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标题: [求助]贴壁的细胞如何进行病毒感染 [打印本页]

作者: 969 时间: 2012-5-2 17:47 标题: [求助]贴壁的细胞如何进行病毒感染

我养的人的卵巢颗粒细胞，算是贴壁的大细胞，需要用HBV病毒进行感染试验，进行了几次都没有成功，我的实验方法是HBV病人的阳性血清加聚乙二醇共孵育12小时后，用二甲基亚酚12小时，不知各位养过细胞，进行过病毒感染实验的高手给与指点，谢谢

作者: 101010 时间: 2012-5-2 17:48

请教下聚乙二醇和二甲基亚酚都是干什么用的？不会对病毒活性有影响吧？
我只接触过容易传代培养的病毒，标本直接接触单层细胞即可，所以没有这些处理。不太懂。

作者: 969 时间: 2012-5-2 17:48

那两个都是促进病毒与细胞融合的，应该对病毒没有什么影响，我看见有人用于HBV病毒感染肝细胞的时候也有用过的。不知道你有没有感染过HBV病毒，这个病毒需要什么样的条件，我发现我养的贴壁的卵巢颗粒细胞比较大，而且不太容易染色，是不是这样的细胞比较难被感染，我用苏木素染色5分钟都不太有颜色的

作者: yychen 时间: 2012-5-2 17:49

根据我的了解，HBV病毒的衣壳蛋白决定宿主细胞，比如肝细胞，要用一个常用的细胞系来验证

作者: 969 时间: 2012-5-2 17:49

是的，HBV感染细胞是取决于细胞表面有没有S1区的受体，但是有人实验指出，颗粒细胞表面存在膜联蛋白受体，我就是想看一下，颗粒细胞能否被HBV感染成功，我的感染条件需要进行怎么样的摸索？有前辈可以指点一下否？

作者: viviwang1987 时间: 2012-5-2 17:49

弃去培养液，用缓冲溶液清洗细胞表面2至3次控干水份。加入病毒稀释液35度左右进行病毒吸附，吸附过程结束以后加入细胞维持液完成。

作者: newway 时间: 2012-5-2 17:50

病毒稀释液是什么，我的HBV只能从病人的阳性血清中获得，是将血清稀释吗？怎么稀释，我所取得病人的病毒定量约7次方左右？细胞维持液又是什么？

作者: 49888 时间: 2012-5-2 17:50

细胞维持液是什么？
你这个问题问的有点不对吧？你还养细胞哪

作者: xueyouzhang 时间: 2012-5-2 17:50

细胞维持液应该就是细胞培养液，病毒稀释液我用的是没有血清的培养液。

作者: yhz1973 时间: 2012-5-2 17:50

我做过贴壁细胞的病毒转染不过病毒是请公司包装的楼主首先要确认你的病毒滴度是否准确！
转染步骤如下：
首先在你的细胞长到合适的时候换液
吸尽培养基把病毒用少量新培养基稀释后（稀释到适合的浓度，以实验方案为准）均匀滴在细胞上以刚好盖满培养皿底部为佳

轻轻摇晃使其均匀分布 37度 5% co2 常规培养箱放置30--60分钟

补足培养基即可

作者: owanaka 时间: 2012-5-2 17:51

我是做感染，不是转染。病人的血清代替胎牛血清，也是10%，这样的话病毒就稀释到10的5次方每ML了，不知道这个病毒量够不？感染要求病毒和细胞孵育多久

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