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标题: [求助]流式结果分析 [打印本页]

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:15 标题: [求助]流式结果分析

请大家帮忙分析一下
Diploid: 100%
G1 :53.66%
G2/M : 0.00%
S : 46.34%
G2/ G1 :2.06
不知为什么没有DI值（Diploid是吗？）
我主要是看看细胞有没有异倍体。

还有一个结果，CV值>8%，可能是细胞本身的问题，还是做流式的问题呢？因为是让公司做的，如果是公司做的问题，好让他们重做！
麻烦了！谢谢

作者: glass 时间: 2012-5-22 16:16

呵呵，居然有公司收费做流式！
把图贴上来解释得才最准确。

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:16

这是图，谢谢！

图片附件: 57211008.jpg (2012-5-22 16:16, 27.82 KB) / 该附件被下载次数 6
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作者: glass 时间: 2012-5-22 16:16

因为我没有用过modfit，不确定A-H的设门是否正确，所以下面的话没有百分百的把握。
但是如果A-H设门是正确的，那么这样的DNA含量分布不用再分析了，因为具有明显的非周期特征，所以不管什么软件，不管谁来都没得救的。
建议重新制备样本，上机检测最好找有较丰富DNA分析经验的老师做，公司不一定靠得住的。

作者: glass 时间: 2012-5-22 16:17

你贴在上面的数据可以扔掉，没有任何价值的。

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:17

好伤心！
上面的大侠能不能说明白一些，到底那里不对呢？怎样的数据才是正确的呢？能不能给点例子看一下呢？
谢谢！

作者: lagua123 时间: 2012-5-22 16:17

个人认为这种情况多发生于细胞不纯的情况，特别是组织直接分离的细胞，未经纯化，选取细胞群时选取了多种细胞，或者上样分析时没有设门去除细胞团和碎片的影响，导致结果无法分析。建议重做。

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:18

我们最近在调试新购置的流式时，作DNA时也出现过这个样子的图，技术支持说有可能是细胞太大造成的，后来通过调节仪器的光斑解决了问题，正常的图应该是下面这样子的（网上搜到的）。

我觉得还是你的流式没有做好，正如楼上所说，可能细胞分析对象选取有问题，从你的图上看，它那个门设的太大了，基本上全部选取了，这样的话，有可能不能去除碎片和粘连的细胞，影响结果。没有出来比较满意的图形，那么后面分析也就没有意义了。

另外分析软件也是死板，我们用的是BD的，正常细胞分析一般选择周期模式，但是如果选择调亡检测的模式，它也能硬给你找出一个调亡峰。我想你用的软件应该也差不多。你也可以认为是S期为零。

还是作出满意的直方图后再分析吧。

刚接触流式，聊一点看法，仅供参考。

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作者: glass 时间: 2012-5-22 16:18

我们最近在调试新购置的流式时，作DNA时也出现过这个样子的图，技术支持说有可能是细胞太大造成的，后来通过调节仪器的光斑解决了问题，正常的图应该是下面这样子的（网上搜到的）。

我觉得还是你的流式没有做好，正如楼上所说，可能细胞分析对象选取有问题，从你的图上看，它那个门设的太大了，基本上全部选取了，这样的话，有可能不能去除碎片和粘连的细胞，影响结果。没有出来比较满意的图形，那么后面分析也就没有意义了。

另外分析软件也是死板，我们用的是BD的，正常细胞分析一般选择周期模式，但是如果选择调亡检测的模式，它也能硬给你找出一个调亡峰。我想你用的软件应该也差不多。你也可以认为是S期为零。

还是作出满意的直方图后再分析吧。

刚接触流式，聊一点看法，仅供参考。

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很不幸，你很有可能真的说错了。
周期荧光分布特性和细胞大小无关，只要DNA含量均一性好，周期特征就很明显，分析起来就很准确。
当然了，我知道有一种机型就是BD的Aria因为是超小光斑，容易出现荧光饱和现象，但是应该和楼主的情况不一样的。所以你们的技术支持...
正常细胞分析不可能一般性选择周期模式，因为PI单染测定周期只是流式系统的其中一种应用，所占比例较低。凋亡和细胞周期也没有必然联系。
其实我不反对大家积极发言，但是考虑到发言有可能影响其他没有经验的同学的判断和操作，我还是建议你先不要急着对流式问题发表意见，可以先操作半年，积累了一定的经验并加深了该领域的理解后再发言不迟。

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:19

谢谢，接受楼上建议。不过我也确实没有指导别人的意思，就算是讨论吧，也算是验证自己所学，我上面说的应该很谦虚或者说没有底气了吧

我也知道流式细胞用途极大，但是我说的是BD的配的一款分析软件的模式选择，是将dna分析结果导出后分析的，与流式已无关状态下操作的，是在分析有调亡峰与分析细胞周期是两种不同的模式而已，大概前面说模糊了，抱歉。那个软件确实有如此选择模式，我也不敢乱说的。

顺便请教一下，楼主的门设定是否有问题呢？几乎全选？

作者: junjie05 时间: 2012-5-22 16:20

glass老师非常客观，请楼主不用见怪！

从论坛的角度来看，我们支持各位积极发言，无论对错，讨论都会有其意义。当然，如果不肯定，最好加上特定的清楚地严辞表示出来，以免对他人造成误导。楼主表示的不太清楚，但是绝对看不出武断的意思，非常感谢您的参与！！

关于结果，各位老师都已经说了，自己懂得不多，不枉自猜测了。仅问一下，您上机的细胞是培养细胞还是临床标本？把fsc/ssc的图也发上来看看！最好把源文件copy一份！

感谢各位老师的积极参与！

好运！

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:20

我重新做了一次,是培养的细胞,做流式的老师是外校的,只发给我这种图.能分析吗?只要说明没有异倍体就行,我不是专门研究流式的,不太懂.

图片附件: 96508863.jpg (2012-5-22 16:20, 23.18 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=12236

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:21

还有一个

图片附件: 10894471.jpg (2012-5-22 16:21, 15.85 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=12237

作者: glass 时间: 2012-5-22 16:21

是代表增值比例的SPF上升。
没有异倍体。

作者: vvmmoy 时间: 2012-5-22 16:21

图不错,没有异倍体,不过:在做实验时应该把要求跟操作者说清楚(因为软件使用起来不一样),否则操作员会根据常规进行,不一定符合你的要求.看来你用的仪器是CANTO

作者: Ao7 时间: 2012-5-22 16:22

是代表增值比例的SPF上升。

请问“SPF”指的是什么

作者: tudou85 时间: 2012-5-22 16:22

请问我这图前面白色的柱子样的东西是什么，我做的是细胞周期。

图片附件: 35963559.gif (2012-5-22 16:22, 4.61 KB) / 该附件被下载次数 9
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=12238

作者: bananapeople 时间: 2012-5-22 16:22

如果你在设置中勾选了除碎片，就会呈现白色的柱子

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