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标题: [求助]细胞成团生长 [打印本页]

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:03 标题: [求助]细胞成团生长

我养的是HCT－116结肠癌细胞株，细胞不多，但成团生长，长不好，今天消化了一下，我用的是不含edta的胰酶，结果吹了不下100次，也没打散！
各位有没有什么好的办法，谢谢！

作者: eric930 时间: 2012-7-3 11:03

加点EDTA试试看，或者适当延长消化时间，提高消化温度。

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:04

QUOTE:

原帖由 eric930 于 2012-7-3 11:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
加点EDTA试试看，或者适当延长消化时间，提高消化温度。

我总共3瓶细胞，每瓶都是苟延残喘过来，总算长活了，都不多，不敢轻举妄动，再让他们长长看

作者: 盼盼 时间: 2012-7-3 11:04

成团的问题：
1、你有没有看看HCT－116结肠癌细胞株本身是否为成团生长呢？从ATCC的提供的照片（bbcodeurl('http://www.atcc.org/common/images/Cells/CCL-247_mg1.jpg', '%s')）以及资料（cuturl('http://www.atcc.org/common/catalog/numSearch/numResults.cfm?atccNum=CCL-247')）看，细胞成团并不是很厉害的；
2、另外，你的细胞是自己复苏还是购买的，如果是自己复苏的，你师兄师姐养过类似的细胞吗？如果是后者，你可以打电话问问你购买的地方或者上海细胞库的老师，即便你不是从他那里买的也可以；
3、可以在园子里搜索，会由收获的。
消化的问题：
1、从你的说明看，会不会是胰酶的浓度问题，也可以考虑可以加点EDTA看看哪；
2、要敢于摸索，实验就是一个摸索的过程。
培养的问题：
1、不知道你的血清浓度是多少，可以把血清浓度提高一点看看。
2、你的细胞从胰开始的状态是怎样的？是不是一开始就出了问题，如果实在不行，考虑重新买过细胞。

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:04

QUOTE:

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成团的问题：
1、你有没有看看HCT－116结肠癌细胞株本身是否为成团生长呢？从ATCC的提供的照片（bbcodeurl('http://www.atcc.org/common/images/Cells/CCL-247_mg1.jpg', '%s')）以及资料（cuturl('http://www.atcc.org/common/catalog/numSearch/numResults') ...

我的细胞是从别人那拿的
带回来的时候，已经长得很满了，而且都挤的快要死了，培养液都变成白色的了
当时回来就给予消化了，不敢狠吹
结果没吹散，传代过后，死了一批，不过还有一批活的,总算保命了

作者: 盼盼 时间: 2012-7-3 11:05

我的细胞是从别人那拿的
带回来的时候，已经长得很满了，而且都挤的快要死了，培养液都变成白色的了
当时回来就给予消化了，不敢狠吹
结果没吹散，传代过后，死了一批，不过还有一批活的,总算保命了

从你的说明看，细胞从一开始状态就不是很好，而且培养基都变白了，实在不行赶快买过吧，或者重新拿过一株，不要再拖了。

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:05

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原帖由盼盼于 2012-7-3 11:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的细胞是从别人那拿的
带回来的时候，已经长得很满了，而且都挤的快要死了，培养液都变成白色的了
当时回来就给予消化了，不敢狠吹
结果没吹散，传代过后，死了一批，不过还有一批活的,总算保命了

从你的说明看，细胞从一开始 ...

因为刚消化结束后，细胞很少，一个镜下就几十个存活，现在我看看，长得还可以，我想让它长起来，能长起来应该没问题，再调理一下。哈哈

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:05

今天又给予消化了一次，给予延长消化时间，增加吹打次数，不少是单个细胞，但仍有不少的细胞仍是4－5聚在一起。不过细胞贴壁倒是蛮快，一小时多一点就有很多贴壁了。我仍然是使用不含edta的胰酶消化的，考虑到edta细胞毒性较大，从前没用过，所以不敢轻举妄动，等细胞长到一定数量，再想想办法！
就目前的情况，希望大家给出好的意见，谢谢！

作者: jkobn 时间: 2012-7-3 11:06

腺癌细胞是很容易成团，而且它分泌粘液，到一定程度会自动成团。你试着加EDTA，消化时间稍短点，沿着壁轻轻吹打后，会发现仍有许多细胞贴壁无法吹下，这时你把细胞悬液放入离心管，1000rpm 3分钟，是可以看见有沉淀的，去上清，重新悬浮沉淀入新的培养瓶。然后轻轻对着瓶底部吹，可以将细胞吹散。
此时，原瓶中未完全消化的细胞可以再次加入胰酶，一分钟左右，时间把握好，待细胞全部消化后，移入新培养瓶。
等你的细胞状态好了后，就不用两次消化了，了解你细胞消化的时间后，一次就行，你试试吧。

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:07

谢谢你的宝贵经验。
我养的另外一株HT－29结肠癌细胞株很好，不大成团的。
不过我发现HCT－116这株细胞生命力还蛮强。我今天把另外一瓶消化了一下，足足吹了有300次，很多已经被吹成单个细胞，另有部分为2－3或4个成团，仍然很快就贴壁了，如果这瓶细胞不会污染的话，应该能长的很好。

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:08

QUOTE:

原帖由 jkobn 于 2012-7-3 11:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

腺癌细胞是很容易成团，而且它分泌粘液，到一定程度会自动成团。你试着加EDTA，消化时间稍短点，沿着壁轻轻吹打后，会发现仍有许多细胞贴壁无法吹下，这时你把细胞悬液放入离心管，1000rpm 3分钟，是可以看见有沉淀的，去上清，重新悬浮 ...

主要现在细胞还很少，如果离心的话，可能都看不到什么细胞。

作者: hyuu 时间: 2012-7-3 11:08

我用的胰酶也不含EDTA，用了两种方法处理过细胞成团：
1、延长消化时间，保证消化的温度，消化结束时，轻轻用培养液将细胞从瓶壁冲下，然后可以稍为用力的将细胞吹散，力量可以稍大一些，但是需要摸索，呵呵。
2。第二种方法是将细胞用1－2ml胰酶浸泡消化，当可见细胞漂浮时，立刻迅速加入培养液终止消化，800－1000rpm离心。弃上清，弹指法敲打离心管外壁将沉淀打散，加入培养液混匀，放入培养瓶中。

此外，处理后要多过一些时间再去看。

个人体会，希望有所帮助。具体操作，请斟酌，还请其他各位大侠指教。

作者: 北风那个吹 时间: 2012-7-3 11:09

我已经用加了edta 的酶进行消化。比从前要好多了，但消化后还是明显的好几个细胞聚在一起，这样影响计数，但细胞长势很好。
我想问一下，细胞长势很好，消化后不能成为单个细胞，影响做试验吗？

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