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标题: [求助]神经元不长是什么原因 [打印本页]

作者: tuomu45 时间: 2012-5-15 17:28 标题: [求助]神经元不长是什么原因

神经元养三天了一直是圆形，不知道是什么原因
实验很急，各位大侠帮帮忙，
感激涕零
我的培养基是DMEM+10%FBS,因为要做药理，所以没加其他的添加剂

作者: zhezhe 时间: 2012-5-15 17:28

楼主，神经细胞的培养比其他组织细胞要难，原因在于：
1、除个别例子外，神经细胞不进行分裂，其在平皿中长出神经纤维作为突触，但不增加细胞数，因此若混入增殖体细胞，其大量增殖会使好不容易得到的神经细胞被挤掉。
2、神经细胞在脑中大多为细胞体，伸出的轴索纤维和复杂的树状突起在制取细胞时易受较大损伤；
3、神经细胞的生长多需特殊的生长因子或与名称相符的特殊物质，而且与其神经细胞的种类关系密切。
所以，如果楼主养的是原代神经细胞的话，如果确认在取材时细胞未受太大损伤，活力较好的话，培养基中需加入高浓度的葡萄糖（33mmol/L)，以利于神经元的生长。维持培养液中还要添加15％FBS、10％HS、0.1％丁二胺、10mmol/L丙酮酸钠、5mg/L胰岛素等等。如果楼主什么都不加的话，养起来只怕是比较困难了。

作者: tuomu45 时间: 2012-5-15 17:28

我养的是胎鼠大脑皮层神经元细胞，除了DMEM+10%FBS,具体还需要加什么
谢谢指导

作者: mamamiya 时间: 2012-5-15 17:29

我做过胎鼠大脑皮层神经元细胞培养，用的培养基是GIBCO的neurobasal medium ，加 hepes，B27，Glutamine。专门养神经元的，长得蛮好。

作者: tuomu45 时间: 2012-5-15 17:30

我查FBS中也有转铁蛋白，胰岛素，和出生长激素等，为什么还要加别的东西
谢谢指教

作者: fsdd817 时间: 2012-5-15 17:31

FBS中的营养是不够的,
你可以加上B27,之外建议是用25mM的高糖

作者: tuomu45 时间: 2012-5-15 17:32

即使营养不够，也不能一点生长迹象也没有啊
请问楼上营养不够，一点不长是正常现象吗
还想请问大脑皮层神经元原代培养需要注意什么
养了2个月了，都不成功，实在很急，大家帮帮忙，先谢谢了

作者: summerxx 时间: 2012-5-15 17:34

建议用DMEM/F12加2% B-27,我原来养过2年多的胎鼠神经元，长得很好的。可以试试

作者: gemei0115 时间: 2012-5-15 17:35

建议用DMEM/F12加2%的B27；
你用的血清是哪里的？曾经因为血清的问题也耽误了很久，后来一直用JRH的还不错。祝好运。

作者: tuomu45 时间: 2012-5-15 17:35

感谢楼上的指导
请问鼠龄对细胞有影响吗
我养大脑皮层神经元用E15天的胎鼠成活率会很高吗

作者: gemei0115 时间: 2012-5-15 17:36

楼主说，“神经元养三天了一直是圆形”，我也曾遇到过这样的问题，考虑一下可能有这几方面的原因：
1 在原代细胞分离的过程中细胞受损严重，如消化过度，吹打过度等，有可能影响到细胞活力，导致细胞不贴壁，不分化；
2 不知道你是否选用贴壁介质，如多聚赖氨酸，laminin等，其浓度是否合适，贴壁与否对于神经元的生长很重要，个人认为。
3 至于鼠龄，你用的是E15，应该没问题的，文献好像E18或者新生鼠的有，因为鼠龄越大，其分化程度越大，当然也会有其他分化的细胞系，在神经元数量与纯度之间兼顾应该没问题。我们用E14的养神经元也不错。
祝好运。

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