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标题: [求助]细胞污染两次了 [打印本页]

作者: BUK 时间: 2012-5-25 17:57 标题: [求助]细胞污染两次了

刚开始养细胞，养了两批，总是污染，搞得老师对我都没有信心了。
下面就给大家说说这两次的情况：
1.1：3传代，传代结束后镜下观察细胞形态不错，中间隔了一天没有看，第二天发现肉眼可见的培养基混浊，镜下观察很多圆点点状,比细胞小的物体，做细胞试验的同学看过后说怀疑是黑焦虫，建议扔掉；
2.1：3传代，传代后镜下观察发现有一小瓶里面有黑点点状物体，和上次的黑焦虫很像，做上标记后放入培养箱，第二天早上观察每个瓶里都有黑点点，数量还很多，仔细看的化还能发现在动，经别的教研室的师姐观察说是污染了，建议扔掉，于是顺便拍了几张照片后扔掉，现在正在找污染的原因，希望得到大家的帮助！

作者: HP007 时间: 2012-5-25 17:58

很大程度是培养瓶不干净！
你描述详细一下，
或者发几张照片、

作者: vera+ 时间: 2012-5-25 17:58

1、如果楼上说的有问题，就是培养瓶本身是没有问题的，或不或是你培养基就污染了，这样的话就.......
2、可能是操作的问题，做细胞不能急的，要慢慢来，我有一次做的时候太急了，结果坏掉了。

作者: milkdog 时间: 2012-5-25 17:59

把培养箱好好消毒一下吧

作者: TAT 时间: 2012-5-25 17:59

可能是培养瓶或者培养液的问题,发现有黑焦虫之后,不要再放进培养箱,否则可能会污染其他细胞,这东西很奇怪,具体原因我们老师也不是很清楚要马上扔掉,瓶子也不要再用养细胞.昨天我们刚复苏的细胞也出现了你说的黑焦虫,立马就扔掉了.

作者: BUK 时间: 2012-5-25 18:00

培养基里没加双抗，做空培养没有问题。

培养箱是大家公用的，暂停养细胞消毒培养箱很难实施。

改天把照片传上来给大家看看鉴定下阿！先谢啦！

作者: abc816 时间: 2012-5-25 18:00

首先做培养实验，确定培养液没有问题
培养用的器皿还有枪头不用说了，要保证绝对无菌
黑焦虫的特点是体积比较小，不到处乱游，在原地打转，要把它和细菌的污染区分开。
如果确定是黑焦虫的话，黑焦虫和细胞的生长状态有一定的关系，细胞长势好的话，它就会越来越少。而细胞的生长是有一定密度依赖性的
所以，我建议楼主，一是在复苏细胞的时候，可以1：1或者1：2试试，传代时试试1：2传。

作者: abc816 时间: 2012-5-25 18:00

对了，我把以前做培养用的培养瓶、吸管、分装培养基用的瓶子等一切和培养有关的器皿都重新洗了，过酸消毒后再用，希望能有所改观！

作者: abc816 时间: 2012-5-25 18:01

这是我上次养的细胞，被大家判为污染后就扔掉了，大家帮忙看看吧！

作者: nn255 时间: 2012-5-25 18:01

像你说的如果培养液已经浑浊了的话，很有可能是细菌污染了。
1.首先想问问你所用的培养瓶，移液管是否无菌，高压消毒后多少时间使用的。
2.建议你培养下单独的培养液，看看是否已经污染。
3.无菌操作是否规范，建议找个有经验的老师旁边指导你，若发现问题可以及时解决
4.是只有消化后就污染吗？那建议你观察下你的胰酶是否污染了、

作者: yes4 时间: 2012-5-25 18:02

悬浮细胞还是贴壁细胞？贴壁细胞的话可以考虑一下这个方法：把培养基倒掉，ＰＢＳ漂洗二遍，在倒置显微镜下寻找一些周围比较干净（无黑点）的细胞团。做标记。用吸管蘸取几个细胞团，把它们放入小的一次性培养瓶中（内已加无污染培养基）培养两天后再观察。

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