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标题: [讨论帖]神经干细胞、神经元培养互助小组 [打印本页]

作者: biabiade 时间: 2012-6-8 16:35 标题: [讨论帖]神经干细胞、神经元培养互助小组

本人是做神经干细胞培养的，求助一些关于神经干细胞、神经元原代培养的有关问题，很零散不便于交流，于是想创建一片园地，专供做相似研究的群友们交流经验，共同进步，顺利完成试验
希望斑竹和各位群友支持。谢谢！！

作者: october7 时间: 2012-6-8 16:35

我在做海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?

作者: pengke1983 时间: 2012-6-8 16:36

我在做海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?

我是做纹状体NSCS培养的，也需要制备单细胞悬液，我想虽然我们的目标细胞不同但制备细胞悬液的目的是相同的，所以将我的方法介绍如下，望批评指正、相互交流。
1、取材后将组织块置于小烧杯或离心管中，加入培养基用普通火焰剖光的滴管吹打20次左右，此时培养基会因有大量细胞悬浮而变得浑浊。
2、静置细胞悬液1分钟，使未吹散的组织块沉入容器底部，小心吸取上部细胞悬液，尽量不要吸出组织块。
3、再用自己特殊剖光的滴管吹打10次左右，注意剖光后管口直径大约1~2mm，这样可以使细胞最大限度地形成悬液，又不至于过度损伤细胞。

作者: ququer787 时间: 2012-6-8 16:36

我是这样做的,取出海马组织,用0.25%胰酶37度消化20分钟,然后用吸管吹打,
100目的筛板过滤,取滤液1000转离心5分钟,去上清液加PBS吹打成悬液,但每次都不成功,不是细胞成团就是细胞碎了,请问是什么原因

作者: greenbee 时间: 2012-6-8 16:37

我也要做神经元的培养，请教一个问题，神经干细胞无血清培养基的组成成分？是不是可以让神经干细胞选择性的生长（据有关资料说的）？

作者: Ao7 时间: 2012-6-8 16:38

我是这样做的,取出海马组织,用0.25%胰酶37度消化20分钟,然后用吸管吹打,
100目的筛板过滤,取滤液1000转离心5分钟,去上清液加PBS吹打成悬液,但每次都不成功,不是细胞成团就是细胞碎了,请问是什么原因

我个人认为您的操作中有两处需要注意：
1、消化后吹打得次数，最好不要超过20次，消化本身就对细胞有较大的损伤，在过度吹打，自然会有大量细胞死亡。
2、离心的转速太高，我用400转离心，5分钟，可以最大限度地除去碎片

作者: KGZ564 时间: 2012-6-8 16:39

我也要做神经元的培养，请教一个问题，神经干细胞无血清培养基的组成成分？是不是可以让神经干细胞选择性的生长（据有关资料说的）？

我用的完全无血清培养基的成分：DMEM/F12（1：1），2% B27 supplement，1% N2 supplement，青霉素、链霉素各100U/ml，EGF 20 ng/mL，b-FGF 10ng/mL。在无血清培养条件下只有神经干细胞能够长期存活，增殖，而神经元和胶质细胞则不能长期存活。

作者: greenbee 时间: 2012-6-8 16:41

QUOTE:

原帖由 KGZ564 于 2012-6-8 16:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我也要做神经元的培养，请教一个问题，神经干细胞无血清培养基的组成成分？是不是可以让神经干细胞选择性的生长（据有关资料说的）？

我用的完全无血清培养基的成分：DMEM/F12（1：1），2% B27 supplement，1% N2 supplement，青霉素、链霉素 ...

知道了，谢谢。另外可不可以说一下你的B27 supplement，N2 supplement的具体组成，含量？N2 supplement中的亚硒酸钠因为要开证明好难买，不知道你是怎么买的？还有这样培养的神经干细胞在这种情况下会分化吗？

作者: greenbee 时间: 2012-6-8 16:41

B27 supplement，N2 supplement GIBCO公司都有，价钱也不贵，为什么要自己配呢，虽然他们的配方地公开的，但也不容易准确掌握

作者: gemei0115 时间: 2012-6-8 16:43

大家好，看到这么多人都作这方面，心里真高兴。
我是一刚刚开始做 “神经元“ 培养的新手。以后会有许多不懂的地方，请大家多指教哦。
今天我主要有3个问题想问问：
1、为了省钱，培养基是不是一般都买干粉阿？做一套试验大约需要多少？如果没有时间限制，我可不可以一次大量买够，然后-20度冻存阿？
2、本来打算用10%胎牛血清，可试验老师告诉我说最好用10%胎牛，加10%马血清。是这样吗？不用马血清养的效果是不是不好啊？那去哪里买马血清？
3、如果第一次养，是不是选胎鼠比较容易些？我怕用新生24小时内乳鼠养不活呢。：（

作者: greenbee 时间: 2012-6-8 16:44

另外还要请教一下，你的N2是什么时候买的，是否需要开证明？因为亚硒酸钠是剧毒要开很麻烦的证明，前些日子要单买亚硒酸钠因为这个头都大了。

作者: 911 时间: 2012-6-8 16:44

QUOTE:

原帖由 greenbee 于 2012-6-8 16:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
另外还要请教一下，你的N2是什么时候买的，是否需要开证明？因为亚硒酸钠是剧毒要开很麻烦的证明，前些日子要单买亚硒酸钠因为这个头都大了。

应该不用，直接找试剂代理公司就可以了，B27 supplement 620元，N2 supplement 500元，都是 GIBCO公司的

作者: biabiade 时间: 2012-6-8 16:45

我今天又做了一次上流式细胞仪测凋亡率,还是不行,细胞量太少,我是用
0.125%的胰酶消化10分钟,然后过100目筛板,500转离心5分钟,去上清液,沉淀用PBS悬浮吹散,我已经失败很多次了,不是细胞碎片太多就是细胞不够,真是很郁闷,各位高手有没有好的办法?

作者: yes4 时间: 2012-6-8 16:45

我是做神经干细胞原代培养再分化为神经元的，我养原代没用N2,我的神经球长的也不错。

作者: yes4 时间: 2012-6-8 16:45

有一个问题想请教各位，如果神经球向神经元分化，分化前还需要离心吗？多谢！

作者: 831226 时间: 2012-6-8 16:46

我刚从上海买的sk-n-sh，请教各位大侠：
1、消化最好用什么？我用的是0.25的胰酶加0.02EDTA,好快啊，20秒左右，只好回收用1500转离心5分钟。
2、培养液我加的是10％的胎牛血清。
但细胞长的不是很好，不够密，生长速度也慢，请各位有经验的前辈指教。

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 16:46

我今天又做了一次上流式细胞仪测凋亡率,还是不行,细胞量太少,我是用
0.125%的胰消化10分钟,然后过100目筛板,500转离心5分钟,去上清液,沉淀用PBS悬浮吹散,我已经失败很多次了,不是细胞碎片太多就是细胞不够,真是很郁闷,各位高手有没有好的办法?

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你试一下用胰酶-EDTA消化, 而且应该在镜下控制反应时间,胰酶-EDTA消化液少一些, 或者多放一些1或2 分钟就倒出去,当细胞的突触收回到近圆形时,加入含血清的培养液中止消化,轻轻吹打即可.做流式一定要保证细胞的良好状态,所以首先要选取生长状态好的细胞, 其次,消化一定要把握时机,即不能消化过度,也不能消化不足, 这样容易吹打过度产生碎片,再次,流式对细胞的数量也有要求,不能过多也不能过少. 过滤与否并不重要,如果细胞数目太少的话就不必了,500转速度太低了,1000转5分钟就行了,我们上学期做了流式,细胞状态很好,实验也比较顺利.

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 16:47

我们做了近一年半的神经细胞培养,在细胞原代培养中,我们经历的最大的问题就是细胞的污染问题, 所以在神经细胞的培养过程中,首先要树立很强的无菌观念,认真做好消毒和准备工作.其次在操作过程中,胰酶的消化时间也是细胞生长的一个关键因素,不能消化时间过久,我们一般是采用机械吹打和胰酶共同作用的方法, 细胞一消化成单细胞就立即中止消化,再次, 在整个的操作过程中,吹打和处理的手法一定要轻,缓,以免细胞受到损伤,影响生长.
一点体会与大家共勉.

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 16:47

大家好，看到这么多人都作这方面，心里真高兴。
我是一刚刚开始做 “神经元“ 培养的新手。以后会有许多不懂的地方，请大家多指教哦。
今天我主要有3个问题想问问：
1、为了省钱，培养基是不是一般都买干粉阿？做一套试验大约需要多少？如果没有时间限制，我可不可以一次大量买够，然后-20度冻存阿？
2、本来打算用10%胎牛血清，可试验老师告诉我说最好用10%胎牛，加10%马血清。是这样吗？不用马血清养的效果是不是不好啊？那去哪里买马血清？
3、如果第一次养，是不是选胎鼠比较容易些？我怕用新生24小时内乳鼠养不活呢。：（

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1.培养基一般是买DMEM干粉再加一些生化试剂, 你可以现用现配,不用冻存.至于用多少得以你的试验来定.
2.培养神经元是要加马血清的,我也不是很清楚它的原理, 可能每种细胞都有自己适合的环境吧, 有胎牛血清的公司一般也有马血清,你问他们就行了
3.我们培养是用的新生大鼠, 24小时内乳鼠肯定可以, 主要是比胎鼠方便, 我们也养过胎鼠神经元,没有发现显著性差别

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 16:47

我今天又做了一次上流式细胞仪测凋亡率,还是不行,细胞量太少,我是用
0.125%的胰酶消化10分钟,然后过100目筛板,500转离心5分钟,去上清液,沉淀用PBS悬浮吹散,我已经失败很多次了,不是细胞碎片太多就是细胞不够,真是很郁闷,各位高手有没有好的办法?

