标题:
[求助]流式测细胞周期结果测得很多凋亡细胞怎么办
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作者:
hyuu
时间:
2012-6-6 11:41
标题:
[求助]流式测细胞周期结果测得很多凋亡细胞怎么办
我昨天用流式测细胞周期,是要看我的药物是否能把细胞抑制在G2/M期,结果流式图检测到很多凋亡细胞,那个流式老师说我的细胞无法区分出来S 和G2/M期,请问有这种可能吗,有没有什么更好的软件或方法可以区分出来呢
作者:
eric930
时间:
2012-6-6 11:41
是否用未处理的细胞做对照,也做了周期分析?家能否将图发过来看看?
作者:
hyuu
时间:
2012-6-6 11:42
不好意思,我还以为没有人回复呢,我做了两种细胞,均出现了问题,EC9706细胞是加药组凋亡太多。
HCT-116是G2和M期分不开,不知道是某个软件分不开,换个软件就可以了,还是我做的这个结果就没办法分开了,需要重做?
如果重做需要在细胞培养和加药方面做什么改变呢
这是我做的流式图,两种细胞,每个细胞药物作了两个时间
作者:
hyuu
时间:
2012-6-6 11:42
明显的非特异性DNA损伤,周期特征完全破坏。
重做同时药物减量。
作者:
hyuu
时间:
2012-6-6 11:43
哦,我们这里流式是用别人的机器,老师说让我换小点浓度,做几个时间梯度,在镜下观察,觉得哪个时间的可以再拿去做流式,我现在不知道观察到哪种程度会可以,是不是一般能测出细胞周期的时候,镜下观察细胞还是状态没有什么大的改变的。
因为我这次测之前都已经看到细胞开始出现不正常了。结果一测全都是凋亡
作者:
duoduo
时间:
2012-6-6 12:40
原因:药物浓度太大
建议:
1、在用流式分析细胞周期之前,应该先用不同浓度药物处理细胞并定时观察细胞的状态,通过观察找到能够抑制细胞增值的最佳浓度,如果某个浓度有大量细胞漂浮死亡说明细胞浓度太大。
2、楼主应该先用MTT或CCK-8检测,通过IC50也可以确定药物的最佳检测浓度。
另外用PI染色测细胞周期是无法分开G2和M期的。
作者:
hyuu
时间:
2012-6-6 12:40
楼主不是要区分出G2和M。
作者:
hyuu
时间:
2012-6-6 12:43
我用的浓度就是通过MTT测出来的IC50值,但是做流式试验时是在25ml培养瓶中养细胞,加药的绝对量有变化,结果加药后很短时间就看细胞不对了。看来我应该缩小细胞浓度,观察不同时间细胞的状态,不同时间收集,直到看到凋亡的时候,然后把这几个时间中间那个时间拿去做流式,应该算比较合理的办法吧,没办法,流式不是自己的,测一次还好多钱,只有自己这样估算
另外大家帮我分析一下我那个HCT-116的结果是怎么回事,怎么阴性对照也分不开G2和S期啊,是不是软件的问题,还是我细胞本身的问题
作者:
hyuu
时间:
2012-6-6 12:43
各位有没有谁养过HCT-116的,一般分瓶后多长时间开始增殖呢
作者:
HPLC使者
时间:
2012-6-6 12:44
胞本身的问题。降药物浓度或缩短作用时间后再观察可能会好些。
不过我有一个预感,你们的这个药可能是损伤性为主,也许就不适合以周期改变为主要观察角度。
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