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标题: 关于脂溶性水溶性两组等梯度色谱条件的连接 [打印本页]

作者: 波斯米亚 时间: 2012-4-11 00:35 标题: 关于脂溶性水溶性两组等梯度色谱条件的连接

小弟本科毕业设计用HPLC-DAD做复杂背景的物质定量测定物质中分脂溶性和水溶性两类初步试验做好了等梯度时测水溶物质约4分钟出峰完毕想连接直接后面测脂溶的部分试过了用测水溶物质的色谱条件平衡然后0.01min立刻换98%甲醇+2%水的条件但是最后一个物质还是出得比较晚请问还有什么方法能缩短下时间呢

还有个问题哈：我的水相加了三氟乙酸走梯度时上漂比较厉害和乙腈搭配3min左右也有倒峰出现但我还是想用较低的波长问下水相里用磷酸甲酸和乙酸哪个溶剂峰小些且梯度洗脱时影响较小

作者: jsz001 时间: 2012-4-11 18:26 标题: 回复 #1 波斯米亚的帖子

磷酸甲酸和乙酸建议使用磷酸，毒性低不挥发。溶剂峰可以通过空白扣除，用流动相溶解样品可减少溶剂效应。梯度变化幅度小一点，基线漂移会小一点。波长选择待测物最大吸收波长，响应值一般会增高，波长太低背景吸收高。适当控温可以调整保留时间。

作者: libaosun 时间: 2012-4-12 09:10 标题: 回复 #1 波斯米亚的帖子

在低波长下TFA的吸收还是可以的，不知道你的TFA浓度是多少，不过一般0.1%的浓度基线已经很好了，3min的倒峰是溶剂峰，是肯定有的；如果脂溶性成份不是很复杂，建议出完水溶性成份后用高有机相比例去平衡，而不是用测水溶物质的色谱条件平衡；那几个溶剂峰最小的还是TFA，再是磷酸、乙酸、甲酸

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