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注意:1000转离心是去上清, 500转离心是去沉淀

作者: 49888 时间: 2012-6-8 16:50

请问诸位，我导师因为国外的胎牛血清太贵不主张我买，我是该买四季青的胎牛好呢，还是买sigma的小牛血清？

作者: junjie05 时间: 2012-6-8 16:51

我打算做视网膜神经元培养请各位前辈多指教啊

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hi, i am working on the cell culture of bipolar cells from rat retina too. i tried 3 times
and all i got was fragments of the cells. this is how i do it:

isolate retina
incubate retina with papain in hank's solution for 50min
wash retina 3 times with normal hank's solution ( i spin the retina, maybe i should not do it?)
tritrarate retina by pipetting up and down(about 15 times) (maybe too much?)
suspend cell in culture dish
i am going to try agian next week and hope me good luck

作者: fei1226com 时间: 2012-6-8 16:51

我也在做皮质和海马神经元培养,但细胞纯度总不是很高,想请教各位如何使鉴定时纯度达到90%,谢谢!

作者: dongdongqiang 时间: 2012-6-8 16:52

可以做免疫组化来鉴定神经元，为什么一定要纯度那么高呢？

作者: ending 时间: 2012-6-8 16:52

纯化雪旺细胞：⑴.将0.125%胰蛋白酶加入培养液中，倒置相差显微镜下观察，见SC收缩后立即终止消化，轻轻吹打，收集脱落的细胞，接种于新的培养皿中；⑵.将培养皿移入培养箱中孵育2小时，轻轻摇动后吸出悬液重新接种；⑶.重新接种的细胞培养24小时后，更换含阿糖胞苷10-5mmol/l的培养液20µl，作用24小时，更换常规培养液继续培养和传代。

作者: 伊莎贝拉 时间: 2012-6-8 16:53

我是新手，是做海马（脑片）造模的。
我的问题是：1。选择多大的老鼠最好？
2。海马做切片好，还是不切片好？
3。用什么方式的膜片钳记录最好做？
4。细胞培养的问题，看些什么书或者文献，还有就是对于一个细胞培养新手来说，怎样开始实验，是先看书然后自己摸索还是去进修学习，还是怎样？

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 16:53

请问诸位，我导师因为国外的胎牛血清太贵不主张我买，我是该买四季青的胎牛好呢，还是买sigma的小牛血清？？

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其实国外的小牛血清也行，我们用的Hyclone公司的小牛血清560RMB每500ml, 马血清620RMB每500ml, 与国内的血清相比性价比还是要好一些，而且也不是很贵，sigma的小牛血清我们没有用过，不知质量怎样，但价钱可能比Hyclone的要贵一些。国内的四季青大家都反应不错，可以试一试，我们用的是北京元亨圣马的胎牛血清（100RMB每200ml）和马血清(160RMB每200ml)，质量也可以.

作者: ero11 时间: 2012-6-8 16:54

我是新手，是做海马（脑片）造模的。
我的问题是：1。选择多大的老鼠最好？
2。海马做切片好，还是不切片好？
3。用什么方式的膜片钳记录最好做？
4。细胞培养的问题，看些什么书或者文献，还有就是对于一个细胞培养新手来说，怎样开始实验，是先看书然后自己摸索还是去进修学习，还是怎样？

谁帮帮我啊

作者: 2541 时间: 2012-6-8 16:54

求教：
我现在要配神经干细胞培养液，现已有DMEM/F12(1:1),B27,亚硒酸钠，胰岛素，bFGF，牛血清白蛋白，不知行不行（腐胺，孕酮，转铁蛋白都没有）。那些是必要成分，那些不是，请高手指教！

作者: cj_mondy 时间: 2012-6-8 16:55

1、为了省钱，培养基是不是一般都买干粉阿？做一套试验大约需要多少？如果没有时间限制，我可不可以一次大量买够，然后-20度冻存阿？
2、本来打算用10%胎牛血清，可试验老师告诉我说最好用10%胎牛，加10%马血清。是这样吗？不用马血清养的效果是不是不好啊？那去哪里买马血清？
3、如果第一次养，是不是选胎鼠比较容易些？我怕用新生24小时内乳鼠养不活呢。：（

1、培养基可以买干粉，可以大量买，-20度或-70度保存，当然要注意保质期了。
2、10%的胎牛血清即可，Hyclone最好。
3、一般选择16或17天的胎鼠。

作者: orangecake 时间: 2012-6-8 16:55

求教：我做Alzheimer的细胞模型，能做原代培养吗？怎么做呢？

作者: 33号 时间: 2012-6-8 16:56

各位大家好!我想养PC12细胞不知好不好养,在工作中要注意那些方面,还有在北京哪儿呢买到PC12细胞,贵吗?请大家多多帮助,多谢!

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 17:02

我是新手，是做海马（脑片）造模的。
我的问题是：1。选择多大的老鼠最好？
2。海马做切片好，还是不切片好？
3。用什么方式的膜片钳记录最好做？
4。细胞培养的问题，看些什么书或者文献，还有就是对于一个细胞培养新手来说，怎样开始实验，是先看书然后自己摸索还是去进修学习，还是怎样？

谁帮帮我啊

我没有做过海马脑片，但就我的经验，一个新手新开一项实验可能还是去看和学习现成的实验经验比较容易上手一些。

作者: hold住 时间: 2012-6-8 17:03

各位大家好!我想养PC12细胞不知好不好养,在工作中要注意那些方面,还有在北京哪儿呢买到PC12细胞,贵吗?请大家多多帮助,多谢!

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PC12 细胞是比较好养的，也没有什么特别之处，就是无菌操作等一些和一般细胞培养相似的注意事项。我们用的培养基就是DMEM（高糖）＋10％胎牛血清（四季青），感觉还不错，长得挺好。我们的PC12从上海中科院细胞所买的，400块左右，估计北京也在这个价格附近。

作者: mamamiya 时间: 2012-6-8 17:04

请教各位前辈几个问题:
1MEM/F12与M199两种培养液培养NSCS有什么区别吗
2:我的培养液20%血清,80%m199镜下直接看就有许多细胞,正常吗
3:细胞接种密度对细胞培养有什么影响吗
4:细胞培养到何时加bFGF和EGF合适

作者: langlang 时间: 2012-6-8 17:04

请教哪位战友做过多巴胺能神经元的无血清原代培养,实验需要无血清培养,可是细胞没有了营养物质我怀疑会活不长啊,有哪位战友能给予释疑,谢谢.

作者: mickeylin 时间: 2012-6-8 17:05

请教有没有哪位群友用过beta淀粉样蛋白处理SH-SY5Y细胞？

作者: 薄荷侠 时间: 2012-6-8 17:05

将孕18天的Wistar大鼠脱颈处死，在无菌条件下剖腹取出子宫，PBS清洗3次。剪开羊膜取出仔鼠，切取胎头，分离出双侧海马组织，解剖镜下去除软脑膜后，用眼科剪剪碎海马组织。将海马碎块移入10ml试管中，用D-Hanks液冲洗。先后加入D-Hanks液4ml和0.25％的胰蛋白酶液4ml，用吸管轻轻吹打后置37℃培养箱中消化，其间摇动3次，15min后加入含10％胎牛血清的DMEM/F12中止消化，用吸管吹打细胞使之分散。150目筛过滤，收集滤液，1100r/min离心5min，弃上清。加入2ml DMEM/F12液（10％胎牛血清，2％B27，5g/L葡萄糖，0.5mmol/L谷氨酰胺，，15mmol/LHepes，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素），重新悬浮细胞，台盼兰染色后进行细胞计数，根据计数结果调整细胞浓度为5 105个/ml，接种于预先经多聚L-赖氨酸处理过的培养瓶中培养。用于神经原鉴定的细胞种植到用多聚L-赖氨酸包被过的盖玻片上。接种的第2天将培养液全部换成无血清培养液，以后每48h半量更换不含血清的DMEM培养液1次，每天观察记录培养细胞的生长状况。培养第5天时加入阿糖胞苷，使其终浓度为10μmol/L，以抑制胶质细胞的过渡繁殖，24h后更换全部培养液，即进行细胞鉴定。

作者: yonger 时间: 2012-6-8 17:06

我是一名骨科医生,我的课题是想了解神经与骨折愈合的关系,其中,体外试验可能涉及到用神经生长因子诱导分化骨髓基质干细胞生成神经元样细胞或者胶质细胞,如果有可能性,请同道们,给出见议,不胜感激,如果不能做,我请放弃体外试验这部分.谢谢

作者: TNT 时间: 2012-6-8 17:06

培养第5天时加入阿糖胞苷，使其终浓度为10μmol/L，以抑制胶质细胞的过渡繁殖”。如果不加阿糖胞苷，会抑制神经元的生长？

作者: 小糖块 时间: 2012-6-8 17:06

我想问一下各位大侠, 我做的是原代神经元培养(当然里面混杂有其他的细胞), 我想观察经过干预后正常组和试验组的神经细胞生存情况, 不知用台盼蓝行不行? 如果行,怎么做呢? 谢谢先啦!

