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标题: 【分享】小麦基因组DNA提取 [打印本页]

作者: yujian8608 时间: 2012-6-5 12:25 标题: 【分享】小麦基因组DNA提取

　　内容摘要：小心吸取离心上清液至1.5mL离心管中，加入0.65倍体积4~C预冷的异丙醇，混匀，4~C下12000r/min离心10min，小心弃掉上清液。加500/~L 4~C预冷的70%乙醇洗涤一次，4~C下12000r/min离心5min，弃上清液，重复洗涤一次，室温或真空干燥沉淀。加入50肛L TE缓冲液，4"C过夜或37~C保温1h溶解沉淀，4~C保存备用。每个实验样品应制备两个测试样品和提取空白对照，同时提取DNA。

　　第一法：CTAB法。称取0.2g粉碎后的小麦试样于2.0ml。离心管中，加入lmL CTAB裂解液，混匀，在65~C水浴温育30min，不时振荡.12000r/min离心5rain。小心取离心上清液至新的2.0mI一离心管中，加入等体积三氯甲烷一异戊醇，混匀后放置5min，重复离心5min。取离心上清液至另一新的2.0mL离心管中，再加入等体积三氯甲烷一异戊醇，混匀后放 5min,12000r/min再重复离心5min。。

　　小心吸取离心上清液至1.5mL离心管中，加入0.65倍体积4~C预冷的异丙醇，混匀，4~C下12000r/min离心10min，小心弃掉上清液。加500/~L 4~C预冷的70%乙醇洗涤一次，4~C下12000r/min离心5min，弃上清液，重复洗涤一次，室温或真空干燥沉淀。加入50肛L TE缓冲液，4"C过夜或37~C保温1h溶解沉淀，4~C保存备用。每个实验样品应制备两个测试样品和提取空白对照，同时提取DNA。

　　第二法：试剂盒法。小麦总DNA的提取也可使用相应的市售DNA提取试剂盒。

作者: yujian8608 时间: 2012-6-7 10:28 标题: 回复 #1 yujian8608 的帖子

分析讲解的很有道理，谢谢分享，，，

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