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标题: [求助]双标流式结果分析 [打印本页]

作者: join 时间: 2012-3-28 12:50 标题: [求助]双标流式结果分析

用组织制成单细胞悬液后作出的结果，检测了BRDU和nestin,各位前辈看看双标的结果怎样？

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作者: 乌贼老弟 时间: 2012-3-28 12:52

QUOTE:

原帖由 join 于 2012-3-28 12:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

用组织制成单细胞悬液后作出的结果，检测了BRDU和nestin,各位前辈看看双标的结果怎样？

都是死细胞。

作者: join 时间: 2012-3-28 12:53 标题: 回复 #2 乌贼老弟的帖子

楼上群友的意思是，都是细胞碎片吗？我这个组织是大鼠多甲经主动脉灌注后所得，然后机械和胰酶消化而成的，是不是这个原因？

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-3-28 13:06 标题: 回复 #3 join 的帖子

不是细胞碎片，绝大多数的细胞碎片你在FSC-SSC中已经排除了。
从流式图看，都是非特异性染色，感觉你的细胞都是没有活性的死细胞。

作者: join 时间: 2012-3-28 13:07 标题: 回复 #4 乌贼老弟的帖子

那是不是因为灌注的原因造成的？因为灌注后的细胞肯定是死细胞了啊，但细胞是固定了的啊
火箭状就代表了非特异性的染色，那分区的意义是不是就没啦？

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-3-28 13:07

请具体说明你检测的是什么细胞，经过了怎么样的处理，具体标记了哪些抗体？

作者: join 时间: 2012-3-28 13:08

我取得的是脊髓组织，经物理和胰酶处理,中间有经过三次离心，1000转，3分，制成单细胞悬液，标记的是BrdU和Nestin.
谢谢群友解惑

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-3-28 13:09

Brdu标记法多用于体内检测细胞增殖，是需要提前通过饮用水或者腹腔注射将Brdu导入大鼠内的。然后Brdu会进入增殖的细胞的细胞核内，检测时是需要固定打孔细胞，标记FITC偶联的抗Brdu抗体后才能检测到。不知你是否有提前导入Brdu？标记时细胞有没有经过固定打孔处理？另外，如果你的脊髓组织内的细胞不增殖，是没有Brdu阳性细胞的。
Nestin不知是什么，是位于细胞膜的抗原分子吗？你标记的是荧光素偶联的抗Nestin抗体吗？

作者: join 时间: 2012-3-28 13:09

群友所说的这些，都是符合的，因为前期我们课题组有人做过这方面的组化。nestin是胞浆内的。
我想问一下，有些老师前辈说这张图不好看，但是可以换张图表示，然后就可以啦，是这样的吗？

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-3-28 13:11 标题: 回复 #9 join 的帖子

可以换张图，只看单标的图，应该会有帮助。
这种图最好不要用十字来区分阴阳性，而是根据对照图设置阳性区域，该区域通常是不规则图形（梯形）。

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