作者: zsxan1990 时间: 2012-6-8 17:07

有哪位高手配制过胰岛素？怎么溶解？谢了！

作者: 气泡 时间: 2012-6-8 17:07

大家好，我是一名新手，细胞现在养的还可以，但第一次做药效不是很理想，考虑是溶媒的问题，我用的是50%的无水乙醇，终浓度是0.5％和0.05％，请教各位前辈，有没有人作过，这个浓度溶媒对神经细胞会有影响吗？还要，你们一般都是拿什么做阳性药？用什么浓度的？？

作者: xueyouzhang 时间: 2012-6-8 17:07

看见这个神经元培养小组真的是很高兴！
我在培养中遇见几个问题请教大家：1 我用的是胰酶和二型胶原酶联合消化，但消化时间总不能把握好，不是长了就是短了，请问怎么知道细胞已消化成了单细胞。2 有文献上讲，木瓜蛋白酶是一种较好的消化酶，杀伤力没有胰酶强，请问木瓜蛋白酶的工作浓度及用量是多少？谢谢

作者: xueyouzhang 时间: 2012-6-8 17:08

我也在做皮质和海马神经元培养,但细胞纯度总不是很高,想请教各位如何使鉴定时纯度达到90%,谢谢!

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可以在培养24小时后加阿糖胞苷抑制非神经细胞的生长。当然，以阿胞的毒性也会打击一下咱们的神经元。

作者: kulee 时间: 2012-6-8 17:08

我是这样做的,取出海马组织,用0.25%胰酶37度消化20分钟,然后用吸管吹打,
100目的筛板过滤,取滤液1000转离心5分钟,去上清液加PBS吹打成悬液,但每次都不成功,不是细胞成团就是细胞碎了,请问是什么原因

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It seem that you have treated the tisssue with trypsin too long. Over trypsinization will lead cell death and cell DNA release. The released DNA will make your digestion or cells clump. To solve the problem, you can 1) shorten the enzyme digestion time; or 2) add DNase at the last five minutes of enzyme digestion to degrade the released DNA. Let me know if you have further problem.

作者: 中国特色 时间: 2012-6-8 17:08

请问各位，你们用过台盼蓝作过神经元细胞的活力实验没有？能给于帮助吗？谢谢先　！

作者: c86v 时间: 2012-6-8 17:09

我在做海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?

我是做纹状体NSCS培养的，也需要制备单细胞悬液，我想虽然我们的目标细胞不同但制备细胞悬液的目的是相同的，所以将我的方法介绍如下，望批评指正、相互交流。
1、取材后将组织块置于小烧杯或离心管中，加入培养基用普通火焰剖光的滴管吹打20次左右，此时培养基会因有大量细胞悬浮而变得浑浊。
2、静置细胞悬液1分钟，使未吹散的组织块沉入容器底部，小心吸取上部细胞悬液，尽量不要吸出组织块。
3、再用自己特殊剖光的滴管吹打10次左右，注意剖光后管口直径大约1~2mm，这样可以使细胞最大限度地形成悬液，又不至于过度损伤细胞。

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我想问一下，做完单细胞悬液后马上用于检测钙离子或细胞凋亡，并不接着用于细胞培养，那在制备单细胞悬液过程中，是否也要象原代细胞培养那样要求无菌原则呢？请各位大侠不吝赐教，多谢了

作者: vivian4123 时间: 2012-6-8 17:09

请问各位，你们用过台盼蓝作过神经元细胞的活力实验没有？能给于帮助吗？谢谢先　！

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检测神经元细胞的活力，我建议最好的方法还是用MTT，台盼蓝染色计数误差太大，有时结果根本没办法分析

作者: 缘yuan 时间: 2012-6-8 17:10

有哪位战友养过SH-SY5Y细胞？我从上海细胞所买回来之后，开始用他们带的培养液，养的还挺好，可是换成自己配的培养液之后，细胞状态很差，不怎么贴壁，而且也不怎么长，不知道该怎么办？如果有哪位战友养过，能给点建议吗？先谢过了！

作者: xueyouzhang 时间: 2012-6-8 17:10

您说接种的第2天将培养液全部换成无血清培养液，请问无血清培养液含有那些成分？仅比含血清的培养基少了胎牛血清吗？有没有添加其他的成分？谢谢

作者: newway 时间: 2012-6-8 17:11

我是新手，打算做皮质神经元培养。我看了些文献，都是从大鼠的胎鼠上取细胞，有没有小鼠的胎鼠上取细胞的？

作者: windy+++ 时间: 2012-6-8 17:11

请教各位高手,我是培养神经干细胞的,现在神经球已长出来了,第八天,还可以,就是杂质比较多,我现在想把细胞球和杂质分离开,不知怎么办?求教各位有什么好办法?

作者: hold住 时间: 2012-6-8 17:11

请教各位高手,我培养是胶质瘤干细胞的,现在肿瘤球球已长出来了,第八天,还可以,就是杂质比较多,我现在想把细胞球和杂质分离开,不知怎么办?求教各位有什么好办法?

作者: zsxan1990 时间: 2012-6-8 17:12

“培养第5天时加入阿糖胞苷，使其终浓度为10μmol/L，以抑制胶质细胞的过渡繁殖”。如果不加阿糖胞苷，会抑制神经元的生长？

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如果不加阿糖胞苷，神经胶质细胞的过度和快速繁殖会抑制神经元的生长，　加入阿糖胞苷后抑制神经胶质细胞的生长，促进神经元的生长，上面的贴子可以是笔误。

作者: zsxan1990 时间: 2012-6-8 17:12

我想问一下各位大侠, 我做的是原代神经元培养(当然里面混杂有其他的细胞), 我想观察经过干预后正常组和试验组的神经细胞生存情况, 不知用台盼蓝行不行? 如果行,怎么做呢? 谢谢先啦!

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用台盼兰可以观察其活力变化，但不能计量，有神经细胞的活力检测方法，可以准确计量，用数量表示并能分析结果，我想也许会更适合你的试验。

作者: chuntian1983 时间: 2012-6-8 17:13

有谁做过雪旺细胞原代培养,如何纯化?我是在显微镜下尽量剥膜做的,可还是不行,有好多神经胶质细胞,如何去掉?我还查到有的用双酶差速消化法,具体怎么做?这样能达到多大的纯度?G418能抑制杂细胞的生长吗?请高手们赐教!谢谢!

作者: Ao7 时间: 2012-6-8 17:13

建议你不要用成年的大叔.成年的轴突树突都发育好了,分离时损伤很大,得不到多少细胞.我见过别人分14天的胎鼠取皮质,分的细胞种了两个24孔板;第二天,又用新生的取,只中了两个孔.

作者: pencil菲 时间: 2012-6-8 17:13

各位老师好。我即将加入培养神经细胞的行列。未来的老板是研究钠钾泵的，他希望我用可以培养的神经细胞作这方面的研究，要和临床疾病相关的，比如帕金森或huntington's disease. 由于本人一直从事临床工作，现在查这些资料有点无从下手，希望各位前辈能给点提示，比如查哪个网站，用哪些关键词搜好，或者那里可以看到关于培养细胞的技术。万分谢谢！

作者: tudou85 时间: 2012-6-8 17:14

我是养细胞的新手,正在养PC12,下一步打算做海马神经元的原代培养,还请各位前辈多多赐教!

作者: tudou85 时间: 2012-6-8 17:14

请教各位高手:神经元的原代培养一定要加神经生长因子吗?价钱是不是很贵?

作者: 33号 时间: 2012-6-8 17:14

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过完“五一”要进实验室了，可还是一头雾水，看了鄂征老师主编的《组织培养技术及在医学中的应用》，说新手要把每个步骤都程序化，列出来，按步骤做。有那为前辈这样作过吗？能介绍以下吗？

作者: langlang 时间: 2012-6-8 17:15

我从文献上看到有人培养成年（>2weeks）大鼠，用木瓜蛋白酶消化，吹打，然后用密度梯度离心分离神经元。就是不知道这里有人做过吗？

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:15

同志们辛苦了，我喜欢在做实验的时候发现一些操作上的窍门，创新一些心得！希望交流！提出一个问题，大家用原代的细胞悬液过筛网a.用不锈钢的好还是尼龙的好？讨论一下．因为不锈钢的好高压消毒，但是会扎手，而且怎么自己去制作一个过筛的装置呢？是象筛面一样吗？尼龙的软，效果不知怎样？谁实验过？可以象传说中的包起组织在外面挫洗吗？另外我知道光筛网的材质就有十几种？同一种价格相差可达到１００多元？有什么要求吗？大家不要看不起我的问题，其实我们的实验光想者用进口的试剂，谁考虑过你的试管＼烧杯＼筛网＼量筒＼都合格吗？合格你的操作方法是否正确？实验的结果可能最终就是因为这些小的问题而失败＼无法解释．有人同意吗？随便讲！

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:15

我想问一下，做完单细胞悬液后马上用于，并不接着用于细胞培养，那在制备单细胞悬液过程中，是否也要象原代细胞培养那样要求无菌原则呢？请各位大侠不吝赐教，多谢了

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朋友，不用无菌，因为你去检测检测钙离子或细胞凋亡无非是用共聚焦＼或流式，最终细胞都会死亡的，没有必要无菌，但是你还专门有＂污染＂的操作地点来处理组织吗？

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:16

新手报到
过完“五一”要进实验室了，可还是一头雾水，看了鄂征老师主编的《组织培养技术及在医学中的应用》，说新手要把每个步骤都程序化，列出来，按步骤做。有那为前辈这样作过吗？能介绍以下吗？

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娃，别瓜了．还写步骤，你泡到实验室后就自然练出来了，写那些没有用，只会增加负担，还很难实施

