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标题: [求助]黑胶虫是怎么来的，怎样避免克服 [打印本页]

作者: langlang 时间: 2012-4-5 16:25 标题: [求助]黑胶虫是怎么来的，怎样避免克服

最近实验室的同仁老是说黑胶虫污染，具体表现就是高倍镜下有来回无规律穿梭的比细胞小几十倍的黑点在动，低倍镜下看不见。细胞培养液清亮，少的时候不影响细胞状态，多的时候影响细胞状态。也有人说黑胶虫不影响细胞，众说纷纭。
请教各位，你们有遇见黑胶虫么，黑胶虫到底是什么样子，对细胞有什么影响，能不能给一个统一的说法，总不能把所有难以察觉的污染都归功于黑胶虫吧。
敬请赐教！

作者: TAT 时间: 2012-4-5 16:27

黑胶虫污染发生的非常普遍。

以下是我们实验室同黑胶虫战斗的经验：
1黑胶虫是一种黑色，近乎实心，贴在细胞上的是不动的，游离的是在原地旋转或者震动，它几乎不能运动到其身体2倍距离以外。
2黑胶虫的来源我不确定是否是血清，但是我确定一点的是0.22微米过滤并不能除去黑胶虫。
3黑胶虫污染可以在细胞培养箱内传播，尤其是相邻的培养皿之间。
4黑胶虫污染可以通过规范的细胞培养操作和加双抗预防，只要做好这两点，应该完全可以避免黑胶虫的污染。
5另外如果细胞生长速度较快，黑胶虫的生长就比较慢。如果你的细胞能在1-2天内长满，黑胶虫的数量就会少很多。
6PBS只能洗掉部分黑胶虫，它是无法清除黑胶虫的。
7如果细胞不重要，一般都是扔掉，不做处理，同时培养箱也要消毒处理。
8如果细胞比较重要，可以用加有双抗的PBS每天清洗3次，看看几天后能否处理干净。
9少量的黑胶虫对于细胞和你的实验的影响不大，我看到有的实验室条件不好，用国产的倒置显微镜甚至都看不到黑胶虫，（实际上很多），但是他们的实验仍正常进行，几乎没有影响。

希望我的回答能对你有所帮助。

作者: langlang 时间: 2012-4-5 16:28

谢谢，你说的黑胶虫好像跟我们实验室的“品种”还不太一样，“它几乎不能运动到其身体2倍距离以外”，我们经常可以看到在高倍镜下到处乱窜的东西，不知道可不可以称之为“布朗运动”。这些东西都比细胞小几十倍，大概可以分为两种，一种是圆点，调细准焦螺旋可见中央发亮，可以慢慢游动。有人说这是细胞碎片。
另一种是杆状的，调细准焦螺旋可见中间发亮的腰肢。可以“扭着腰”满视野跑。有人开始怀疑是杆菌，但是如果是细菌污染的话，会很快殃及细胞状态，细胞培养液浑浊。但是这种杆状的东西貌似不影响细胞状态，培养液一直都是清亮的。
但是觉得这种东西应该是一种微生物，实验室有很多战友要做转染，说这种东西会影响转染结果，只要遇到上述两种情况，格杀勿论，全扔。
另外有一些师兄说这种东西对细胞影响不大，可以继续实验。
我不明白的是，高倍镜下看细胞是不是不容许里面有一点点动的东西。目前好像还没有看见每个视野完全没有动静的细胞。

作者: TAT 时间: 2012-4-5 16:28

你说的两种东西都是污染。

你师兄说可以用？我只能说以后你别听他的了。

你最后说的差不多，就是不能有动的东西。（有些人可以容忍一点点黑胶虫）

作者: langlang 时间: 2012-4-5 16:29

就是实验室里比我先做实验的人说的，
有的人说可以用，有的说绝对仍。
好像全世界对这个东西没有统一的定论，黑胶虫只是实验室流行的说法，有人一直不相信这东西的存在。
有的人甚至不清楚这种东西到底是不是一种生物。

作者: TAT 时间: 2012-4-5 16:29

那个PDF中说的黑胶虫和我说的，遇见的，完全一致。

除此之外的所有发现会动的，都得仍。这个最好也仍，看你自己了。

希望我的回答对你有所帮助。

作者: langlang 时间: 2012-4-5 16:29

还是有好多和你的不太一样，不然我会举双手赞成你的观点。
另外细胞老是扔弃，实验就没法做。有时候真的就不想管了。

作者: taoshengyijiu 时间: 2012-4-5 16:32

黑胶虫污染发生的非常普遍。

以下是我们实验室同黑胶虫战斗的经验：
1黑胶虫是一种黑色，近乎实心，贴在细胞上的是不动的，游离的是在原地旋转或者震动，它几乎不能运动到其身体2倍距离以外。
2黑胶虫的来源我不确定是否是血清，但是我确定一点的是0.22微米过滤并不能除去黑胶虫。
3黑胶虫污染可以在细胞培养箱内传播，尤其是相邻的培养皿之间。
4黑胶虫污染可以通过规范的细胞培养操作和加双抗预防，只要做好这两点，应该完全可以避免黑胶虫的污染。
5另外如果细胞生长速度较快，黑胶虫的生长就比较慢。如果你的细胞能在1-2天内长满，黑胶虫的数量就会少很多。
6PBS只能洗掉部分黑胶虫，它是无法清除黑胶虫的。
7如果细胞不重要，一般都是扔掉，不做处理，同时培养箱也要消毒处理。
8如果细胞比较重要，可以用加有双抗的PBS每天清洗3次，看看几天后能否处理干净。
9少量的黑胶虫对于细胞和你的实验的影响不大，我看到有的实验室条件不好，用国产的倒置显微镜甚至都看不到黑胶虫，（实际上很多），但是他们的实验仍正常进行，几乎没有影响。

