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标题: [求助]浅筋膜内成纤维细胞的原代 [打印本页]

作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-5-31 12:56 标题: [求助]浅筋膜内成纤维细胞的原代

这是我的成纤维细胞原代，细胞里面怎么好多的空泡是怎么回事，有哪位大虾知道的，求教了！

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-5-31 12:57

还有几张，给各位大虾看看，帮我诊断诊断！

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-5-31 12:58

还有几张

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-5-31 12:58

看看这张！

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作者: 鹅鹅鹅 时间: 2012-5-31 12:59

还有这张！！

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作者: yhz1973 时间: 2012-5-31 13:00

细胞衰老和老化常有这种现象。

作者: pengke1983 时间: 2012-5-31 13:00

同意楼上见解，细胞衰老与老化可导致细胞出现上述特征：
衰老细胞的形态变化主要表现在细胞皱缩，膜通透性、脆性增加，核膜内折，细胞器数量特别是线粒体数量减少，胞内出现脂褐素等异常物质沉积，总体来说老化细胞的各种结构呈退行性变化。
通过楼主发来的图片看：不但细胞内出现空泡，而且出现色素沉着，细胞脆性感强，胞核胞浆内出现异样物质，细胞形态也较差！
因此，可以较肯定的是，你的细胞处于衰老老化状态
不知楼主采用的是那种培养方法，培养基组成，我做培养较久，有些心得，可以的话，共同研究一下！

作者: S6044 时间: 2012-5-31 13:00

我不同意楼上仁兄的意见
不知道LZ的成纤维已经养到哪一代了
是这样的原代成纤维细胞有倾向转化成前脂肪细胞
比如3T3脂肪细胞就是用成纤维细胞在insulin的作用下诱导出来的
所以成纤维细胞里的空泡是正常的脂滴

不过原代逐渐培养下去衰老也是正常或不可避免的
但是我的意见是 LZ的细胞里应该是脂滴

不当之处请指正谢谢

作者: S6044 时间: 2012-5-31 13:01

可以尝试下油红染色来鉴别是不是脂滴

作者: pengke1983 时间: 2012-5-31 13:01

楼上群友说的有一定道理！但我仍有未明，现讨教下！
1）何为原代培养？据我所知，原代培养是从供体取得组织细胞后的首次培养。其特点是细胞或组织刚离开机体，生物性状尚未发生很大的改变，一定程度上反映了它们在体内的状态，表现出原组织或细胞的特性。如果楼主所做的细胞是原代培养，那么，是否还存在楼上仁兄所谓的转化问题？
2）如果通过油红染色证明了胞内为脂滴，就表明成纤维细胞向前脂肪细胞转化，而不是老化？细胞内脂滴增多，是不是也可能是由于细胞脂肪变性引起，并且，细胞老化衰老的表现也可包括细胞内脂滴或空泡增多！
3）成纤维细胞里的空泡是正常的脂滴？不知仁兄在那里得到该结论，病理学上明确的定义：非脂肪细胞内出现脂滴或脂滴明显增多，就表明细胞出现脂肪变性，如仁兄所说的成纤维细胞内的空泡是正常脂滴，该说法是否欠妥！有待商榷！
4）原代成纤维细胞有倾向转化成前脂肪细胞，这个是肯定的科研成果还是猜测！据我了解，目前对于间充质细胞所谓的转化的研究尚无定论，而目前较为常用的是‘成纤维样细胞的转化’，而不是‘成纤维细胞转化’，关于成纤维样细胞，其可能是存在细胞间隙内的干细胞，当然，也不排除在下的孤陋寡闻，请楼上战友指点一二，可否给出文献，也好学习一下，以促进共同进步！
5）我培养的表皮细胞由于培养基的问题，也出现与楼上一样的空泡现象，并且细胞形态也与楼上的相似，是否也存在向前脂肪细胞的转化问题？
6）前脂肪细胞的传代培养较易进行，不知楼主的该细胞的传代培养是否也很容易，根据我浅显的经验以及楼主的照片来看，这些细胞存在不易消化，不易贴壁，增殖能力差的问题！不知楼主是否做了传代的尝试！
7）一家之言，敬请批评！

作者: 911 时间: 2012-5-31 13:02

厉害！佩服！
步步为营啊！一扣套一扣的反驳！
我不知道楼主的原代培养取材于何种动物的何处？
不过有第四张看着像是存在所谓的脂肪细胞！

作者: kulee 时间: 2012-5-31 13:02

看楼主的照片应该是脂滴化了

作者: viviwang1987 时间: 2012-5-31 13:02

我培养的原代心肌细胞也出现过这样的问题，请教一个老教授说可能时细胞的胞饮现象，缓缓液能改善。我隔天换了两次液，好多了。

作者: woshituzhu 时间: 2012-5-31 13:03

我做细胞培养也会出现同样的问题，有时候通过换液可以缓解，有时候不行。不知如何判断是细胞老化还是其他问题？

作者: qumm1985 时间: 2012-5-31 13:03

前一阵养过别人剩的肿瘤细胞，在传了N多代后也发现细胞出现空泡化，传代后不易贴壁，生长缓慢，难道肿瘤细胞也老化了？

作者: 04906 时间: 2012-5-31 13:03

各位大虾：

对于上述问题我做一回复：
1 组织来源于SD大鼠的皮下组织（筋膜结缔组织），外科显微镜下祛除了可见的脂肪组织和血管。
2 原代培养用的是胶原酶消化法，一型胶原酶。浓度是1%
3 培养基用的是GIBICO的DMEM/F12
4 隔天换液一次。
5 照相是细胞已经传至2代。

我最初也是怀疑细胞可能是细胞衰老了，但是后面又想是不是因为间充质干细胞的污染，再者听说胶原酶对成纤维细胞有破坏作用，不知是否属实？？？？

希望好心人能给出答案！

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