作者: xevin 时间: 2012-6-8 17:17

大家好！我一直在做大鼠纹状体神经元的原代培养，方法很稳定了。但是，我现在遇到很大的难题，就是发现转染(Lipofectamine 2000 和CaPO4都试过）原代神经元，转染率实在太低了，有那位战友有这方面的经验，请告诉我！谢谢！

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:18

我也是做神经干细胞的，现在还在为配置培养液而发愁，因为网上的配方太多太杂，最关键的是我还没有money，因此想求教你看你的培养液里加了些什么？我只有1640、DMEM、四季清FBS、双抗、你说能长出神经球嘛？BFGF、NG、EGF、等等等是不必须的？谢谢！不必需的我就不浪费钱了。时间长、长的慢没有关系、关键是要少走弯路、别浪费试剂。再次致谢！！

作者: leifengta 时间: 2012-6-8 17:18

对于楼主的提议强烈支持！希望在这里我们能够找到帮助！
把我的神经元培养方法给出，供大家参考！这是多次摸索总结的一套十分成熟的方法，如那位实验不顺，不妨一试！

海马、皮层神经元的原代培养
取新生一天的Sprague-Dawley 大鼠，浸泡于75％酒精中消毒，断头后于4oC解剖液中剥离海马，并用显微镊仔细去除血管、脑膜及非海马的其他组织，然后用虹膜剪剪碎组织，将解剖液吸出，加入1~2ml胰蛋白酶溶液（0.125%含EDTA<吸附Ca离子Mg离子，有助于细胞分离，但对细胞毒性小>）于37 oC消化15min左右（中间翻动1～2次，以观察消化情况，组织抱团且组织块间拉丝即可终止），加入全培液（80%DMEM+10%胎牛血清+10%马血清），10min，终止胰酶作用。移去溶液加入全培液2ml，吸管轻轻吹打10~20次，（不要超过20次）使细胞团分散。自然沉淀10min，（离心对细胞有损伤，自然沉淀就很好）吸取上清液用全培液制成细胞悬液（2×105/ml），接种于预先涂有poly-L-lysine的培养液中，置37 oC，5%CO2孵育箱内孵育培养。24h后用B27培养液换一半，继续培养，以后每三天换液一次，每次用B27培养液换一半。
皮层分离方法同海马，只是消化时间为10min左右。

作者: leifengta 时间: 2012-6-8 17:19

另外深感实验试剂的准备很烦，把我的相关信息列出，希望能减轻同仁的烦恼！
1 培养液：DMEM(新手最好买配好的液体，干粉配制麻烦，且易污染)；胎牛血清（一定要进口的,1300RMB）；马血清（进口国产无所谓）；B27/Nearobasal培养液（只有GIBCO有，买现成的，1200RMB）。
2 消化液：0.25％胰蛋白酶（含EDTA,100RMB）(使用时稀释一倍！)
3 解剖液：DISGH(自配)

作者: any333 时间: 2012-6-8 17:19

楼上的真是个好人！谢谢了！
我打算养海马神经元，下星期正式进实验室了。之前在别处参观了一个月，心里有点底了，但是不知到自己做会怎样？
我说说那个老师的方法吧
他是用E18的胎鼠，解剖镜下，DHANKS液中取材，一定要把膜跟血管去掉，至于连着一点皮质倒不要紧。消化用0。125%的胰酶和EDTA混合液，10分钟，室温下。加入全培液DMEM/F12（进口）+15%胎牛血清（国产）终止酶作用，清洗3次，细吸管吹打15次左右，200目滤网过滤，离心1000Z 10分钟，加入DMEM/F12+2%B27吹打，记数，接种。24h后用B27培养液换一半，以后每四天换液一次。第八天加药。

作者: 爱老虎游tt 时间: 2012-6-8 17:20

大家的初衷都一样，都想能省则省，生化试剂又着实很贵！但我的经验是，应该大处着眼！神经细胞比较难养，条件苛刻，培养过程中许多因素会导致实验失败，所以，我们要把失败率尽量降至最低！实验的成功才最重要！否则，无论时间，还是金钱，都是最大的浪费！
不知你具体指什么培养液？
我实验中培养神经元的全培液是80％DMEM＋10%胎牛血清＋10％马血清，
DMEM( PH7.2)
DMEM 1包（干粉 10×1L 300￥）
葡萄糖 1.5g
L－谷氨酰胺 0.3g（如配置液体存放超过2周要补加同量的 L －谷氨酰胺）
HEPES 5.9578g（25g 151￥）
NaHCO3 3.7g
胎牛血清（100ml GIBCO 1300￥）
（一定要进口的，否则事倍功半！）
马血清（无所谓进口国产，GIBCO 100ml 176￥）

作者: dragonkilly 时间: 2012-6-8 17:20

同志们辛苦了，我喜欢在做实验的时候发现一些操作上的窍门，创新一些心得！希望交流！提出一个问题，大家用原代的细胞悬液过筛网a.用不锈钢的好还是尼龙的好？讨论一下．因为不锈钢的好高压消毒，但是会扎手，而且怎么自己去制作一个过筛的装置呢？是象筛面一样吗？尼龙的软，效果不知怎样？谁实验过？可以象传说中的包起组织在外面挫洗吗？另外我知道光筛网的材质就有十几种？同一种价格相差可达到１００多元？有什么要求吗？大家不要看不起我的问题，其实我们的实验光想者用进口的试剂，谁考虑过你的试管＼烧杯＼筛网＼量筒＼都合格吗？合格你的操作方法是否正确？实验的结果可能最终就是因为这些小的问题而失败＼无法解释．有人同意吗？随便讲！

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我们师哥自制的筛网，用起来还比较方便，你可试试：用一次性注射器，拔去芯，切去注射筒的下半部，将筛网剪的比下边圆口稍大，在酒精灯上稍稍加热注射筒下口，使塑料口熔化，迅速压在筛网上，就好。可以高压消毒，用时细胞悬液从上口加入即可。

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:21

同志们辛苦了，我喜欢在做实验的时候发现一些操作上的窍门，创新一些心得！希望交流！提出一个问题，大家用原代的细胞悬液过筛网a.用不锈钢的好还是尼龙的好？讨论一下．因为不锈钢的好高压消毒，但是会扎手，而且怎么自己去制作一个过筛的装置呢？是象筛面一样吗？尼龙的软，效果不知怎样？谁实验过？可以象传说中的包起组织在外面挫洗吗？另外我知道光筛网的材质就有十几种？同一种价格相差可达到１００多元？有什么要求吗？大家不要看不起我的问题，其实我们的实验光想者用进口的试剂，谁考虑过你的试管＼烧杯＼筛网＼量筒＼都合格吗？合格你的操作方法是否正确？实验的结果可能最终就是因为这些小的问题而失败＼无法解释．有人同意吗？随便讲！

我们师哥自制的筛网，用起来还比较方便，你可试试：用一次性注射器，拔去芯，切去注射筒的下半部，将筛网剪的比下边圆口稍大，在酒精灯上稍稍加热注射筒下口，使塑料口熔化，迅速压在筛网上，就好。可以高压消毒，用时细胞悬液从上口加入即可。

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高，实在是高！！！震撼啊！！真是强中自有强中手，一山还有一山高。我今天又做了一次原代，还是过滤时的麻烦！！镜下很多杂质，是我强行正压造成的。不知到大家有没有遇到过细胞悬液过200目筛网时漏不下去，都悬在筛网上，妈的好象是一块钢板，液体就在筛网上乱流。同仁们，大家谁有好办法啊！！！难道非要正压过滤，把不想过的都漏了过来？？还是要用不同型号的筛网分别过滤？如（100、200、400、600目不等？）请请请。。。。。。

作者: glass 时间: 2012-6-8 17:21

液体在筛网上不容易漏下去，大概有表面张力的原因，把带着液体的筛网在培养基里蘸一下，液体就容易漏下去了，试试看。

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:21

我在做海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?

我是做纹状体NSCS培养的，也需要制备单细胞悬液，我想虽然我们的目标细胞不同但制备细胞悬液的目的是相同的，所以将我的方法介绍如下，望批评指正、相互交流。
1、取材后将组织块置于小烧杯或离心管中，加入培养基用普通火焰剖光的滴管吹打20次左右，此时培养基会因有大量细胞悬浮而变得浑浊。
2、静置细胞悬液1分钟，使未吹散的组织块沉入容器底部，小心吸取上部细胞悬液，尽量不要吸出组织块。
3、再用自己特殊剖光的滴管吹打10次左右，注意剖光后管口直径大约1~2mm，这样可以使细胞最大限度地形成悬液，又不至于过度损伤细胞。

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我是做nsc的，听说过纹状体内有干细胞，不知你做的怎么样？好养吗？取材怎么取的？方便把资料共享一下吗？到底应该取哪个部位？哪个部位好一些？

作者: qqq111 时间: 2012-6-8 17:22

广大同人，有周末还泡实验室的吧，辛苦了啊！在此小弟扔出一砖：在解剖分离、剥离乳鼠的脑膜、血管时你们都很轻松吗？大家都是神经外科的爷们吗？我发现鼠的大脑总共才三分之一个小指肚大，放在d-hanks液里还跟豆腐脑似的，吐露吐露的，又没有固定，怎么剥离出干净完整的海马、纹状体、vz、svz区啊？文献上都说的简单的和一似的，你们都有用解剖显微镜吗？好象不太可能。
在此造次一下：估计大家都是肉眼估计着剥的把。谁有更好的实用的方法，拿出来交流一下。反正我是觉的这是一个问题。难道每个实验室的细胞培养都还配置了解剖显微镜？大家都是神外的一刀客吗？请随便发言！

