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标题: 离子交换树脂，用0-1.5M NaCl梯度洗脱，很难洗下来 [打印本页]

作者: sd71469190 时间: 2012-3-26 10:31 标题: 离子交换树脂，用0-1.5M NaCl梯度洗脱，很难洗下来

采用沸水提取植物根皮，茎皮，叶。提取液茎超滤，去掉了分子量小于5000的分子，然后冷冻干燥后，直接上离子交换树脂，用0-1.5M NaCl梯度洗脱，很难洗下来（目标成分多糖）。请问各位前辈，可能原因及解决方案，非常感谢啊。

作者: njyyyil 时间: 2012-3-27 11:44

你可以用醇水提取，可能会引入一些极性小的杂质

作者: xiongwei397 时间: 2012-3-27 13:40

应该用80度的水提取才可以啊，然后脱蛋白，脱盐，上大孔也可以啊

作者: swn_nyve_vb 时间: 2012-3-27 13:43

我们实验室的那位同学是先检测了多糖的含量，用的是苯酚硫酸法，分离用的是凝胶，然后用GPC做的检测

作者: ross_racheal 时间: 2012-3-27 15:09

为什么用树脂分呢？我感觉你的洗脱剂最好是拿Sephadex G系列的凝胶进行分离，你最好先用液相测定一下分子量在选择相应的凝胶型号，我那时候就是这么分离的，效果很好，祝楼主顺利

作者: sd71469190 时间: 2012-3-27 17:16

我们用沸水提取的目的就是模拟中药煎煮，然后研究其中的多糖。但沸水提取的杂质太多，糖含量只有10%不到。

现在国外老板叫我直接上，效果不好，用脱盐柱洗了之后，上样效果依然不好啊

现在我估计是沸水提取物其他杂质太多，影响分离效果，我们是用的ANX 4 fast flow，阴离子交换树脂。

我们测了多糖含量了，大约10%，目前想法是先有离子交换树脂分离后再用凝胶，可现在就是离子交换树脂效果不好，很难分离。

作者: maomi520 时间: 2012-3-29 13:26

水提醇沉法，好要脱蛋白，脱色素浓缩

作者: kflsjjfdl 时间: 2012-3-29 13:36

看来大家都一样，我们测得多糖含量也是10%，正愁着呢。不过我用大孔树脂测了一下，现在的含量提高到40%了，100%水洗下来的就是多糖，但是老师问我那60%是什么我答不上来了，唉。用离子交换是个好方法，你可以控制一下条件

作者: kamiu 时间: 2012-3-29 17:39

手段很多很多，比如你提后用试用不同尝试的醇沉，用不同精度的柱子超滤，或者后期不同温度沉淀都会有不错的效果

作者: eesa_dc_seein 时间: 2012-3-29 17:43

弱弱问一句，为什么选用离子交换树脂呢？你的糖不带电荷吧？我觉得可以选用凝胶柱。

作者: piaoliang110mei 时间: 2012-3-29 17:45

离子交换树脂可以用在多糖的脱色和脱蛋白上，当然有的多糖也带电荷，比如分子中含有葡萄糖醛酸的多糖，常用DEAE纤维素进行初步的纯化。
当然凝胶柱在多糖分离方面是最常用的。

QUOTE:

原帖由 eesa_dc_seein 于 2012-3-29 17:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
弱弱问一句，为什么选用离子交换树脂呢？你的糖不带电荷吧？我觉得可以选用凝胶柱。

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