分析测试百科

标题: [求助]HepG2用什么方法转染好啊？！ [打印本页]

作者: hold住 时间: 2012-5-2 13:39 标题: [求助]HepG2用什么方法转染好啊？！

本来打算用脂质体转染HepG2，可是问了Invitrogen公司，他们说脂质体的转染效率只有10%，不知道用啥方法好呢？大家给个建议。
小女子在这多谢了！

作者: u234 时间: 2012-5-2 13:39

lipofectamine2000吧，我有一同学以前就用这个转的，转染效率还可以。你可以试一下，如果实在不行就用电转吧。

作者: hold住 时间: 2012-5-2 13:40

Invitrogen公司的技术顾问说lipofectamine2000的转染效率只有10%，所以郁闷住

作者: greenbee 时间: 2012-5-2 13:40

差不了多少了.也就这个10%左右.不过你可心试试除了lipo以外的其它公司的试剂.比如罗氏的,还有一些国产的.

作者: dotaaa 时间: 2012-5-2 13:40

lipofectamine2000转染有几个注意的地方，做得好的可能到20%以上，我曾经试过的。
1.一定要用invitrogen的opti-MEM,会比用自己的MEM效率要搞很多。
2.HepG2代数要少，最好是复苏以后传一两次就可以做转染了，这样效率比较高一些。
3.hepG2不容易消化开，最好消化的散一些比较好。

另外我试过Roche的产品，那个Fugene HD 似乎效果确实是比lipo要好，价钱上好像也像差不多。搂主有条件的话不妨试试。

作者: qhyu 时间: 2012-5-2 13:41

你问了哪里的技术顾问阿，hepG2用LP2000的效率绝对不止10%，我做过预实验的。

作者: S6044 时间: 2012-5-2 13:41

lipo2000转染hepg2效率确实比较低，细胞密度低一点，转染效果好一点。
Fufene没用过，听说效果不错。
传统的磷酸钙法也可以尝试

作者: hold住 时间: 2012-5-2 13:42

谢谢楼上的兄弟姐妹，我问的是invitrogen公司的技术顾问，他们推荐用病毒转染，说是这样效率会高些。

作者: kewanqi2011 时间: 2012-5-2 13:42

virus transfection或者电转都是不错的
我觉得电转是最经济实惠的，而且重组非常高

作者: hold住 时间: 2012-5-2 13:42

电转是挺经济实惠的，实验室最近新买了电转仪，可是以前没人做过啊，没经验啊。楼上的可能有经验，多指点一下吧！

作者: wmp1234 时间: 2012-5-2 13:43

电转，我们以前用的国产电转仪（宁波新芝的），用的是C25,U1000-1200,或者你可以多设几个条件，用GFP试一下，就可以了，还是比较好转的

作者: lixi559 时间: 2012-5-2 13:43

电转效果好一些。我的条件是350v 50uf 脉冲大概是6ms左右。楼主可以在300-400v间设梯度再看看。

作者: hold住 时间: 2012-5-2 13:43

偶买了Roche的产品，Fugene HD ，MEM有什么要求吗？

作者: october7 时间: 2012-5-2 13:44

电转死的细胞比活着留下来的还多，当然算起来效率高啦！

作者: lierichb 时间: 2012-6-22 20:22 标题: QIAGEN的转染试剂

QIAGEN的转染试剂效果也不错，而且有针对不同细胞类型，核酸类型的专用转染试剂。下面网站是专门介绍HepG2的QIAGEN官网。
http://www.qiagen.com/transfection/celllistlist.aspx?NucleicAcidID=0&ReagentID=0&TransfectionTypeID=0&CellLine=HepG2&CellLineSpecTissue=

作者: lierichb 时间: 2012-6-22 20:23 标题: QIAGEN的转染试剂

QIAGEN的转染试剂效果也不错，而且有针对不同细胞类型，核酸类型的专用转染试剂。下面网站是专门介绍HepG2的QIAGEN官网。
http://www.qiagen.com/transfection/celllistlist.aspx?NucleicAcidID=0&ReagentID=0&TransfectionTypeID=0&CellLine=HepG2&CellLineSpecTissue=

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)