作者: fei1226com 时间: 2012-6-8 17:22

广大同人，有周末还泡实验室的吧，辛苦了啊！在此小弟扔出一砖：在解剖分离、剥离乳鼠的脑膜、血管时你们都很轻松吗？大家都是神经外科的爷们吗？我发现鼠的大脑总共才三分之一个小指肚大，放在d-hanks液里还跟豆腐脑似的，吐露吐露的，又没有固定，怎么剥离出干净完整的海马、纹状体、vz、svz区啊？文献上都说的简单的和一似的，你们都有用解剖显微镜吗？好象不太可能。
在此造次一下：估计大家都是肉眼估计着剥的把。谁有更好的实用的方法，拿出来交流一下。反正我是觉的这是一个问题。难道每个实验室的细胞培养都还配置了解剖显微镜？大家都是神外的一刀客吗？请随便发言！！！

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解剖显微镜的确要比放大镜和肉眼好用，我今天才刚刚借到一台。剥膜时稍用点D-hanks液，组织就不会太滑。

作者: zwsyrt 时间: 2012-6-8 17:23

事情是这个样子的：

根据你的要求采用不同鼠龄的大鼠，如果是培养皮层或海马神经元，可以用18天的胎鼠；要是做急性分离，用出生后的大鼠5－15天均可。估计你是要做培养，胎鼠的大脑太小，分离大脑皮层时尚可靠肉眼分辨，但如分海马，还是用解剖镜为宜。事实证明，解剖镜还是可行的，只不过刚开始要熟悉一下镜下操作。
最后，祝顺利！

作者: zwsyrt 时间: 2012-6-8 17:23

对了，差点忘了说，我们实验室在做海马分离时，盛有DMEM的平皿内放置了一张滤纸，将鼠脑放在滤纸上面，分离时就不会滑动了。别忘了滤纸也要事先消毒。so long

作者: huifeng0516 时间: 2012-6-8 17:23

大家好，我做新生小鼠（1d）大脑皮层原代培养时有一个问题想求教各位老师：为何我培养出来细胞中的星形胶质细胞有相当大的比例是双核的？听说有人发现过人的星形胶质双核，但后来被证实说是假象，那小鼠的细胞有没有这种现象呢？

作者: windy+++ 时间: 2012-6-8 17:24

这几个神经营养因子对您们培养神经元细胞有用吗？

rHuBDNF, Recombinant Human Brain-Derived Neurotrophic Factor 大脑衍生神经营养因子
rHuNT-3, Recombinant Human Neurotrophin-3 神经营养素3
rHuCNTF, Recombinant Human Ciliary Neurotrophic Facor 睫状神经营养因子
rHuGDNF, Recombinant Human Glial-Derived Neurotrophic Factor神经胶质衍生神经营养因子

作者: greenbee 时间: 2012-6-8 17:24

不知道不能长期培养能培养多久呢？

作者: bongte 时间: 2012-6-8 17:25

各位同志,有做神经元LDH 和SOD的吗?我怎么总测不出呢?郁闷哇!

作者: xyw5 时间: 2012-6-8 17:25

一个很菜的问题
筛网的目是怎样定义的？大小是多少？

作者: yueban-1147 时间: 2012-6-8 17:25

太好了，我也是养海马神经元的，我的培养基是DMEM/F12、10％胎牛血清、10％马血清，48h后更换含B27的无血清培养基培养，以后每三天换一次液，每次半量。我当时买的胎牛血清太多了，因我的经费紧张，想转让100ml的胎牛血清，有意请与我联系。

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 17:26

问哪位战友做过成年大鼠海马神经元培养？

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成年大鼠海马神经元很难培养，而且数量很少，适应性差，我们试过。一般海马神经元培养均选用胎鼠或是0－3天的新生大鼠，鼠龄越小越易成活。

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 17:26

大家好，我做新生小鼠（1d）大脑皮层原代培养时有一个问题想求教各位老师：为何我培养出来细胞中的星形胶质细胞有相当大的比例是双核的？听说有人发现过人的星形胶质双核，但后来被证实说是假象，那小鼠的细胞有没有这种现象呢？

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你能确定培养的星形胶质细胞有相当大的比例是双核的吗？我们培养了近二年的胶质细胞没有发现双核的呀，是不是正处在有丝分裂期？能不能发个图片看看。

作者: zhenxin 时间: 2012-6-8 17:27

各位同志,有做神经元LDH 和SOD的吗?我怎么总测不出呢?郁闷哇!

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你用的哪出的试剂，具体有什么问题呢，我们测了组织和细胞培养的SOD，用的是南京建成的试剂盒，按说明书操作应该不会有什么问题，只是操作麻烦一些，需要细心和耐心。

作者: utt0989 时间: 2012-6-8 17:29

请教一下，我做神经干细胞培养，取的是Ｅ１６胎鼠脑组织，ＤＭＥＭ／Ｆ１２，２％Ｂ２７，２０ＮＧ／mlbＦＧＦ，培养两天后，培养液看起来有点混浊，但镜下看有小细胞团，是不是正常的？还有，是不是我的接种密度大有关啊？

作者: ALALA 时间: 2012-6-8 17:29

我也是做神经干细胞培养的,最近在做NESTIN免疫细胞化学,总是不成功,请各位高手指教.做出的片子细胞质没有染上,细胞核反倒很清晰,不知什么原因?
1.冲洗用PBS的PH值有要求么?多少?
2.用多聚赖氨酸包被的盖玻片,是马上可以接种细胞么?(我们是放于培养箱中3小时.)
3.DAB染色时间,说明书上说是5-20分钟,有没有确切的时间点呀?
4.一抗我们用的是1:100,是不是浓度问题呀?
还是其他方面出错了,请各位前辈指教,小妹在此先谢了.

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:29

一个很菜的问题
筛网的目是怎样定义的？大小是多少？

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目是指１英寸的筛网上有多少过滤孔，２００目就是有２００个孔，１００目有１００个，目越多，筛孔径越小．好象２００目相当于０．７５um的直径．其实卖筛网的有一个很专业的玻璃刻度测量尺，一比就知道网是多少目的．这些你问一问卖筛网的老板，他们可是行家．同一种规格，进口国产的相差好多钱，一般按平方米买，要是作实验可以讲讲好话要上２块钱的就够用了．我曾经和老板们聊过，筛网用途众多，造纸＼中药筛选＼工程都会用到，医学实验只是其一小个领域罢了．兄弟以前也是什么都不懂，勇闯东大街后张了不少知识，大家同享．

作者: yychen 时间: 2012-6-8 17:30

终于找到组织了.
我也是做神经干细胞培养的,最近在做NESTIN免疫细胞化学,总是不成功,请各位高手指教.做出的片子细胞质没有染上,细胞核反倒很清晰,不知什么原因?
1.冲洗用PBS的PH值有要求么?多少?
2.用多聚赖氨酸包被的盖玻片,是马上可以接种细胞么?(我们是放于培养箱中3小时.)
3.DAB染色时间,说明书上说是5-20分钟,有没有确切的时间点呀?
4.一抗我们用的是1:100,是不是浓度问题呀?
还是其他方面出错了,请各位前辈指教,小妹在此先谢了.

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我是去年做的nestin免疫荧光染色，一次就成功了，步骤没什么特殊的，各文献上一样，照了好多漂亮的荧光照片，不知您的问题出在那里

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:30

广大战友，现在我放出一个有关“脐带血分离提取单核细胞”的老话题，但是内容绝对新颖，我在版块里还没有发现过同样的问题，有兴趣大家一起来分析分析。由于目前我们只有小容量的离心机，因此一直在做小量（１２ml／管）脐带血的分离，现在流程已经很熟练了。但是遇到了一个问题，很久无法解决。
　　我们每次先将抗凝的脐带血和生理盐水稀释后离心（１：１混合），顺利的取出白细胞、血小板的细胞层（当然混有部分红细胞），再加在ficoll上（密度１。０７７，上海华精生产，量也足够多，和细胞悬液的比例至少３：２），加的很顺利，分层清晰。可是在２０００r／min，２０min离心后，奇怪的分成了六层，由上而下依次是１盐水层２单核细胞层３红细胞层４ficoll层５粒细胞层６又是红细胞层。而不是想象中的５层（没有上面写的第三层）。好象红细胞没有都被离心到管底，而是分为两部分，也就是我写的３、６层。这样正常吗？这样我取单核层时会混有很多红细胞，而理论上单核层是不应该和红细胞层接触的（上面是水和血清的混合、下面是ficoll液）才对。我加大了离心时间和速度，达到３０００r／min，３０min后依然如此。我想不通问题在哪里。
　　a．两次离心的离心力、时间没有问题吧？
　　b．是不是由于脐带血的问题（因为有采集后２４小时才做分离，可是现采的一样有这种现象）？
　　c．还是淋巴细胞分离液的问题（品质）？
　　d．还是由于脐带血中混有抗凝物质（用的采血袋，内含枸橼酸等抗凝剂，不是单纯的肝素．每袋可以采２００ml，但是实际脐带血只有７０ml左右，会不会过度抗凝溶血了，溶的红细胞无法通过ficoll，而和单核混在一起，看起来好象是红细胞，形成我上面写的第３层）？以上是我的一点不成熟的考虑，请您指点．
　　谢谢！

