标题:
[求助]细胞计数时,应该怎样进行稀释?
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作者:
Ao7
时间:
2012-6-26 12:17
标题:
[求助]细胞计数时,应该怎样进行稀释?
我在细胞计数时,总感觉不准。原因主要在于:细胞离心悬浮后,取多少体积的细胞进行计数比较准确?体积大,比较浪费;体积小,肯定不准确。请问大侠,细胞计数时,应该怎样进行稀释?谢谢?
作者:
xingyi08
时间:
2012-6-26 12:17
离心后,加培养液混匀,吸一定体积(1ml)的进行记数,然后换算你最终想要的体积,最后加培养液分装.
我也是面临这个问题,我觉得应该是这样的,不知道楼主怎么认为
作者:
dragonkilly
时间:
2012-6-26 12:18
细胞离心悬浮后,取10μl细胞悬液,加10μl的0.4%胎盘兰,再加20μl的培养基,混匀后取10μl上计数盘。4个大方格计数得到的活细胞数直接乘以10的四次方即可。
作者:
bananapeople
时间:
2012-6-26 12:18
细胞离心悬浮后,取10μl细胞悬液,加10μl的0.4%胎盘兰,再加20μl的培养基,混匀后取10μl上计数盘。
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我认为这个稀释方法不准确。一般来说,稀释样品体积越大,结果越准确。“取10μl细胞悬液”能准确吗?
作者:
loli
时间:
2012-6-26 12:19
我觉得主要还是稀释到细胞个数在大格中少一点,不要太多,否则不好算。然后再加培养基调到所需的细胞数。
作者:
pencil菲
时间:
2012-6-26 12:19
本实验室的方法:细胞离心悬浮后,取100μl细胞悬液,加100μl的PBS,再加200μl的0.4%台盼兰混匀,取7.8μl上记数盘,4个大方格计数得到的活细胞数直接乘以10的四次方。可以试试哦!
作者:
whitesheep
时间:
2012-6-26 12:19
稀释的程度要控制在每个大方格的细胞数在30个左右. 这个要根据经验,呵呵.
作者:
vivian4123
时间:
2012-6-26 12:19
血细胞计数板:将计数板和一张盖玻片擦拭干净,把盖玻片覆在计数板上面,使之稍微移向一侧,露出部分计数板台面,以便滴加细胞悬液。
染色:取细胞悬液9滴,台盼蓝1滴,混匀。
加悬液:把计数板平放在显微镜台上,立即从计数板边缘轻轻滴1滴已染色的细胞悬液。
镜下观察(如图)
细胞数/ml 原悬液=4大格细胞总数/4 *10000*稀释倍数
作者:
dongdongqiang
时间:
2012-6-26 12:20
我的做法:
细胞离心混悬后,吸100ul细胞悬液加到一个1.5ml的EP管,加900μl的PBS,配成1000ul,即1ml的细胞悬液,这样是把原细胞悬液稀释了10倍了,再从这个1ml的细胞悬液中用吸管吸一滴从计数板边缘缓慢滴入.
至于后面的如果计算可以参考细胞培养书了呢.
按照这个公式:
细胞悬液细胞数/ml =4大格细胞总数/4 *10000
算出来的值要乘上10,是因为在计数前稀释了10倍了
作者:
Ao7
时间:
2012-6-26 12:20
血细胞计数板:将计数板和一张盖玻片擦拭干净,把盖玻片覆在计数板上面,使之稍微移向一侧,露出部分计数板台面,以便滴加细胞悬液。
染色:取细胞悬液9滴,台盼蓝1滴,混匀。
加悬液:把计数板平放在显微镜台上,立即从计数板边缘轻轻滴1滴已染色的细胞悬液。
镜下观察(如图)
细胞数/ml 原悬液=4大格细胞总数/4 *10000*稀释倍数
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这个我知道!
我的问题是:细胞计数时,应该怎样进行稀释?
作者:
viviwang1987
时间:
2012-6-26 12:21
个人观点,在可能范围内尽量稀一点(使得在镜下计数时视野更清晰),就用全培来稀释就可以咯。
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