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标题: [求助]免疫组化和免疫细胞化学 [打印本页]

作者: rxcc33 时间: 2012-6-28 10:40 标题: [求助]免疫组化和免疫细胞化学

查了一下‘免疫组化和免疫细胞化学’
有这些基本观点：
1.免疫组化指的是针对组织切片的免疫化学染色，根据切片的不同一般可分为冰冻切片和石蜡切片，两种切片的免疫染色实验过程大体相同但是冰冻切片一般不需要抗原修复即可，但是实验过程容易掉片子。
免疫细胞化学是针对细胞的免疫染色，根据细胞是否贴壁生长，可以采用不同的方法制片，如细胞爬片(贴壁生长细胞)，或者甩片(悬浮细胞)。
2.一抗我们一般直接用的是公司的工作液或者用PBS稀释一抗，但是有的公司有专门的抗体稀释液
3.抗体浓度的摸索本人一般是按照抗体说明书，先采用一个最高浓度和一个最低浓度，看看染色效果后再决定如何改进。
细胞免疫化学，是用细胞爬片做的，一抗一般都可以用PBS稀释，IH的一抗浓度一般比IC高一点

我的疑问：
如果做免疫组化检测细胞表面CD分子，很多试剂似乎适用于免疫组化IH和免疫细胞化学IC,有的只能用于IH，没有标明用于IC，不知该如何选择？如果选用同种试剂，方法有何不同？直接问代理商又怕被误导。
不知各位有何体会？

[ 本帖最后由 rxcc33 于 2012-6-28 10:42 编辑 ]

作者: yueban-1147 时间: 2012-6-28 10:43

IH(F)的可以用于IC，IH(P)的不一定。

作者: zsxan1990 时间: 2012-6-28 10:43

IH(F)是什么意思？
组化（流式？）

作者: hold住 时间: 2012-6-28 10:44

IH(F) 组化（冰冻切片）
IH(P) 组化（石蜡切片）

作者: rxcc33 时间: 2012-6-28 10:45

免疫细胞化学该用多少孔板？
不少文献说用6孔，也有用24孔的，但要裁剪盖玻片，
疑问：1.用什么工具来裁剪？
2.细胞爬片用什么特殊的镊子用于取出板孔外？

作者: DDD 时间: 2012-6-28 10:45

我一般把无菌盖玻片用无菌的镊子放到35mm的培养皿中，让细胞爬片，然后再染色，等染色结束后，再用镊子之类的装置倒过来放在玻片上，当然玻片上要有固定基。等干了，固定结实以后放在4度保存。
24孔板，可以做，有一种圆形的小盖玻片可以直接放入的。

作者: toy 时间: 2012-6-28 10:46

请问：似乎很多人强调‘注意爬片哪一面是包被’的，难道可以只包被一面？
制作时不是浸泡么？应该是双面同时包被吧？
一个有点幼稚的问题，嘻嘻。

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-6-28 10:47

我想注意的应该是细胞在哪面吧

作者: toy 时间: 2012-6-28 10:47

请问：似乎很多人强调‘注意爬片哪一面是包被’的，难道可以只包被一面？
制作时不是浸泡么？应该是双面同时包被吧？
一个有点幼稚的问题，嘻嘻。

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我的盖玻片是用poly-L-lysine coated，处理的过程中当然是浸泡，但是细胞只爬到上面，所以一面就够了。

作者: rxcc33 时间: 2012-6-28 10:48

用于IHC的一抗真的可以用于IC么？
像博士德这些公司还好，引用范围分清IHC/IC，但国外诸如biolegend压根就没有出现IC字样，只有IHC(Frozen/ Paraffin)，不敢相信这样诺大的生物公司会不做可以用于IC的一抗！
再者，用于mouse的一抗可以用在rat的抗原检测么？后者的一抗很难找阿！我现在还差CD19、CD45、CD90不知何处购买？
疑惑中，马上要定购试剂了，不知该怎么办才好。

作者: 49888 时间: 2012-6-28 10:48

Q: 用于IHC的一抗真的可以用于IC么？

A: IC是最好做的．基本上用于IHC的一抗都可以用于IC，而且染色步骤更加简单．

Q: 用于mouse的一抗可以用在rat的抗原检测么?

A: 应该可以吧．选多克隆抗体的话应该没问题.

作者: rxcc33 时间: 2012-6-28 10:49

Purified anti-rat/mouse CD90.1 (Thy-1.1)
Catalog Number  Size Price
202501  100 µg $105.00
Information
Clone:  OX-7
Isotype:Mouse IgG1, κ
Immunogen:Rat thymocyte Thy-1 antigen
Reactivity:Rat, Mouse (AKR/J and PL mouse strains).
Cross-Reactivity*: Rabbit (Lapine), Guinea Pig6
Formulation:  Phosphate-buffered solution, pH 7.2, containing 0.09% sodium azide.
Preparation:  The antibody was purified by affinity chromatography.
Storage & Handling:  The antibody solution should be stored undiluted at 4 °C.
Applications:  FC, IHC(Frozen/ Paraffin)1, IP2, WB2
这是biolegend官方网站关于抗大鼠CD90的具体说明，按skinner前辈所说，我应该可以选择这个抗体来做大鼠实验了！
呵呵

作者: 49888 时间: 2012-6-28 10:49

应该可以的．

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