作者: wu11998866 时间: 2012-6-8 17:31

想做神经细胞荧光染色，是活细胞和死细胞可以区别染色的那种，不知什么试剂盒比较好，在哪买？请各位大侠鼎力相助！

作者: 66小飞侠 时间: 2012-6-8 17:31

我在做胎鼠皮层神经干细胞培养，神经球倒是长得不错，但在传代时发现很难把神经球吹打散成大家所说的单细胞悬液。吹了二十来下，镜下见吹散的很少。不知哪位前辈能指教一二？吹多少次，如何用力，用什么吹等等。听说消化不好，不敢用消化的方法。

作者: 00无名指00 时间: 2012-6-8 17:32

我也要做神经元的培养，请教一个问题，神经干细胞无血清培养基的组成成分？是不是可以让神经干细胞选择性的生长（据有关资料说的）？

我用的完全无血清培养基的成分：DMEM/F12（1：1），2% B27 supplement，1% N2 supplement，青霉素、链霉素各100U/ml，EGF 20 ng/mL，b-FGF 10ng/mL。在无血清培养条件下只有神经干细胞能够长期存活，增殖，而神经元和胶质细胞则不能长期存活。

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我做海马神经元原代培养，用的是无血清培养基，Neurobasal培养液加入2% B27 supplement，同样只有神经元能够长期存活，抑制胶质细胞生长。

作者: 00无名指00 时间: 2012-6-8 17:32

请问诸位，我导师因为国外的胎牛血清太贵不主张我买，我是该买四季青的胎牛好呢，还是买sigma的小牛血清？？

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如果有条件的话当然是买国外的好些了，国内的不同批次性能都是有差异的，而且需要灭活，国外血清不用灭活的。胎牛血清当然是比小牛血清好的，建议你如果有条件的话，买国外的胎牛血清。我用的是四季青的胎牛血清，有时候也碰运气。

作者: 00无名指00 时间: 2012-6-8 17:32

请教各位高手:神经元的原代培养一定要加神经生长因子吗?价钱是不是很贵?

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有文献报道说在没有神经生长因子的体外培养环境中，神经元会在数天内死掉，建议还是要加的，sigma公司的NGF0.1mg256.5美金，大概3000多元。

作者: milkdog 时间: 2012-6-8 17:33

请问你买的Gibco公司的N2 supplement，是5ml一小瓶吗？
我买的N2，也是Gbico的，瓶子上的说明并没有其所含成分，只写了一堆”caution“，不知道我买得是否正确？谢谢！

作者: 乌贼老弟 时间: 2012-6-8 17:33

请问ＥＧＦ．bＦＧＦ，Ｎ２各怎么配置啊？看说明书上好象要用Ｔris溶液溶解，是个什么ＤＤ？请教一下．另外我有不少ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培养基，是Ｈyclon的，配置现成的，原装进口溶液．开盖就可以用，十分方便．现想转让，价格绝对优惠．西安的战友有兴趣的联系我．

作者: viviwang1987 时间: 2012-6-8 17:34

雪旺细胞那种方法最好！！
我在做雪旺细胞，应用的是新生鼠酶消化法，但细胞纯化不佳。
故同时摸索植块法，但是周期太长。比较发愁啊。
期待大虾们提提建议

作者: 66+77 时间: 2012-6-8 17:35

我在养皮质神经原,用过氧化氢诱导损伤后,电泳检测DNA LADDER，但从96孔培养板上消化后离心收获细胞，结果没有任何沉淀，即没有收获到多少细胞，我遇到的问题似乎和顺顺类似，请问这是什么原因呢？

作者: 969 时间: 2012-6-8 17:35

最近我想做下丘脑的培养，不是作神经元的培养，是取下整个下丘脑组织块进行培养，可是不知该怎么着手，请各位赐教！

作者: xue258 时间: 2012-6-8 17:36

各位战友：
小弟也是做神经细胞培养的，就要进入实验室了，有几个问题想请教一下。
1.培养神经细胞时可不可以先用含血清培养基培养，然后再用无血清培养基培养？
2.在从组织中分离细胞时可不可以用培养液清洗组织？
3.终止消化时只用20%胎牛血清行不行？
请各位大哥大姐回复啊,小弟先在这里谢过了。

作者: ritou1985 时间: 2012-6-8 17:36

大家好.我正准备做原代神经元的混合培养,就是说neuroncell+microglia cell+astrocyte+oligo dentric cell.然后做免疫组化.不知道大家有没有方法.谢谢.

作者: ritou1985 时间: 2012-6-8 17:36

忘了说一句,有没有人做15天胎龄的小鼠很有经验的.谢谢.

作者: S6044 时间: 2012-6-8 17:37

我也是做神经干细胞培养的,最近在做NESTIN免疫细胞化学,总是不成功,请各位高手指教.做出的片子细胞质没有染上,细胞核反倒很清晰,不知什么原因?
1.冲洗用PBS的PH值有要求么?多少?
2.用多聚赖氨酸包被的盖玻片,是马上可以接种细胞么?(我们是放于培养箱中3小时.)
3.DAB染色时间,说明书上说是5-20分钟,有没有确切的时间点呀?
4.一抗我们用的是1:100,是不是浓度问题呀?
还是其他方面出错了,请各位前辈指教,小妹在此先谢了.

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1、还是平常的PBS，7.4，要求不高
2、pll包被后最好干燥，否则容易诱导分化，接种后8h即可处理，建议多聚甲醛固定后再用triton透膜20min
3、DAB这个时间点需要自己摸索，一般情况下15min肯定能出结果
4、1：50-1：200都没有问题
建议做免疫荧光吧，虽然容易淬灭，但是多重荧光染色后照出照片的效果是其它细胞做不到的，偶经常被人嘲笑说在放烟花hehe

作者: dog002 时间: 2012-6-8 17:37

神经细胞原代培养图
[培养基] DMEM（含20%胎牛血清+双抗）
[取材组织] 海马神经元
[培养时间] 第3天（48h)
[成像条件] Olympus倒置相差显微镜+Nikon 990数码相机

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作者: 2541 时间: 2012-6-8 17:38

大家好，我在做鸡胚背根神经节培养，我想问一下如果用鼠尾胶原包被，需用氨气熏蒸，不知如何进行？用氨水可不可以，在一小时后将其吸出，再用PBS冲洗两便，培养鸡胚背根神经节时用无血清的DMEM+神经生长因子是否可行（DMEM是高糖的，但谷胺酰氨达不到1%），是否需加其他添加剂，谢谢

作者: yueban-1147 时间: 2012-6-9 11:03

请各位大侠看看我的海马神经细胞
培养基：Neurobasal A ，B27
没有镜下剥离血管和脑膜
培养24H后

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作者: yueban-1147 时间: 2012-6-9 11:03

是星形胶质细胞吗？

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作者: yueban-1147 时间: 2012-6-9 11:03

这是培养3天后的
怎么杂细胞还是这么多啊？
是什么细胞呢？怎么去除呢？

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作者: yueban-1147 时间: 2012-6-9 11:09

事先用多聚赖氨酸铺板，是不是粘附了死细胞呢？
接种前没有用筛网过滤
因为流不下去

我用的Neurobasal A,B27培养基，是不是不用加阿糖胞苷抑制其他细胞生长呢？
镜下看，似乎并没有其他细胞生长，我怀疑是没有滤除干净的死细胞，怎么除去呢？
急切盼望各位大侠指点！

作者: fsdd817 时间: 2012-6-9 11:10

我打算做视网膜神经元培养请各位前辈多指教啊

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hi, i am working on the cell culture of bipolar cells from rat retina too. i tried 3 times
and all i got was fragments of the cells. this is how i do it:

isolate retina
incubate retina with papain in hank's solution for 50min
wash retina 3 times with normal hank's solution ( i spin the retina, maybe i should not do it?)
tritrarate retina by pipetting up and down(about 15 times) (maybe too much?)
suspend cell in culture dish
i am going to try agian next week and hope me good luck

作者: 66+77 时间: 2012-6-9 11:12

yueban：
我现在培养的细胞情况和你一样的，也是有这么多的杂质细胞，不知道是什么，听我的师兄说好像叫“黑胶质虫”，但是我上网也没查到这种东西，希望有经验的朋友们给点意见，感激不尽！

作者: 66+77 时间: 2012-6-9 11:13

“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。

“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。

作者: woshituzhu 时间: 2012-6-9 11:14

新生大鼠断头取脑的问题：
请问一下手术机械都是什么型号的呢？
做新生大鼠解剖有哪些区别？
哪里有大鼠头的解剖图？

作者: ending 时间: 2012-6-9 11:16

图中的大部分是神经元崩解后的细胞碎片.

