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标题: [求助]细胞转染后抗生素选择 [打印本页]

作者: huifeng0516 时间: 2012-5-24 12:51 标题: [求助]细胞转染后抗生素选择

细胞转染后建立稳转细胞系大多用G418来杀，可是这种抗生素的选择是根据什么来确定的呢？还可以用其他的抗生素吗？

如果一个载体上有两个抗生素基因，氨苄青霉素和新霉素，那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来杀细胞呢？刚结束这方面的知识，不甚了解，恳请高手指点迷津！非常感谢！

作者: 831226 时间: 2012-5-24 12:51

虽然我也是不是太清楚，但是应该看转染是细菌还是细胞
氨苄青霉素是来选细菌的，大肠杆菌。
新霉素是选细胞的，哺乳动物细胞。

作者: huifeng0516 时间: 2012-5-24 12:51

那么neo基因是什么基因?查了好多资料说带neo基因的用G418来杀细胞,我以为neo就代表是新霉素基因呢?

作者: moonlight45 时间: 2012-5-24 12:52

带neo基因的细胞用G418来筛选。wo

作者: huifeng0516 时间: 2012-5-24 12:53

有的载体上带有neomycin，这个就是带neo基因吗？

作者: wsll 时间: 2012-5-24 12:55

标有neo（实际上应该是neo resistance)的载体，指载有降解新霉素的基因，新霉素作用于原核和真核细胞，对两者都有杀伤作用。用于转染后，稳定表达外源基因细胞的阳性筛选。
标有amp(实际上应该是amp resistance)的载体，指载有降解氨苄青霉素的基因（β－内酰胺酶），作用于原核细胞，只对敏感菌有作用。用于克隆菌的筛选。

除此之外，用于克隆菌的筛选的还可能有氯霉素（标有Cm），卡那霉素（标有kana);
用于阳性细胞筛选的还可能有潮霉素（标有Hyg),等等。。。

所以不管是做细菌克隆，还是其后的做细胞表达都要根据载体的说明选择相应抗生素，不是可以随便用的。
做细胞表达时，如果只是要求短时表达（即所谓瞬时转染），可不必用细胞抗生素。

作者: kuaizige 时间: 2012-5-24 12:55

楼主说的应该是质粒转染细胞，筛选出稳定表达新基因的细胞系吧。筛选所选用的抗生素是跟你转染所用的质粒上所带的真核筛选抗性基因有关的。最常见的载体上带有新霉素抗性基因neo，所以筛选的时候用G418，如果带有嘌呤霉素的抗性基因就要选用puro。另外如果双转染，要考虑到两种质粒的筛选抗性的兼容。G418等的筛选浓度最好也用预试验摸一下~~

祝你顺利！

作者: huifeng0516 时间: 2012-5-24 12:56

非常感谢大家的热情相助！我的那个载体上有一段是ampicillin，还有一段是
neomycin。现在我知道ampicillin是针对细菌转化时的抗性，那么质粒转染后，要想建立稳定表达的细胞系，该用什么抗生素来杀细胞呢？G418还是新霉素？我个人感觉应该是G418，可是wangbadan怎么说该用新霉素呢?还是两者都可以？

作者: wsll 时间: 2012-5-24 12:56

呵，G418即新霉素

作者: huifeng0516 时间: 2012-5-24 12:57

在一个帖子中看到这样一段话：

G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。

那意思就是说新霉素不可以用来杀细胞，可是为什么有的战友说也可以用新霉素呢？疑惑......

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