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标题: [求助]培养基颜色改变 [打印本页]

作者: bgf5 时间: 2012-5-16 12:54 标题: [求助]培养基颜色改变

看大家一般使用的培养基时间久了颜色都由浅变深，这对细胞有影响吗

作者: 小野花 时间: 2012-5-16 12:54 标题: 回复 #1 bgf5 的帖子

培养基的颜色变化可能与ph改变有关，因为使用时间久了培养基内ph值可能偏碱，对细胞生长不利。可以加点Hepes缓冲液。

作者: bgf5 时间: 2012-5-16 12:55 标题: 回复 #2 小野花的帖子

不过传代吹散细胞时，培基也会由出现这样的颜色改变，是不是与空气有关，进了二氧化碳？

作者: vvmmoy 时间: 2012-5-16 12:55

呵呵，不知楼主用的是什么培养基，如果用1640、DMEM或M199等较为常用的培养基的话，一般刚配完的时候是紫红色的，因为加过碳酸氢钠，pH在7.2左右；在细胞培养了一段时间后，因为细胞代谢的原因，培养液的颜色会慢慢变黄，是因为有酸性代谢废物排至培养液中所至。培养箱中的CO2就是为了调节pH值用的。

作者: bgf5 时间: 2012-5-16 12:56

我用的是1640的培基，我不是说在培养瓶的培基，是买的500ml培基在配了几次液后，过了一段时间剩下的培基（没有加血清的）和已使用了一段时间的培基（加了血清的）颜色都较刚开始买时要深

作者: bongte 时间: 2012-5-16 12:56

我的培养基也是这样,我是买的已经配好了的.不知道楼主是自己配的还是买的配好了的?

作者: bgf5 时间: 2012-5-16 12:57

QUOTE:

原帖由 bongte 于 2012-5-16 12:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的培养基也是这样,我是买的已经配好了的.不知道楼主是自己配的还是买的配好了的?

我也是买已经配好的

作者: bongte 时间: 2012-5-16 12:57

QUOTE:

原帖由 bgf5 于 2012-5-16 12:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我也是买已经配好的

我也不知道是怎么回事,和你的一样.反正就那样用.

作者: yes4 时间: 2012-5-16 12:58

一般是变碱了，可以加几滴HEPES或者放到CO2培养箱内拧开1/4瓶盖放置20-30分钟后拿出使用都可以改变培养液的PH的。

作者: bongte 时间: 2012-5-16 12:58

变碱了还可以加几滴HEPES, HEPES本身是碱啊,怎么回事

作者: yes4 时间: 2012-5-16 12:59

楼上HEPES应该不是酸也不是碱只是起一个类似缓冲的作用吧。

作者: rxcc33 时间: 2012-5-16 13:01

我总觉得买的配好的培养基偏酸,你买回来大瓶培养基应该分装成小瓶

作者: kulee 时间: 2012-5-16 13:02

酸碱指示剂的作用，转载网上的资料：

大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4.但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4).由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡.如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L.细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换. HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加.在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.

作者: bohe221 时间: 2012-5-16 13:02

是因为二氧化碳从溶液中散出的缘故
一般可以通过加入二氧化碳来调节pH，可以放到CO2培养箱内拧开1/4瓶盖放置20-30分钟后拿出使用
但要注意杜绝污染

作者: bgf5 时间: 2012-5-16 13:03

这个办法挺有效的，不过我放在培养箱中差不多有3、4个小时，不知对培基成分会不会有影响？

作者: join 时间: 2012-5-16 13:03

我的培养基第二天就会变的很黄,是什么原因呢,怎么解决啊?

作者: orangecake 时间: 2012-5-16 13:04

楼上HEPES应该不是酸也不是碱只是起一个类似缓冲的作用吧。

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HEPES
英文全称：4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid; N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid; 2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine]ethanesulfonic acid
中文全称：4-羟乙基哌嗪乙磺酸; N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸
分子式：C8H18N2O4S
分子量：238.30

HEPES buffer缓冲溶液的配制方法关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES＋NaOH，另一种是HEPES＋盐。各种配制方法总结如下：
一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2），然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。
二、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。
三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。