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这是培养3天后的
怎么杂细胞还是这么多啊？
是什么细胞呢？怎么去除呢？

作者: viviwang1987 时间: 2012-6-9 11:16

广大战友，请问有做过背根神经节细胞培养的吗？我正准备做，由于以前没做过细胞培养，也不知难度如何，想请有经验的战友给一些经验之谈，渴望各位帮忙！谢谢！谢谢！。。。。。

作者: dragonkilly 时间: 2012-6-9 11:23

我要从胎鼠神经管取神经干细胞，请教各位高手指教！具体怎样取材？

作者: milkdog 时间: 2012-6-9 11:23

我也是养原代海马细胞的，用的培养基是DMEM/F12（1：1），2% B27 supplement，1% N2 supplement，青霉素、链霉素各100U/ml，EGF 20 ng/mL，b-FGF 20ng/mL。在无血清培养条件下培养，可是第二天就发现有很多细胞贴壁，吹散，次日未再有贴壁现象。是何原因呢，能否告诉我你的联系方式，想向你好好请教一下，现在好着急。

作者: nn255 时间: 2012-6-9 11:23

各位战友：
小弟也是做神经细胞培养的，就要进入实验室了，有几个问题想请教一下。
1.培养神经细胞时可不可以先用含血清培养基培养，然后再用无血清培养基培养？
2.在从组织中分离细胞时可不可以用培养液清洗组织？
3.终止消化时只用20%胎牛血清行不行？
请各位大哥大姐回复啊,小弟先在这里谢过了。

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1. 一般不这样用，因为从有血清培养基向无血清培养基转化时容易诱导神经元发生凋亡。你可以选择有血清培养或无血清培养，无血清培养神经元纯度要高一些，常用的培养基成分为：Neurobasal medium +2％B27＋1％Glutamax
2.可以，但要用基础培养基。
3. 20%胎牛血清足够了

作者: nn255 时间: 2012-6-9 11:25

这是培养3天后的
怎么杂细胞还是这么多啊？
是什么细胞呢？怎么去除呢？

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首先细胞活性很差，从我的经验，到目前程度，神经元有可能不能存活，即便能存活，可能没有正常功能。
培养神经元需注意以下几点：
1.酶消化时间及浓度的控制。不知你用的是什么酶，消化了多长时间？
2.脑膜是否完整去除，否则可导致上皮类及成纤维细胞生长。在培养中还可常见血细胞沾染。
3.洗涤时避免使用高离心力，避免在吹打过程中产生气泡。

作者: zhenxin 时间: 2012-6-9 11:25

给大家说一下,我现在培养的也是视网膜的神经原细胞,现在细胞培养到第四天,我观察到了奇怪的现象,那就是培养瓶里在25倍的解剖显微镜下满视野全是菜花样的细胞团,并且这些细胞都是悬浮着的,细胞团还滋生出了好多象是黑木耳似的薄膜状的东西.细胞培养液却是清亮透明的,颜色还是淡红的,没有浑浊也没有变黄.
奇怪,难道这是细胞污染了?如果是污染了,那么这又是什么菌污染呢?
各位大虾,帮个忙,给指点一下好吗?
不胜感激啊!

作者: wsll 时间: 2012-6-9 11:25

我打算做下丘脑脑组织培养，不知道这叫不叫组织培养，我看外文文献上有类似的实验，是用人工脑脊液孵育几个小时收集孵育液来测，但文献写得很笼统，不知从何下手。各位有没做过类似工作的？请教一下！

作者: tangxin_80 时间: 2012-6-9 11:35

大家好，我是新手，准备做大鼠纹状体神经元原代培养。
通过查一些文献，有几点问题要请教？希望各位高手不吝赐教。。。。
1。消化酶用除胰酶外是否还需加EDTA，消化多长时间为宜？
2。消化后离心收集细胞，用多少rpm合适，我看文献上600-1200不等，晕。。。
3。有些文献还加了DNase，什么作用？
4。胎鼠的纹状体好分么?
如果能提供较为详细的实验protocol，本人将感激不尽！

作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:35

我和你的方法基本一样,可为什么养不出来啊,老师能给点意见吗?我很需要,谢谢了!

作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:38

神经细胞原代培养图
[培养基] DMEM（含20%胎牛血清+双抗）
[取材组织] 海马神经元
[培养时间] 第3天（48h)
[成像条件] Olympus倒置相差显微镜+Nikon 990数码相机

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我用的培养基和你相同,但是为什么就有很多杂细胞呢?能告诉我么?谢谢了!

作者: kswl870 时间: 2012-6-9 11:38

我也在做大脑皮层神经元，做了好多次了，一直都没成功，总是长到第三天就死掉了，不知道是什么原因，我快崩溃了！

作者: HPLC使者 时间: 2012-6-9 11:40

我也是做神经元培养的新手。很高兴在这能和这么多位志士认识！
本人做过！在离心时用1000r和1500r对细胞的影响好像不是很大！
主要是消化时注意！一般用0.25％胰酶！

作者: HPLC使者 时间: 2012-6-9 11:40

想问下大家，在做神经细胞元代时，为什么从乳鼠分离的神经元不能代表成年大鼠！谢谢！

作者: HPLC使者 时间: 2012-6-9 11:41

我上次养的海马，也由此情况，出现了一些梭形的细胞，不知道是什么？但上次我的细胞碎片也很多，这次我缩短了消化时间，从20分钟缩短到15分钟，其间振动一次，结果养得很好，碎片很少，并且那种梭形的细胞也不见了。还希望哪位老师指点，那个梭形细胞到底是什么？迷惑中！

作者: junhun 时间: 2012-6-9 11:41

我们做了近一年半的神经细胞培养,在细胞原代培养中,我们经历的最大的问题就是细胞的污染问题, 所以在神经细胞的培养过程中,首先要树立很强的无菌观念,认真做好消毒和准备工作.其次在操作过程中,胰酶的消化时间也是细胞生长的一个关键因素,不能消化时间过久,我们一般是采用机械吹打和胰酶共同作用的方法, 细胞一消化成单细胞就立即中止消化,再次, 在整个的操作过程中,吹打和处理的手法一定要轻,缓,以免细胞受到损伤,影响生长.
一点体会与大家共勉.

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我也做的是海马原代培养，现在做的感觉海马活得不多，好多胶质细胞，Ara-c我是在24h后加入的，然后处理48h,请问这个不知道和消化是不是有关系？
另外，体式显微镜我是放在超净台里面的，但由于台子的挡板不能推拉，操作起来很不方便，老师建议我把显微镜拿出来，我又不是很放心，请问这个可行吗？
谢谢！

作者: leifengta 时间: 2012-6-9 11:42

各位前辈好，我是一个新手，做海马神经元培养，有很大的问题需要各位指导，我的做法是：海马取出之后放入盛有Hank's液的培养皿，用眼科剪剪成尽量小的组成块，用滴管吸入离心管中，1000转离心６分钟，弃上清，离心管中加入０.１ｍｌ０.１２５％的胰酶，３７度消化１０分钟，每次在这一步之后离心管中只有一个大大的粘液团，中止消化后加入Ｈａｎｋ＇ｓ液吹打，可以将粘液团吹散，再离心后加入培养基过２００目钢网，将滤液植入培养瓶，镜下观察有时会有一些红细胞，但细胞密度很好，但是一两天后，培养瓶中就细胞很少，突起也不够好。这个问题已经反复出现了好多次，我实在不知道如何解决了．．．

作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:44

我刚准备养海马,可效果不怎么好,我的方法是用DMEM(含有双抗)加上20%血清培养(四季清的),在第3天加入阿糖胞苷0.25ug/ml,然后于培养的第5换半液,在第7天换全液(DMEM(含有双抗)+20%血清,可细胞只能维持到第6天就开始裂解了,各位前辈,希望大家给小女子一点意见,谢谢先,
还有我打算加一些生长因子,老板说国产的就可以,我该加什么呢?NGF可以吗?具体的步骤该怎么做呢(例如什么时间,剂量和浓度的问题?)
谢谢各位前辈啊!!

作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:44

这是24小时的

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作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:48

这是53小时后低倍镜下的情况

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作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:50

这是72小时后,我不明白照片中右上角的那些很大的细胞是什么啊?神经元很难鉴别啊??到底哪些才是呢?请高手指点!!谢谢!

图片附件: 11345902.jpg (2012-6-9 11:50, 39.32 KB) / 该附件被下载次数 12
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作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:50

这是加入阿糖胞苷后的照片,好象没有什么区别啊,我的阿躺胞苷浓度是0,25ug/ml,为什么啊?

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作者: kewanqi2011 时间: 2012-6-9 11:51

出生3天的大鼠做皮层神经元培养行吗？还有为什么我总感觉养出来的细胞杂质那么多呢？

谢谢！

作者: 8964357 时间: 2012-6-9 11:51

请问孕14天的大鼠胚胎的脑，或者前脑在哪个部位呢？是最顶端，还是最顶端转过后的那个？最好能发张图片，谢谢啦！俺刚开始做神经干，培养的不是很好啊，请大家多多指教。

作者: TNT 时间: 2012-6-9 11:52

各位大虾好，我是做海马神经元培养的，有2个问题需要各位指教，
1,有没有谁做过SD乳鼠和昆明小鼠的乳鼠(均刚出生1天的)海马神经元培养的比较.他们之间有差别吗?本人觉得昆明小鼠的培养很艰难.
2,dmem/f12到底应加多少L-谷氨酰胺?

作者: baidukk 时间: 2012-6-9 11:52

有没有人用3个月以内的流产孕囊来试着培养神经干细胞的?现在3个月以上的引产胎儿是越来越少.人们的健康意识都增强了,防范措施也提高了.发现哦了就打吊了.要是能够用药物流产的孕囊来培养神经干细胞那就解决了很大的种子来源问题啊.着是我的IDEA,讲出来供大家来讨论.我也正在做这一方面的研究,***区的话可以合作.讨论,交流啊

作者: junjie05 时间: 2012-6-9 11:53

我也是做神经元的培养的！目前最大问题是分的不稳定！而且碎片不少！
如何避免碎片！
是否消化过度？最终B27的浓度是多少？！

作者: 131415 时间: 2012-6-9 11:53

我做中脑黑质神经元的,可是不知道怎样才能提高多巴胺能神经元的纯度,希望有做过的同志给点建议.