希望我的回答能对你有所帮助。

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我们实验室最近一个月遇到你所说的情况，我们的结论是血清本身就被污染了。你说的培养箱内可以传播的问题，我们实验室好像没有遇到。同一个培养箱培养了几个人培养了不同的细胞，但是有的就没有发现。黑胶虫是一种黑色，近乎实心，贴在细胞上的是不动的，游离的是在原地旋转或者震动，它几乎不能运动到其身体2倍距离以外。我遇到的就是这样的，细胞生长的好的时候，这种东西就比较少，一旦细胞生长不好，这种东西就特别的多，我做过血清对照，在血清中有观察到这种东西。放置一两天后，这种东西就跟增殖一样，很多。

作者: TAT 时间: 2012-4-5 16:34

我们实验室最近一个月遇到你所说的情况，我们的结论是血清本身就被污染了。你说的培养箱内可以传播的问题，我们实验室好像没有遇到。同一个培养箱培养了几个人培养了不同的细胞，但是有的就没有发现。黑胶虫是一种黑色，近乎实心，贴在细胞上的是不动的，游离的是在原地旋转或者震动，它几乎不能运动到其身体2倍距离以外。我遇到的就是这样的，细胞生长的好的时候，这种东西就比较少，一旦细胞生长不好，这种东西就特别的多，我做过血清对照，在血清中有观察到这种东西。放置一两天后，这种东西就跟增殖一样，很多。

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1 传染并不是一下子都传染的，它是逐渐的过程，先是临近，然后是远一些的。当一皿中的黑
胶虫非常多时，临近那盘就开始有了。
2 黑胶虫黑有可能是血清中来的，你的小实验也能初步证明这点，但是也不能说血清是黑胶虫的唯一来源。

有什么见解咱们在讨论，也希望路过的高手给指出不足之处。

作者: langlang 时间: 2012-4-5 16:34

个人感觉黑胶虫在细胞状态好的时候不影响实验结果，不知楼上的怎么看待。顺便问一下，是不是进入夏季，黑胶虫就会更加活跃？

作者: TAT 时间: 2012-4-5 16:35

个人感觉黑胶虫在细胞状态好的时候不影响实验结果，不知楼上的怎么看待。顺便问一下，是不是进入夏季，黑胶虫就会更加活跃？

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有人这么说，但是我们发现就扔。

作者: fklo83 时间: 2012-4-5 16:35

我的细胞也发现黑胶虫了，可悲啊，晕，全仍了！！！
看了上面群友的介绍受益匪浅

作者: woshituzhu 时间: 2012-4-5 16:36

哎，我们实验室也跟黑胶虫战斗了1个多月，仍没有胜利，不知道从哪来的，不管它，细胞长得好，那个东西就比较少没错，但是我知道一直存在，悲剧啊

作者: langlang 时间: 2012-4-5 16:36

看来黑胶虫还是没有定论。
要求高的实验要做到宁可错杀一千，不可漏网一个。避免浪费老板的钱。
如果实验要求不是很高的话，个人认为，保持好细胞状态就行了。
反正我们实验室的黑胶虫闹剧就这么不了了之的结束了。
只是让大家知道了可能有这种污染，但是具体的谁也说不来。
真的不能把所有难以察觉的污染都归功于“黑胶虫”。
各位继续努力.......

作者: zhenxin 时间: 2012-4-5 16:37

我们领导的观点认为黑焦虫不是一种微生物，而是细胞状态不好的产物，现在正在让我们查找原因，一会儿另发帖说明请高手指点。现在我也基本认同这种观点，长满黑点的细胞经鉴定不是细菌。显微镜下观察血清黑点较多，但有黑点的血清在培养箱里黑点增长缓慢，可以认为不增长。

作者: yes4 时间: 2012-4-5 16:37

我们实验室曾经一段时间为之疯狂，发生了邻近培养箱传播的悲剧，打扫细胞房也无济于事，后来只好扔细胞，现在搬到一个新细胞房了。查了很多相关资料，最后结论是与血清有关，建议当发现“黑胶虫”后，更换正在使用的血清，不要心疼细胞了，直接扔了吧

作者: cj_mondy 时间: 2012-4-5 16:38

记得在协和上细胞培养课的时候，老师说过，世界上没有一篇文献报道过黑胶虫这种东西。
比细胞小几十倍的东西会是虫子吗？

作者: langlang 时间: 2012-4-5 16:38

相信有很多人都看到过这种小东西，
有人下意识的就认为这绝对是一种微生物，
有人觉得可能是状态不好的细胞裂解之后的产物，
就我个人查的资料看“黑胶虫”到现在还没有定论，没有人能说清楚这种“虫子”是否存在以及它对细胞以及实验结果的影响。
欢迎各位同志发表意见。

作者: duoduo 时间: 2012-4-5 16:39

最近养细胞老是出现污染，不知道是不是传说中的黑胶虫，请各位大侠指点。
培基不浑浊，低倍镜下可见很多渣滓样东西，高倍镜下可见杆状细菌样东西蠕动，还有小黑点到处窜动，洗也洗不干净，洗了又马上长出来，长到多时就会影响细胞状态，加双抗也没用，我用的是GIBIC血清，最近在做转染，细胞一直受这种东西困扰，无法进行试验，请高手指点。谢谢

作者: eric930 时间: 2012-4-5 16:39

我也遇到了这个东西，真是烦死了。在有抗生素的培养液里，细胞长得很好。但是一稳定转染就出来了

作者: glass 时间: 2012-4-5 16:39

传代时离心试试啊，对于不能扔的细胞可以试试啊。细胞悬液后，1000转离心3分钟吧，上清倒掉，然后用沉淀出传代啊，会有一点点作用啊。

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