染菌）。在BSC内如要对金属接种环（针）或玻璃涂布棒使用加热灭菌装置，应该使用无明火的本生灯或其他的电加热装置。Ps，现在接种环，涂布棒都有塑料的一次性灭菌装，可以直接使用。

超净工作台，就是常用的做细胞和细菌的那种，是可以用也可以不用。用的话，起到的心理效果大于实际效果；不用的话，只要操作严格规范，也是没有问题不会染菌的。
至于用还是不用，首先要明确为什么要用。早期没有超净台时，做微生物实验都需要在酒精灯的焰区附近做，以避免染菌，是因为焰区附近有火焰产生的上升气流，从而可以避免空气中的灰尘（附带细菌）掉落到实验器皿中（如培养皿等）；同时，火焰可以的高温可以对玻璃的培养瓶皿移液管等以及金属的接种针环进行烤炙，达到灭菌的效果。
但是现在所使用的实验器皿大多是已灭菌的一次性塑料制品，因此烤炙灭菌已经不太可能实现了。瞬间过一下火焰的灭菌效果能有多少还有待考证，但如同以前长时间烤炙必然把瓶子烤化（相信站内把瓶子烤化过的不在少数）。另一方面是有了超净工作台，其内部本身就是洁净空间，理论上就不存在灰尘携带细菌掉落的可能了（实际上还是有，后面会说到）。所以，由上面两点可以看出超净台内已经基本没有使用酒精灯的必要了。那么如何代替酒精灯火焰烤炙瓶口的灭菌效果呢？主要的方法还是75％酒精喷淋和擦拭，特别是瓶口和手套，上面提到的超净台内灰尘携细菌掉落的主要来源就是手套（手）和实验服衣袖，所以有的实验室有一种比较严格和规范的操作，就是要尽量避免手套（衣袖）掠过培养器皿的上空。

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