作者: okhaha 时间: 2012-6-9 11:54

请教各位群友immortalized human dorsal root ganglion cell culture中的第一个单词在这里如何确切翻译！先感谢

作者: wu11998866 时间: 2012-6-9 11:54

我做大脑皮层神经元缺血再灌注（体外），最近用免疫荧光作了神经元鉴定，效果不好，背景特别胀，考虑与细胞爬片本身杂质多有一定关系，希望大家能与我联系，交流，共同学习，谢谢

作者: XYZQ 时间: 2012-6-9 11:54

请教各位群友immortalized human dorsal root ganglion cell culture中的第一个单词在这里如何确切翻译！先感谢

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永生化的

作者: zhezhe 时间: 2012-6-9 11:55

现在网上有神经元的细胞株买，不是说神经元是分裂后细胞，不可以传代培养，只能原代培养吗？请教各位师兄师姐了。我才研一，不是很懂。谢谢了！

作者: 泡泡 时间: 2012-6-9 11:55

我是新手,现在在用无血清的方法培养海马神经元,用的是B27 supplement，neuralbasal培养基,没有用N2,可是培养出来的细胞24小时后还是圆形的,急切想知道您是怎么做的,能告诉我你的具体步骤吗?谢谢!

作者: wood533 时间: 2012-6-9 11:58

我是这方面的新手，想请教一些问题：
1.除了原代培养，有没有人买到了海马神经元的原代细胞株？
2.如果做原代，处理培养板的时候困难大吗？需要注意什么问题？
3.做原代可以不过筛吗？

作者: 04906 时间: 2012-6-9 11:58

我真要做下丘脑神经原的原代培养。你的下丘脑神经元培养的怎么样了？

作者: jujuba 时间: 2012-6-9 12:01

胎鼠的神经干细胞怎样培养?

作者: Ao7 时间: 2012-6-9 12:01

广大战友，请问有做过背根神经节细胞培养的吗？我正准备做，由于以前没做过细胞培养，也不知难度如何，想请有经验的战友给一些经验之谈，渴望各位帮忙！谢谢！谢谢！。。。

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我现在正在做小鼠的E14.5的胚胎取整个DRG进行培养，做过两次预实验效果都不错，不知你的实验效果怎么样。

作者: tianmei001 时间: 2012-6-9 12:02

求教：
各位大侠，我是新手，要做大鼠的背根神经节的膜片钳，请问膜片钳的细胞外液和电极内液的渗透压怎么测定啊，在文献上看到是用vapor pressure osmometer测定的，这是什么东东，在哪里可以搞到，有没必要用它测定渗透压呢

作者: tianmei001 时间: 2012-6-9 12:03

求教：
DMEM培养基有很多种，高糖、低糖等，大鼠背根神经节细胞用哪种比较合适呢。在环境中分离的DRG细胞，用双抗可以培养几天不染菌呢？

作者: tianmei001 时间: 2012-6-9 12:04

各位大哥大姐知道的帮帮忙吧，小妹要用DRG做膜片钳，对细胞培养一点概念都没有，小妹先谢谢啦。

作者: bananapeople 时间: 2012-6-9 12:05

我在24小时后换了无血清培养基后，细胞明显减少，而且有崩裂的细胞（镜下是有很好折光性的小亮点）。还有一个问题是我的培养孔内，好多孔都是中间没有完整的细胞（可能已经裂解了吧？）而在周边有完整的但是比接种完了么少。我养的是海马神经元原代培养，接种液是含血清的DMEM,24小时后换的Neurobasal无血清培养基。哪位大侠指教一下，先谢了

作者: langlang 时间: 2012-6-9 12:06

哪位能告诉我一下neuralbasal培养基哪家公司比较好?
价格多少?
谢谢!

作者: kulee 时间: 2012-6-9 12:07

我是这方面的新手，想请教一些问题：
1.除了原代培养，有没有人买到了海马神经元的原代细胞株？
2.如果做原代，处理培养板的时候困难大吗？需要注意什么问题？
3.做原代可以不过筛吗？

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好像SH-5Y5Y这个细胞株是海马神经元的。

作者: is2011 时间: 2012-6-9 12:09

我准备做海马神经元细胞原代培养，心中十分忐忑不安，以后还请各位多多帮助！

作者: am10 时间: 2012-6-9 12:10

哪位能告诉我一下neuralbasal培养基哪家公司比较好?
价格多少?
谢谢!

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用Gibco 的吧,好象500多吧

作者: fqswdzd 时间: 2012-6-9 12:11

大家好！我养的是皮层神经元，我养了6批了，都没有成功，不是因为污染问题，而是细胞纯度太差，小胶质细胞太多了，我用阿糖胞苷抑制效果不好，请各位指教阿糖胞苷的用法！谢谢

作者: kswl870 时间: 2012-6-9 12:11

我现在正在做原代皮层神经元的培养，现在感触最深的有以下几点：
1. 选择新生鼠的，最好是用出生24H内的；
2. 剥离脑膜和血管时一定要仔细，把皮层边缘的脑膜和血管一定要弄干净；
3. 将细胞制成单细胞悬液时，不一定就要用胰酶笑话，我是直接在筛网上吹打的，这样不仅节省了资源，还节省了做原代的时间，使细胞更有活力；
4. 当然最重要的就是整个实验过程一定要小心，绝对保证无菌操作，一定要注意细节，不要存在侥幸心理，要知道，培养一批神经元就是一周哦
好啦，祝各位实验顺利

作者: duoduo 时间: 2012-6-9 12:12

大家好：
　我现在正培养神经干细胞，可是一直找不到准确计数神经干细胞扩增的方法，请问有经验的前辈指一下，不胜感激！

作者: hulu呼噜 时间: 2012-6-9 12:13

想问下做成皮层神经元的群友！
在培养液中的胎牛血清是否要灭活？
没灭活和灭活的相差多大！
还有就是在灭活是血清有沉淀影响大嘛？
谢谢！

作者: dotaaa 时间: 2012-6-9 12:13

我想要做海马神经元的原代培养,如何确定小乳鼠的海马的位置??

需要严格区分吗??

有经验的群友们,请提供一套成熟的培养方案!!

先谢了!

作者: ROSE李 时间: 2012-6-9 12:14

广大同人，有周末还泡实验室的吧，辛苦了啊！在此小弟扔出一砖：在解剖分离、剥离乳鼠的脑膜、血管时你们都很轻松吗？大家都是神经外科的爷们吗？我发现鼠的大脑总共才三分之一个小指肚大，放在d-hanks液里还跟豆腐脑似的，吐露吐露的，又没有固定，怎么剥离出干净完整的海马、纹状体、vz、svz区啊？文献上都说的简单的和一似的，你们都有用解剖显微镜吗？好象不太可能。
在此造次一下：估计大家都是肉眼估计着剥的把。谁有更好的实用的方法，拿出来交流一下。反正我是觉的这是一个问题。难道每个实验室的细胞培养都还配置了解剖显微镜？大家都是神外的一刀客吗？请随便发言！！！

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我已经开始养神经干细胞，我的看法是如果是新生鼠感觉在解剖镜下海马是很清楚的，我是取的是12天的胚胎，感觉海马就是一条线，很不好取，所以我就取整个大脑皮层来培养，还可以的。

作者: yysr238 时间: 2012-6-9 12:14

哪位能告诉我一下neuralbasal培养基哪家公司比较好?
价格多少?
谢谢!

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这个培养基GIBCO的比较好，价格500左右。具体多少钱我一下想不起来了。

作者: 66小飞侠 时间: 2012-6-9 12:19

我正在做大鼠皮层神经元的培养（SD大鼠，出生后24h以内），其操作过程需要从完整脑组织中去掉海马、嗅球和基底神经节。我这里没有解剖显微镜，靠肉眼识别和去除以上组织。试操作几次，问题出现在：由于幼鼠脑组织很软，如果首先去除嗅球和基底神经节，则等到分开2个脑半球取海马时，脑组织已经瘫软了，找不见海马了；如果先打开2个脑半球去掉海马，回头又分辨不清哪些脑组织是嗅球和基底神经节了。请教做过皮层神经元培养的高手，大家是如何操作的，是否也遇到我的问题？谢谢大家！

作者: 987789 时间: 2012-6-9 12:19

广大同人，有周末还泡实验室的吧，辛苦了啊！在此小弟扔出一砖：在解剖分离、剥离乳鼠的脑膜、血管时你们都很轻松吗？大家都是神经外科的爷们吗？我发现鼠的大脑总共才三分之一个小指肚大，放在d-hanks液里还跟豆腐脑似的，吐露吐露的，又没有固定，怎么剥离出干净完整的海马、纹状体、vz、svz区啊？文献上都说的简单的和一似的，你们都有用解剖显微镜吗？好象不太可能。
在此造次一下：估计大家都是肉眼估计着剥的把。谁有更好的实用的方法，拿出来交流一下。反正我是觉的这是一个问题。难道每个实验室的细胞培养都还配置了解剖显微镜？大家都是神外的一刀客吗？请随便发言！！！

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感觉剥乳鼠的脑膜很恼火，血管还好，脑膜经常是剥着剥着就失去踪影了，解剖镜的放大倍数也不大，感觉没什么用，而且超净台里不好放啊。就是消化的时候组织块都黏糊在一起，感觉还是脑膜没剥干净。我是做分离原代大脑皮层神经元，还想问一下做皮层神经元也要加神经生长因子吗？感觉那个东西不便宜啊
请教高手指点

作者: moonlight45 时间: 2012-6-9 12:20

大家好！！我是在培养脊髓神经元细胞的，刚开始试了几次，都不行，神经元细胞没有见到，而成纤维细胞很多，我不知道为什么，另外培养神经细胞的培养液加了10%的胎牛血清，还有必要加10%的马血清吗？？请高手指教！！为了更好的和各位战友交流，我的qq是249098502，敬请加入，谢谢各位同仁。

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