作者: zwsyrt 时间: 2012-5-16 13:04

培养基不培养细胞还是不要常放到培养箱去，因为谷氨酰胺会加快失效的，而且双抗在37度下24小时后就完全失效了，血清中的有些成分也会失效的，我用的培养基也会颜色加深，应该是变碱了，但培养时对细胞没什么影响，我的培养基配置时就补了Hepes。

作者: yychen 时间: 2012-5-16 13:05

呵呵，不知楼主用的是什么培养基，如果用1640、DMEM或M199等较为常用的培养基的话，一般刚配完的时候是紫红色的，因为加过碳酸氢钠，pH在7.2左右；在细胞培养了一段时间后，因为细胞代谢的原因，培养液的颜色会慢慢变黄，是因为有酸性代谢废物排至培养液中所至。培养箱中的CO2就是为了调节pH值用的。

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培养基中一般加了酚红，当细胞生长代谢使培养液中ph变化时培养液就会由红变黄。
但是培养箱中的CO2我认为不是为了维持培养夜的ph，而是为了模拟细胞的体内环境，CO2若不维持在5%是不能存活的。

作者: 49888 时间: 2012-5-16 13:06

二氧化碳溢出导致ph偏碱，一般配好培养液罐装入瓶后要密封可以减轻。如果偏碱，可以在使用时加入少量盐酸。或者培养细胞在放入培养箱内是拧松瓶盖。二氧化碳进入会使ph维持正常。

作者: bgf5 时间: 2012-5-16 13:07

这么讲的话也是啊，那也就不用怎么处理了，因为二氧化碳总要进到瓶子中，就可以中和碱了。

作者: yueban-1147 时间: 2012-5-16 13:08

平常使用的培养基都发现有这样的现象，建议在配制的时候将碳酸氢钠的加量减至三分之一配方量

作者: ffooll 时间: 2012-5-16 13:09

请问一下诸位：我所用的培养液是高糖DMEM（公司配好的），加入了15% FBS，细胞换液后3-4小时左右培养液颜色变为很浅的黄色，但培养液透亮，镜下观察（10--40倍）均未发现异常，请了实验室有经验的同学看，也认为不像是污染，所以请教一下，是培养液的PH值导致的颜色变化吗？
期盼回复，谢谢！

作者: ffooll 时间: 2012-5-16 13:09

补充
还有细胞有些皱缩现象，本身我所养的细胞极易聚集成团生长，镜下观可见成堆的细胞团，细胞体积较正常小。
我应该怎么处理呢？

作者: zzzz 时间: 2012-5-16 13:10

建议楼上先测定一下培养液的PH值吧,用精密PH用试纸测就可以了

作者: ffooll 时间: 2012-5-16 13:11

另外培养细胞加的小牛血清一般是10%,是不是和血清浓度比较高有关系呀?细胞增殖比较快时有时会有细胞团出现的.

作者: fei1226com 时间: 2012-5-16 13:12

我所养的MIN6 细胞增殖并不快，相反长得还比较慢，不过即便是有空间，细胞也喜欢聚集生长，甚至“覆盖”生长，因为才养这种细胞，也不清楚是不是这种细胞的特性。
至于胎牛血清的含量，是师兄给的，考虑可能这种细胞对营养需求高的缘故吧。

作者: yes4 时间: 2012-5-16 13:12

楼上你好！
我养过的一个肿瘤细胞曾经也出现细胞团，查了资料说可能是某种细胞因子起的作用，从实验结果看没什么影响，后来没做处理就好了，建议你再查一下资料。另外请问楼上你的细胞是集落细胞吗？如果是正常的集落就没关系的。我们有一个细胞就是NFS-60就是集落生长的。

作者: ffooll 时间: 2012-5-16 13:12

你好。我养的不是集落细胞。是否是某些细胞因子促使细胞成团——我也不清楚。也查不到相关资料。
很感谢你的回复！

作者: gogo 时间: 2012-5-16 13:14

培养基不培养细胞还是不要常放到培养箱去，因为谷氨酰胺会加快失效的，而且双抗在37度下24小时后就完全失效了，血清中的有些成分也会失效的，我用的培养基也会颜色加深，应该是变碱了，但培养时对细胞没什么影响，我的培养基配置时就补了Hepes。

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啊双抗37 度24小时就完全失效了？？
那象我平时养细胞的时候都是先从4度拿出来37的，那不是慢慢就失效了。

还是你的意思是连续24小时？

多谢答疑

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