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标题: [求助]293t细胞悬浮培养的条件 [打印本页]

作者: tangxin_80 时间: 2012-3-26 17:23 标题: [求助]293t细胞悬浮培养的条件

请问各位大侠，我想请问293t细胞悬浮培养的条件(包括放到细胞培养箱中的摇床的转速)和注意事项。谢谢各位，不胜感激。

作者: 04906 时间: 2012-3-26 17:24

你这个本来是驯化好了可以悬浮的还是贴壁的？后者的话需要一个驯化过程。

作者: tangxin_80 时间: 2012-3-26 17:25

我们现在用含10%FBS的DMEM养293t细胞，是贴壁状态，请问要怎么驯化成悬浮状态呢？是直接降低血清浓度还是要更换培养基呢？要驯化成悬浮状态才能放到摇床上去吗？还是驯化过程要在摇床上进行？谢谢各位了

作者: S6044 时间: 2012-3-26 17:26

你这个需要逐步过渡到无血清悬浮培养基，让细胞悬浮生长。培养基的更换是对细胞的一个驯化过程。这个过程的难易程度取决于你将要用的培养基的营养成分是否全面和丰富，足够支持细胞现有的代谢状态。简单的说，就是如果你更换的培养基好，那就容易驯化，如果不好，那驯化过程比较难，周期比较长。

一般情况下，细胞驯化采用循序渐进的方法，比如第一代用50%现用培养基+50%更换培养基，第二代25%现用培养基+75%更换培养基，依次往下，等细胞稳定后就换成全部100%的更换培养基。结合上面说的，好的培养基可能一代就可以完全更换，比如把HEK293细胞从DMEM+10%血清，更换到JRH的Excell293，或者把杂交瘤细胞更换到Gibco的hybridoma SFM中。不太好的，那有可能持续数十代，需要几个月的时间。甚至可能驯化失败。

这个过程需要有一定经验的人才能完成，不然会浪费很多时间。

作者: tangxin_80 时间: 2012-3-26 17:26

请问驯化过程要在摇床上进行吗？还是直接去静止平放在培养箱中就行了呢？谢谢哦

作者: glass 时间: 2012-3-26 17:27

请问驯化过程要在摇床上进行吗？还是直接去静止平放在培养箱中就行了呢？谢谢哦

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平放就行~~~
可以用6孔：这样从成本和细胞用量、实验进度考虑都是比较合理的

作者: Ao7 时间: 2012-3-26 17:27

请问下,那种无血清的悬浮培养基贵不贵啊?

作者: tangxin_80 时间: 2012-3-26 17:28

请问细胞怎么换液呢，6孔板养细胞细胞太少不太方便离心处理吧？

作者: S6044 时间: 2012-3-26 17:28

请问下,那种无血清的悬浮培养基贵不贵啊?

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比一般的培养基加血清还要贵多了。

喜欢换液可以离心，低速60g 10min没有关系

作者: dotaaa 时间: 2012-3-26 17:29

请问细胞怎么换液呢，6孔板养细胞细胞太少不太方便离心处理吧？

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用2.0ml离心管啊~~~6孔的细胞足够了

作者: tangxin_80 时间: 2012-3-26 17:29

用2.0ml离心管啊~~~6孔的细胞足够了

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请问把死细胞和悬浮的活细胞离心分开的转速应控制在多少转呢？怎么处理呢？谢谢

作者: 2541 时间: 2012-3-26 17:29

请问把死细胞和悬浮的活细胞离心分开的转速应控制在多少转呢？怎么处理呢？谢谢

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一般控制在500rpm，3——5min

作者: langlang 时间: 2012-3-26 17:30

请问驯化过程要在摇床上进行吗？还是直接去静止平放在培养箱中就行了呢？谢谢哦

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如果你的细胞现在是静置贴壁培养，那么在培养基更换的驯化过程前期（细胞在开始漂浮生长之前）继续用静置培养，而后用摇床低速（~60rpm）培养。如果细胞本就是摇床培养的，那整个过程中还是需要摇床培养。

作者: eric930 时间: 2012-3-26 17:30

如果你的细胞现在是静置贴壁培养，那么在培养基更换的驯化过程前期（细胞在开始漂浮生长之前）继续用静置培养，而后用摇床低速（~60rpm）培养。如果细胞本就是摇床培养的，那整个过程中还是需要摇床培养。

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大家好，我养的是重组的CHO细胞，转染并且挑取单克隆后得到几株表达较高的细胞株，但是在将该细胞株从10%血清驯化至无血清悬浮培养的过程中，血清下降至1%时细胞大量成团，有的漂浮有的贴壁，蛋白表达量也逐渐降得很低了，请问有经验的朋友可否给予些指导，感激不尽！

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