分析测试百科

标题: [求助]我的骨髓基质干细胞怎么了？ [打印本页]

作者: pencil菲 时间: 2012-4-5 15:44 标题: [求助]我的骨髓基质干细胞怎么了？

我的骨髓基质干细胞原代培养生长良好，折光性好，细胞呈长梭形。可是每次传代之后，细胞形状就变了，高倍镜下呈类圆形，贴壁尚可，折光性不好，低倍镜下细胞立体感尚可。是我消化传代出现问题？还是细胞分化了？还是我培养过程有问题（但是原代生长没这问题）我问过师兄，他也没遇到过这问题。请各位高手帮帮忙，帮我分析下到底是哪个环节出现问题了，感激不尽！！！

作者: wmp1234 时间: 2012-4-5 15:44

我的骨髓基质干细胞最近也这样，不知道怎么回事啊？

作者: 911 时间: 2012-4-5 15:46 标题: 回复 #1 pencil菲的帖子

未给出你的培养条件，以及你细胞的代数，不便分析原因。
BMSC体外培养8~10代，一般不会发生分化。
一般细胞不贴壁的原因有：1、胰蛋白酶消化过度；
2、支原体污染；
3、培养瓶瓶底不干净；
4、培养基pH变化；
5、培养基或者消化液配置错误、过期或者储存不当；
6、传代不及时细胞老化；
7、接种细胞浓度太低。
请你结合自己的情况，对照以上原因分析，祝实验成功！

作者: ROSE李 时间: 2012-4-5 15:46

加了那些生长因子亚？有些是会促向脂肪分化的。血清里面培养基里面有激素也会。

作者: pencil菲 时间: 2012-4-5 15:46

谢谢各位帮忙分析，我用的是高糖DMEM，10%FBS；胰酶+EDTA，试剂都是直接购买，应该不会配错，没有加任何诱导剂，都在4度保存，培养瓶都一次性的。消化传代前计数有到100百万，原代5天后传的代，密度应该有达到传代水平。我看文献MSC有几种形态，那巨大扁平形的有点像，但是看多数人养出来的不会这种形态，真奇怪。到底怎么了？

作者: 831226 时间: 2012-4-5 15:49

基质干细胞所需的生长因子bFGF、EGF加了吗？

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:49

基质干细胞所需的生长因子bFGF、EGF加了吗？

————————————————————————————————————————————————————————————

这两样都没有加，我师兄也做这个细胞，没和我说过要加这两样，有的文献也没说，这两样必须要加吗？谢谢，还请多支招

作者: 8princess8 时间: 2012-4-5 15:50

我养骨髓基质干细胞也不加bFGF和EGF的，请问你养的是什么动物的干细胞，胰酶消化了多长时间，血清和培液用的哪个品牌？能否上传几张相片

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:51

我养的是3天的SD大鼠，在显微镜下观察消化的，时间很短，血清和培养液是HICLONE的，照片还没整理，整理好了上传。能否说下你的情况？

作者: 8princess8 时间: 2012-4-5 15:51

3天的SD大鼠也能取出基质干细胞来？好像一般用4-10周的大鼠比较多，大多集中在6-8周吧，我一般用6-8周的SD来养，消化时间太长对细胞是一种损伤，我一般只消化1分钟，使用加了EDTA的胰酶

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:52

可以的，我传一下我养的细胞的图。

图片附件: 92078882.snap.jpg (2012-4-5 15:52, 63.63 KB) / 该附件被下载次数 2
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=11501

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:53

这是原代第三天，用出生3天的大鼠MSCs活力应该会更强才是。我消化也是加了EDTA，消化过程并不长，镜下观察细胞还未变圆前就终止消化了，不知道你细胞培养过程有没有出现我的情况。

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:53

同样是第三天的

图片附件: 73205147.snap.jpg (2012-4-5 15:53, 47.02 KB) / 该附件被下载次数 0
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=11502

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:53

来个第5天的

图片附件: 71228671.snap.jpg (2012-4-5 15:53, 63.67 KB) / 该附件被下载次数 1
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=11503

作者: milkdog 时间: 2012-4-5 15:53

你的细胞长的好快啊？你检测过吗？这是干细胞吗？可能我见识比较短，我所看到的文献，以及我自己所养的细胞都是取的4-10周的大鼠，这个年龄的大鼠，3天不太可能长到这么多的细胞，也就是只能零散的看到一两个，或两三个聚集在一起的细胞形成的小集落！一般从5天开始才会疯狂的长起来！你的原代是成集落样生长的吗？你取3天的老鼠，有参考文献可以发下嘛？

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:54

我的是几只大鼠才弄一瓶，不像别人一只一瓶，所以可能会长得比较快。这方法养出来的就是MSCs，不用检测。这是我师兄的原话，他在华西做的实验，那老师都这样说的。应该还是比较权威的。

作者: milkdog 时间: 2012-4-5 15:55

奥，呵呵，长见识了！那你传代之后细胞的图片有吗？传代之后不要总是移动培养皿，你严格按照你师兄的方法也不行吗？

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:55

传代后的照片没有拍，因为刚开始养所以养的不多，有事离开几天叫别人帮忙养，结果给污染了，没来得及拍。形态就像我刚开始说的那样，下次养再拍下来，你的照片能再传几张吗？我下载了怎么打不开？谢谢。

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:55

我师兄后来也帮我传过两次代，第一次的时候挺好的，形态未见异常。第二次细胞也开始出现我贴子一开始描述的那样了，他也不清楚到底怎么了，说没遇到过这情形。你身边有没人遇到这样的情形？

作者: milkdog 时间: 2012-4-5 15:56

我周边的人也都没有遇到过这种情况，你可以试着换好点的血清和培液试试，你用的培液是低糖还是高糖，我觉得高糖的更好养

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:57

我用的也是高糖DMEM，如果是血清的问题，原代和P1细胞会体现出区别吗？下次用GIBICO的试试

作者: is2011 时间: 2012-4-5 15:58

应该用低糖的DMEM，你怎么用了高糖的？

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 15:59

我看别人的文献有用高糖的，论坛上也有说用高糖，低糖都行。高糖会影响到细胞形态吗？

作者: milkdog 时间: 2012-4-5 16:00

我个人经验是感觉高糖的细胞长的更快，更好，低糖时感觉细胞比较瘦小，长的也比较慢，当然这只是个人经验

作者: ladyhuahua 时间: 2012-4-5 16:00

又杀了一批SD，换了一下培养基，其它没变，发现原代细胞也含较多扁平细胞了，是不是应该怀疑是培养基问题导致的细胞形态改变？

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)