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标题: [求助]细胞污染查因?细胞培养室的消毒? [打印本页]

作者: glass 时间: 2012-6-26 16:28 标题: [求助]细胞污染查因?细胞培养室的消毒?

在下是新手,养细胞养了快一个月了,眼看着就可以加药了,但是前几天细胞污染了.
细胞是问别人要的,带的时候培养瓶没有充满,只有3ml的样子,拿布包起来,揣在怀里,坐了将近一个小时的公交车带回来的,养了快两个星期的时候发现污染了,因为同时还有一株细胞,用的东西和培养条件都是一样的,却没有污染,所以我想不出是哪个环节出问题了,希望高手指点一二.
现在为保险起见,打算把培养室彻底消毒一下,请教各位用什么方法消毒最彻底,要连缓冲间一起消毒么?培养箱用什么方法消毒比较放心?养着细胞的时候培养室及培养箱应该怎么清扫及消毒?
谢谢各位高手指点!

作者: jujuba 时间: 2012-6-26 16:28

可用紫外线/甲醛熏蒸等手段消毒实验室空气;多用新洁尔消毒实验室地面;培养箱用什么方法消毒也不太知道;
我是新手也在准备细胞培养,请教楼主,是自己带装有培养基的培养瓶去拿细胞?还是拿已装有细胞的培养瓶?拿回来是否要作什么工作还是直接放入培养箱温度调到多少,你的培养基是自己配制还是买,

作者: S6044 时间: 2012-6-26 16:29

虽然你的培养条件是一样的，但是可能造成污染的原因很多。比如说即使你加液的时候不小心管尖碰到了有细菌的东西，你自己没有看到，或者瓶盖被污染都有可能污染的原因暂且不找了。尽量做好实验的每一步，防大于治。
如果你打算清理培养室下面有几个建议：
1.  紫外消毒法。紫外消毒法可以破坏细菌蛋白，使细菌不能生长。你可以培养室装一个紫外灯，每天早上开灯半个小时，然后关灯后风机吹十来分钟再进去，因为紫外产生的臭氧会使人头晕，恶心等，特建议你等到空气吹散后再进去。这样的话，整个实验室的物品都可以消毒，就可以减少污染的可能性了。以上所做的消毒也包括缓冲间的消毒。
2.  消毒液消毒法。我们通常用的是苯扎溴酚稀释液或者巴氏消毒液。实验告一段落情况下，你用消毒液把你所有可能用的枪头盒，枪等等都擦拭一遍。实验台尽量角落都擦拭干净。包括实验室的地面我们都用消毒液擦洗的。不过根据个人实验条件而定。这个可能不是很适用于人多的实验室。
3.  培养箱的消毒：用消毒液擦洗后，在培养箱下面放置水的不锈钢器里面装上饱和硫酸铜溶液，如果挥发一部分以后，继续加饱和硫酸铜溶液。配置饱和硫酸铜溶液要用单蒸水配置。
对于细胞室我们通常是综合1和2法来消毒的。一般的细胞培养室都应该会有紫外灯的。不过有些实验室采用超滤系统的话就可能不会装紫外灯，就尽量利用第二种方法好了。
对于培养箱，如果消毒的时候里面还养着细胞，放饱和硫酸铜是没有问题的。用75%无水乙醇消毒也可以，不过要经常擦洗了。根据个人条件采用适合的方式进行消毒。
希望以上提出的建议对你有用。

作者: glass 时间: 2012-6-26 16:29

首先谢谢你的建议.
我当时拿细胞的时候是听师姐的交待拿自己的培养瓶去装的,因为之前没有准备好培养基,所以没有带自己的培养液去,而给细胞的师兄也没有多余的培养液给我充满,我只好拿了一个瓶底的细胞回来了,只加了约3ml培养液,其实应该充满才比较放心的. 拿回来我是直接放进培养箱里,第二天加了自己的培养液进去,过了几天才给细胞传代的,温度一直是37度,我培养基是买的,因为过滤太麻烦了,而且不放心,就偷了个懒,呵呵

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非常感谢你!我今天用消毒片泡水擦了一遍培养室的墙壁和地面,用75%的酒精擦了培养箱和超净台,还用甲醛熏蒸了，打算以后不能偷懒，勤擦勤洗呢，唉，教训真是惨痛啊．　　你说的饱和硫酸酮溶液可以直接当水用么，有师姐在水盘里加庆大霉素，这样有必要么，跟加饱和硫酸酮一样的作用么？

作者: kewanqi2011 时间: 2012-6-26 16:30

硫酸铜加的时候一定记得要用玻璃或塑料盘子，不能用金属盘。
加庆大霉素有什么用？会慢慢分解掉的，如果注意操作，可以什么也不要加，直接用灭菌的蒸馏水，注意勤观察，及时换水就行了。

作者: glass 时间: 2012-6-26 16:30

那我就用灭菌的三蒸水好了，因为一时找不到塑料的或者玻璃的盘子，然后勤观察，勤擦洗吧，一天换一次水，看看效果吧
今天进去培养室看了看，甲醛的味道还有些刺眼刺鼻，请教一下对细胞会不会有影响？
再次感谢楼上几位！

作者: october7 时间: 2012-6-26 16:31

甲醛有刺激性气味，不可在里面长时间滞留，可以用3%碳酸铵水溶液喷一下。

作者: DDD 时间: 2012-6-26 16:31

不用一天换一次水，那多麻烦啊。我一般是10天-14天换一次

作者: gemei0115 时间: 2012-6-26 16:32

我也在养细胞,已经一年了,污染的关键在操作,无菌观念一定要强,台面消毒其次,培养箱再次之,不要老是消毒培养箱,细胞会被毒死的.

作者: glass 时间: 2012-6-26 16:32

不用一天换一次水，那多麻烦啊。我一般是10天-14天换一次

那么久才换一次水，水会干的呀，不知道这位战友有什么好办法能坚持这么久？

楼上这位战友，不用经常消毒培养箱，那平时应该怎么消毒培养室及培养箱呢，多久一次，用什么方法最保险呢？谢谢指教！

作者: glass 时间: 2012-6-26 16:33

自己顶顶,不要沉下去了,有知道的高手请指导指导,非常感谢!
细胞不想再被污染了,所以想严格消毒,细心操作呢,给自己加油!

作者: KGZ564 时间: 2012-6-26 16:35

请问，为啥加硫酸铜的时候不能用金属盘呢？我用的不锈钢的盘子，使二氧化碳培养箱自带的，请问有啥影响吗？
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硫酸铜加的时候一定记得要用玻璃或塑料盘子，不能用金属盘。
加庆大霉素有什么用？会慢慢分解掉的，如果注意操作，可以什么也不要加，直接用灭菌的蒸馏水，注意勤观察，及时换水就行了。

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